蛹蟲(chóng)草對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠腦、肝組織氧化酶的影響

楊占軍，張 健，湯 陽(yáng)，溫 魯

蛹蟲(chóng)草對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠腦、肝組織氧化酶的影響

楊占軍，張 健，湯 陽(yáng)，溫 魯

(淮陰師范學(xué)院生命科學(xué)院， 江蘇 淮安 223300)

目的：以衰老相關(guān)酶為指標(biāo)，探討蛹蟲(chóng)草對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠的影響。方法：使用D-半乳糖建立小鼠衰老模型，用蛹蟲(chóng)草灌胃進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性治療。持續(xù)6 周后，測(cè)定腦和肝組織的總抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、單胺氧化酶(MAO)活性和丙二醛(MDA)含量。結(jié)果：與對(duì)照組相比，模型組小鼠的T-AOC、GSH-Px活性降低，MAO活性和MDA含量升高(P＜0.05或 P＜0.01)，說(shuō)明造模成功；與模型組相比，蛹蟲(chóng)草組的T-AOC、GSH-Px活性有不同程度地恢復(fù)，MAO活性和MDA含量降低(P＜0.05)。結(jié)論：蛹蟲(chóng)草可提高小鼠腦、肝組織的抗氧化能力。

蛹蟲(chóng)草；D-半乳糖；衰老；氧化酶

冬蟲(chóng)夏草是我國(guó)的名貴中藥，由于過(guò)度采集，野生資源日漸枯竭。多年來(lái)，人們一直致力于在蟲(chóng)草屬中尋找替代品。蛹蟲(chóng)草是一類(lèi)具有保健功效的大型藥用真菌，與冬蟲(chóng)夏草有著類(lèi)似的化學(xué)成分和醫(yī)療保健功效，可以作為冬蟲(chóng)夏草的替代品[1-2]。資料表明蛹蟲(chóng)草可以延緩衰老[3]、增強(qiáng)免疫力[4]、抗腫瘤，具有廣泛的藥理作用，本實(shí)驗(yàn)室的研究也發(fā)現(xiàn)蛹蟲(chóng)草可提高衰老小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力[5]。在對(duì)小鼠補(bǔ)充蛹蟲(chóng)草后，與衰老有關(guān)的總抗氧化能力(T-AOC)、單胺氧化酶(MAO)活性和丙二醛(MDA)含量有何變化還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道；此外有關(guān)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)含量變化的報(bào)道也很少。本研究將對(duì)以上幾個(gè)方面進(jìn)行研究，旨在為蛹蟲(chóng)草功能開(kāi)發(fā)、利用以及作用機(jī)制的探討提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

昆明種小鼠由中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；蛹蟲(chóng)草由江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)應(yīng)用微生物研究所提供，60℃烘干(含水量＜1.0%)、磨粉過(guò)100目篩后作為供試材料。

D-半乳糖由上海試劑二廠提供，用生理鹽水配制成30g/L的溶液待用；T-AOC試劑盒、GSH-Px試劑盒、MAO試劑盒、MDA試劑盒、考馬斯亮藍(lán)試劑盒 南京建成生物工程研究所。

1.2 動(dòng)物與分組

昆明種健康的小鼠48只，體質(zhì)量10～12g，清潔級(jí)，將小鼠分為4組，每組12只，雌雄各半；模型組：按照0.3g/(kg bw·d)的劑量頸部注射 D-半乳糖溶液1次，同時(shí)用與蛹蟲(chóng)草組等體積的生理鹽水灌胃1次；蛹蟲(chóng)草Ⅰ組：按照0.3g/(kg bw·d)的劑量頸部皮下注射D-半乳糖溶液，同時(shí)用0.25g/(kg bw·d)劑量的蛹蟲(chóng)草溶液灌胃；蛹蟲(chóng)草Ⅱ組：按照0.3g/(kg bw·d)的劑量頸部皮下注射D-半乳糖溶液，同時(shí)用0.5g/(kg bw·d)劑量的蛹蟲(chóng)草溶液灌胃；對(duì)照組：按上述同樣劑量生理鹽水頸部皮下注射和灌胃。在飼養(yǎng)過(guò)程中，動(dòng)物正常進(jìn)食，每周稱(chēng)質(zhì)量一次。持續(xù)6周后，對(duì)動(dòng)物進(jìn)行生化檢測(cè)。

1.3 小鼠腦和肝組織T-AOC、GSH-Px、MAO活性和MDA含量的測(cè)定

將小鼠頸椎拉斷處死，冰盒上開(kāi)顱，迅速取出腦、肝組織，稱(chēng)質(zhì)量，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)腦和肝組織的各氧化酶活性進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)用x±s表示，采用SPSS12.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 腦組織T-AOC、GSH-Px活性、MAO活性和MDA含量的測(cè)定結(jié)果

表1 各組小鼠腦組織T-AOC、GSH-Px活性、MAO活性和MDA含量測(cè)定結(jié)果(x±s，n＝12)Table 1 Effect of Cordyceps militaris on the activities of T-AOC, GSHPx and MAO and the content of MDA in brain tissue of D-galactoseinduced senile mice (x±s, n＝12)

由表1可見(jiàn)，與對(duì)照組相比，模型組T-AOC、GSHPx的活性降低，MAO活性、MDA含量增加，其差異性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；當(dāng)補(bǔ)充蛹蟲(chóng)草后，與模型組相比，除蛹蟲(chóng)草Ⅰ組的T-AOC外，蛹蟲(chóng)草組的T-AOC、GSH-Px活性升高，MAO活性、MDA含量降低，差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 肝組織T-AOC、GSH-Px活性、MAO活性和MDA含量的測(cè)定結(jié)果

表2 各組小鼠肝組織T-AOC、GSH-Px活性、MAO活性和MDA含量測(cè)定結(jié)果(x±s，n＝12)Table 2 Effect of Cordyceps militaris on the activities of T-AOC, GSH-Px and MAO and the content of MDA in liver tissue of D-galactose-induced senile mice (x±s, n＝12)

由表2可知， 與對(duì)照組相比，模型組的T-AOC、GSH-Px的活性降低，MAO活性、MDA含量增加，其差異性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)；當(dāng)補(bǔ)充蛹蟲(chóng)草后，與模型組相比，除蛹蟲(chóng)草Ⅰ組的T-AOC、GSH-Px、MAO活性外，蛹蟲(chóng)草組的T-AOC、GSH-Px活性升高，MAO活性、MDA含量降低，差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)主要目的在于研究蛹蟲(chóng)草對(duì)于D-半乳糖所致衰老小鼠腦、肝組織中幾種主要氧化酶水平的影響。結(jié)果表明：蛹蟲(chóng)草可以提高小鼠腦、肝組織的抗氧化能力，即增強(qiáng)T-AOC、GSH-Px酶活性；同時(shí)使衰老相關(guān)的MAO活性和MDA含量降低。這幾種酶活性的變化，可能是蛹蟲(chóng)草提高學(xué)習(xí)記憶能力、改善腦功能、延緩衰老的分子生物學(xué)基礎(chǔ)。

在模型組中，與抗衰老呈正相關(guān)的T-AOC、GSH-Px酶活性降低，而與衰老呈正相關(guān)的MAO活性和MDA含量增加，表明建模成功[6-7]。當(dāng)補(bǔ)充蛹蟲(chóng)草后，T-AOC、GSH-Px活性又得到恢復(fù)，MAO活性和MDA含量又降低。有文獻(xiàn)報(bào)道[3,8-9]：蛹蟲(chóng)草可使腦或機(jī)體組織的GSH-Px、SOD、鈉-鉀-三磷酸腺苷酶(Na-K-ATP酶)等具有抗氧化活性的酶活性提高。在蛹蟲(chóng)草改善衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙、延緩衰老的過(guò)程中，上述酶類(lèi)具有重要作用。蛹蟲(chóng)草營(yíng)養(yǎng)豐富，除一般成分外，還含有蟲(chóng)草素、蟲(chóng)草酸和生物堿等活性成分，其中的某些物質(zhì)可能通過(guò)多種代謝途徑，直接或間接影響著與衰老有關(guān)的酶。蛹蟲(chóng)草通過(guò)種種途徑增強(qiáng)了機(jī)體的抗氧化酶活性，減弱了脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，有效清除了過(guò)量的自由基，可能通過(guò)這些途徑改善了腦功能。

蛹蟲(chóng)草對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠模型的影響是多方面的，除腦、肝組織T-AOC、GSH-Px、MAO活性和MDA含量發(fā)生變化外，還可能有其他酶、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)產(chǎn)生變化，其作用機(jī)制需要進(jìn)一步研究。

[1]彭國(guó)平, 李紅陽(yáng), 袁永泰. 冬蟲(chóng)夏草與人工蛹蟲(chóng)草的成分比較[J]. 南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 1996, 12(5): 26-27.

[2]貢成良, 吳友良. 家蠶蛹蟲(chóng)草的人工培育及成分分析[J]. 中國(guó)食用菌, 1994, 12(4): 21-23.

[3]張桂英, 王寶貴, 趙林伊, 等. 柞蠶蛹蟲(chóng)草對(duì)黑腹果蠅壽命的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志, 2002, 22(2): 148-150.

[4]張桂英, 王寶貴, 趙林伊. 柞蠶蛹蟲(chóng)草對(duì)小鼠免疫功能的影響[J]. 中國(guó)公共衛(wèi)生, 2004, 20(2): 230-231.

[5]楊占軍, 張健, 湯陽(yáng), 等. 蛹蟲(chóng)草對(duì)D-半乳糖模型鼠記憶能力的影響[J]. 食品科學(xué), 2010, 31(11): 252-254.

[6]崔旭, 李文斌, 張彪烈, 等. D-半乳糖腦老化模型脂質(zhì)過(guò)氧化機(jī)理[J]. 中國(guó)老年學(xué)雜志, 1998(1): 38-40.

[7]李文彬, 韋豐, 范明, 等. D-半乳糖在小鼠上誘導(dǎo)的擬老化效應(yīng)[J].中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志, 1995(2): 93-95.

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[9]張桂英, 王寶貴, 趙林伊, 等. 柞蠶蛹蟲(chóng)草對(duì)老齡大鼠LPO含量和SOD、GSH-Px活性的影響[J]. 中國(guó)中藥雜志, 2001, 21(2): 734-735.

Effect of Cordyceps militaris on Oxidases in Brain and Liver Tissues of D-Galactose-induced Senile Mice

YANG Zhan-jun，ZHANG Jian，TANG Yang，WEN Lu
(School of Life Science, Huaiyin Normal University, Huai’an 223300, China)

Objective: The enzymes related to aging were used as the indexes to explore the effect of Cordyceps militaris on D-galactose-induced senile mice. Methods: A mouse model with senile disturbance of brain tissue was established by D-galactose induction and the experimental mice were treated with Cordyceps militaris by gavage. After the administration of Cordyceps militaris for six weeks, the activities of T-AOC, GSH-Px, MAO and the content of MDA in brain and liver tissues were analyzed. Results: Compared with the control group, the activities of T-AOC and GSH-Px of the model group exhibited an obvious decrease, and the activity of MAO and the content of MDA exhibited a significant increase (P ＜ 0.05 or P ＜ 0.01). Compared with the model group, the activities of T-AOC and GSH-Px in mice administered with Cordyceps militaris was ameliorated, and the activity of MAO and the content of MDA exhibited an obvious decrease (P ＜ 0.05). Conclusion: Cordyceps militaris can improve the antioxidant capability of brain and liver tissues.

Cordyceps militaris；D-galactose；senile；oxidase

TQ929.2

A

1002-6630(2010)19-0339-03

2009-12-14

江蘇省高校自然科學(xué)基金項(xiàng)目(05KJB180010)；淮陰師范學(xué)院教授基金項(xiàng)目(06HSJS027)

楊占軍(1957—)，男，教授，碩士，主要從事腦功能與益智物質(zhì)的研究。E-mail：yzj5678@163.com