核因子－κB在宮頸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

范艷燕

（南京醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院東院／南京市第三醫(yī)院婦產(chǎn)科 210003）

宮頸癌是女性生殖道惡性腫瘤發(fā)病率最高的腫瘤，在所有女性癌瘤中也僅居乳腺癌之后，嚴(yán)重危害婦女健康。據(jù)2000年世界范圍內(nèi)統(tǒng)計(jì)，每年全世界約有50萬(wàn)新發(fā)病例；而中國(guó)每年的新發(fā)病例為13萬(wàn)以上，每年有2～3萬(wàn)婦女死于宮頸癌?？梢?jiàn)臨床上迫切需要更新、更可靠的宮頸癌腫瘤標(biāo)記物作為評(píng)價(jià)預(yù)后及指導(dǎo)治療的指標(biāo)。本研究通過(guò)檢測(cè)宮頸癌患者腫瘤細(xì)胞胞核中核因子－κB（NF－κB）p65的表達(dá)來(lái)探討其臨床意義。

1 臨床資料

1.1 研究對(duì)象 選擇1998年1月1日至2008年8月31日在南京市第三醫(yī)院婦產(chǎn)科住院行手術(shù)治療的宮頸癌患者43例，術(shù)前均無(wú)化、放療及其他治療史，所有患者不合并其他炎癥疾病。年齡35～67歲，中位48歲。臨床分期按國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）2000年標(biāo)準(zhǔn)［1］：Ⅰa期9例，Ⅰb期20例，Ⅱa期14例；病理分級(jí)：高分化（G1）14例，中分化（G2）18例，低分化（G3）11例；病理類(lèi)型：鱗癌38例，腺癌5例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例。選擇同期在此因?qū)m頸上皮內(nèi)瘤樣病變（CIN）行宮頸錐切術(shù)的病例32例（CINⅠ15例，CINⅡ8例，CINⅢ9例）和在門(mén)診行宮頸活檢術(shù)為正常宮頸者43例作為對(duì)照。所有病例標(biāo)本均經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診。標(biāo)本經(jīng)甲醛固定常規(guī)石蠟包埋，5μm連續(xù)切片。

1.2 試劑 NF－κBp65兔抗人單克隆抗體購(gòu)自福建邁新公司，二氨基聯(lián)苯胺（DAB）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，Envision試劑盒購(gòu)自美國(guó)DAKO公司。

1.3 檢測(cè)方法 免疫組化染色采用Envision二步法［2］。常規(guī)脫蠟，放入枸櫞酸鈉緩沖溶液（10mmol／L，pH6.0）中，微波爐170W加熱16min抗原修復(fù)。滴加NF－κBp65抗體4℃過(guò)夜。用磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4）漂洗10min，山羊抗兔Envision二抗（1∶100）37℃孵育30min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，常規(guī)脫水，透明，封片。用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，用已知骨髓瘤組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判定 免疫組化結(jié)果判定：陽(yáng)性細(xì)胞為胞漿或胞核著色呈黃色［3］。NF－κBp65亞單位在腫瘤細(xì)胞漿、細(xì)胞核均有表達(dá)，因?yàn)榛罨膒65蛋白只有進(jìn)入細(xì)胞核才能發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用，故陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)以核染色為準(zhǔn)［4］。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 NF－κBp65的表達(dá)量采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 NF－κBp65的表達(dá) NF－κBp65在宮頸癌、CINⅢ、CINⅡ、CINⅠ和正常宮頸組織的表達(dá)陽(yáng)性率分別為67.4%（29／43）、66.7%（6／9）、25.0%（2／8）、6.7%（1／15）、0%（0／43）。正常宮頸組與CINⅠ組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝0.31，P＞0.05）；CINⅠ組與 CINⅡ組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝0.27，P＞0.05）；CINⅡ組與CINⅢ組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝1.49，P＞0.05）；CINⅢ組與宮頸癌組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝0.39，P＞0.05），宮頸癌組與正常宮頸組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝54.52，P＜0.001），宮頸癌組與正常宮頸組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝54.52，P＜0.001），見(jiàn)表1。

2.2 NF－κBp65表達(dá)與臨床病理關(guān)系 NF－κBp65在Ⅰa期的表達(dá)陽(yáng)性率為33.3%，Ⅰb期為65.0%，Ⅱa期為92.9%，三者兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在G1～2的表達(dá)陽(yáng)性率為57.1%，G3為72.4%，二者比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝0.472，P＞0.05）；在鱗癌中的表達(dá)陽(yáng)性率為68.4%，腺癌為60.0%，二者比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝0.017，P＞0.05）；在無(wú)盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的表達(dá)陽(yáng)性率為43.8%，盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者為81.5%，二者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝6.511，P＜0.05），見(jiàn)表2。

表1 NF－κBp65在宮頸癌、CIN和正常宮頸組織的表達(dá)

表2 NF－κBp65表達(dá)與臨床病理的關(guān)系

3 討 論

腫瘤發(fā)病機(jī)制在分子生物學(xué)領(lǐng)域的研究證明許多基因及細(xì)胞因子在宮頸癌的演進(jìn)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。近年來(lái)對(duì)NF－κB進(jìn)行的大量研究發(fā)現(xiàn)，其是具有多向性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用的序列特異性DNA結(jié)合蛋白，調(diào)控多種基因的表達(dá)，參與細(xì)胞增殖、凋亡及細(xì)胞因子的產(chǎn)生［5］。

NF－κB是1986年Sen和Baltimore首先從B淋巴細(xì)胞核抽提物中檢驗(yàn)出的［6］，是由兩個(gè)亞單位構(gòu)成的二聚體復(fù)合物。其中由p65和p50或p52亞單位構(gòu)成的異二聚體幾乎存在于所有真核細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞未受到刺激時(shí)，NF－κB二聚體與其抑制物結(jié)合，不具有調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的能力［7］。當(dāng)細(xì)胞受到內(nèi)毒素、過(guò)氧化物、細(xì)胞毒素、紫外線、離子射線等細(xì)胞外信號(hào)刺激時(shí)，NF－κB被“釋放”，迅速?gòu)募?xì)胞質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核，參與細(xì)胞因子、趨化因子、生長(zhǎng)因子、急性期蛋白、免疫受體、轉(zhuǎn)錄因子等基因的轉(zhuǎn)錄［8］，影響細(xì)胞增殖、凋亡，參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，同時(shí)影響抗腫瘤細(xì)胞毒性藥物及離子輻射的敏感性。

本研究結(jié)果顯示，NF－κBp65在宮頸癌、CIN和正常宮頸組織表達(dá)陽(yáng)性率有明顯差異；在宮頸癌中，Ⅰa期、Ⅰb期和Ⅱa期三者比較，表達(dá)陽(yáng)性率有明顯差異，盆腔有、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達(dá)陽(yáng)性率有明顯差異，說(shuō)明NF－κB與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移有關(guān)，并在其中起重要的調(diào)節(jié)作用。提示利用測(cè)定NF－κBp65含量，可以預(yù)測(cè)疾病嚴(yán)重程度及預(yù)后。本研究結(jié)果顯示，正常宮頸組與CINⅠ組、CINⅠ組與CINⅡ組、CINⅡ組與CINⅢ組、CINⅢ組與宮頸癌組兩兩比較，NF－κBp65表達(dá)均無(wú)明顯差別，可能尚需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究，但也從另一個(gè)側(cè)面說(shuō)明宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)循序漸進(jìn)的過(guò)程。早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療、積極治療癌前病變可以阻斷宮頸癌的發(fā)生。

目前關(guān)于NF－κB在宮頸癌各個(gè)病理分級(jí)中的表達(dá)是否存在差異的報(bào)道各不相同。本研究結(jié)果顯示，NF－κBp65在宮頸癌中的表達(dá)與病理分級(jí)無(wú)關(guān)，要明確NF－κBp65表達(dá)與宮頸癌病理分級(jí)的關(guān)系可能尚需要更大的樣本量來(lái)解決。宮頸鱗癌和腺癌之間的表達(dá)陽(yáng)性率無(wú)明顯差異，這一方面可能因?yàn)槿祟?lèi)乳頭瘤病毒（HPV）是宮頸癌（無(wú)論鱗癌還是腺癌）發(fā)生的關(guān)鍵因素，所以?xún)烧叨贾饕鞘蹾PV刺激，使受抑制的NF－κB活化，參與腫瘤的發(fā)生；另一方面可能是因?yàn)镹F－κB幾乎存在于所有真核細(xì)胞里，參與多種轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)，所以無(wú)論是在鱗癌細(xì)胞里還是在腺癌細(xì)胞里也都廣泛存在，導(dǎo)致NF－κB在鱗癌和腺癌之間的表達(dá)陽(yáng)性率無(wú)差別。

總之，有可能通過(guò)免疫組化檢測(cè)方法篩選宮頸癌陽(yáng)性患者，指導(dǎo)臨床宮頸癌患者個(gè)體化治療方案的選擇，進(jìn)一步將導(dǎo)向化療及靶向治療的觀念引入宮頸癌新輔助化療領(lǐng)域，為抗腫瘤提供一個(gè)新的途徑。

［1］ 顧美皎.臨床婦產(chǎn)科學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：885.

［2］ 馬丁，奚玲.宮頸癌流行病學(xué)及病因?qū)W研究進(jìn)展［J］.實(shí)用婦產(chǎn)科雜志，2001，17（5）：61.

［3］ Pahl HL.Activator and targetgenes of Rel／NF－κB transcription factors［J］.Oncogene，1999，18（49）：6853.

［4］ Bhartia AC，Aggarwal BB.Nuclear factor kappa B and cancer：Its role in prevention and therapy［J］.Bicchen Phamacol，2002，64（6）：883.

［5］ Sen R，Baltimore D.Multiple nuclear factors interact with the immunoglobulin enhancer sequence［J］.Cell，1986，46（5）：707.

［6］ Mercurio F，Manning AM.Mutiple signals cinvering on NF－κB［J］.Current Opinion in Cell biology，1999，11（2）：226.

［7］ Sen R，Baltimore D.Multiple nuclear factors interact with the immunoglobulin enhancer sequence［J］.Cell，1986，46（5）：707.

［8］ Karin M，Ben－Neriah Y.Phosphorylation meets ubquitination.the control of NF－κB activity［J］.Annu Rev Immunol，2002，18（4）：621.