• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    羅非魚多肽-鋅配合物的制備及其生物活性

    2010-09-13 03:57:34許慶陵曾慶祝林金鶯顧采琴樊亞鳴黃儒強(qiáng)
    食品科學(xué) 2010年10期
    關(guān)鍵詞:羅非魚多肽水解

    許慶陵,曾慶祝,*,閆 磊,林金鶯,顧采琴,戰(zhàn) 宇,樊亞鳴,黃儒強(qiáng)

    (1.廣州大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院食品工程系,廣東 廣州 510006;2.廣州陸仕水產(chǎn)有限公司,廣東 廣州 510820;3.華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物工程系,廣東 廣州 510631)

    羅非魚多肽-鋅配合物的制備及其生物活性

    許慶陵1,曾慶祝1,*,閆 磊2,林金鶯1,顧采琴1,戰(zhàn) 宇1,樊亞鳴1,黃儒強(qiáng)3

    (1.廣州大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院食品工程系,廣東 廣州 510006;2.廣州陸仕水產(chǎn)有限公司,廣東 廣州 510820;3.華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物工程系,廣東 廣州 510631)

    目的:探索羅非魚多肽-鋅配合物的制備工藝條件,并通過動物實驗測試其生物活性。方法:比較影響蛋白多肽與鋅發(fā)生配合反應(yīng)的因素,篩選適宜工藝條件,采用光譜法對配合物結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步鑒定,并以小鼠為動物實驗對象,選擇超氧化物歧化酶活力、氧化型谷胱甘肽還原酶活力、巨噬細(xì)胞吞噬百分率、超氧陰離子自由基清除率為指標(biāo),確定配合物的體內(nèi)外生物活性。結(jié)果:蛋白多肽-鋅配合物制備的適宜工藝條件為pH5.0、溫度80℃、蛋白質(zhì)的水解度15%、多肽與Zn的質(zhì)量比為4:1,制備配合物的得率約為54%、Zn的配合率為55%,配合物中鋅含量為6.5×104mg/kg;配合物的光譜特征峰證實多肽與Zn2+生成了一種新型配合物;配合物能顯著增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬能力、顯著提高小鼠肝組織勻漿中SOD和腎組織中氧化型谷胱甘肽還原酶的活力,并對體外超氧陰離子自由基有很好的清除效果。結(jié)論:多肽與Zn2+在一定條件下通過配合作用生成多肽-鋅配合物,該配合物具有提高小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力、提高超氧化物歧化酶和氧化型谷胱甘肽還原酶活力、清除氧自由基等生物活性。

    羅非魚;多肽-鋅配合物;制備:生物活性

    Abstract:The preparation procedure of Zn (Ⅱ)–tilapia peptide complexes was investigated by single factor design method.Along with this, the complexes were structurally characterized and their biological activities were tested by measuring their effects on kidney GSH-Px and hepatic SOD activities and the percentage of macrophages engaged in phagocytosis in mice and in vitro superoxide anion free radical scavenging activity. Results showed that the optimal reaction conditions for the preparation of Zn (Ⅱ)–tilapia peptide complexes were as follows: pH 5.0 and 80 ℃ for a reaction between Zn (Ⅱ) and tilapia peptides contained in the tilapia meat hydrolysate with 15% degree of hydrolysis. Under such conditions, the yield of Zn (Ⅱ)–tilapia peptide complexes with a Zn content of 6.5 × 104mg/kg reached up to 54% and Zn exhibited a chelation rate of 55%. Spectral characteristics demonstrated the formation of new complexes from Zn (Ⅱ) and tilapia peptides. The complexes remarkably increased the percentage of macrophages engaged in phagocytosis and hepatic SOD and kidney GSH-Px in mice and exhibited an excellent superoxide anion free radical scavenging activity.

    Key words:tilapia;Zn (Ⅱ)– tilapia peptide complexes;preparation;biological activity

    2007年,我國羅非魚(tilapia)年產(chǎn)量為121萬噸,占世界總產(chǎn)量的一半以上。羅非魚主要用于加工冷凍魚片出口歐美市場。由于羅非魚體形較扁,制造魚片的利用率只有整條魚的46%左右,而下腳料則高達(dá)54%以上[1]。這些下腳料主要包括魚片修整時切下的邊角魚肉、帶肉魚骨、魚頭、魚皮、魚鱗及內(nèi)臟等,至今仍未得到有效合理利用,不僅浪費(fèi)了蛋白質(zhì)資源,還造成嚴(yán)重的環(huán)境污染。

    Zn作為人和動物必需的微量元素之一,被稱為生命元素。Zn與蛋白多肽結(jié)合形成多肽–鋅配合物(有機(jī)鋅)以后,在提高動物生長繁殖、增強(qiáng)抗病免疫力、調(diào)節(jié)生理代謝等方面都有重要生理作用[2-4]。有關(guān)蛋白多肽-鋅配合物的制備及其生物功能活性的研究報道不多,張亞麗[5]研究了大豆多肽絡(luò)合鋅的制備工藝條件,并通過體外實驗測試了所制備的多肽絡(luò)合鋅對油脂的抗氧化性;高素蘊(yùn)等[6]報道了大豆分離蛋白水解物絡(luò)合鋅的制備工藝條件及影響絡(luò)合反應(yīng)的因素;許慶陵等[7]介紹了合成鋅-大豆多肽配合物的影響因素。Torreggiani等[2]研究了肌肽與Zn(Ⅱ)、Cu(Ⅱ)、Co(Ⅱ)形成金屬配合物的結(jié)構(gòu)特征,并報道了肌肽螯合鋅對胃潰瘍的療效、肌肽螯合鐵對體液和組織中鐵離子濃度的調(diào)節(jié)作用、以及抑制鐵離子催化誘導(dǎo)的氧化反應(yīng)等生物活性;Hirokazu等[3]研究結(jié)果表明,一種抗艾滋病多肽T22與Zn(Ⅱ)形成配合物以后,其抗艾滋病活性得到了很大程度提高,并對Zn-T22配合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步鑒定。Vogler等[8]介紹了含有二個半胱氨酸殘基的二肽和三肽分別與Zn形成配合物的技術(shù)方法,并對所形成配合物的結(jié)構(gòu)及理化特性進(jìn)行了測試??v觀國內(nèi)外文獻(xiàn)資料,有關(guān)以魚蛋白為原料制備多肽以及多肽-鋅配合物,并探索其生物活性、表征其分子結(jié)構(gòu)等相關(guān)研究報道不多。本文在前期研究基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探討羅非魚水解蛋白多肽與鋅(Zn)作用生成羅非魚多肽-鋅配合物(簡稱多肽-鋅配合物)的制備工藝及其生物活性,以期對羅非魚的高值化利用及多肽-微量元素配合物的研究有一定的參考價值。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    昆明小鼠[40只,雄性,平均體質(zhì)量(20±2)g]、基礎(chǔ)飼料(未加鋅) 廣州中醫(yī)藥大學(xué)試驗動物中心。

    Alcalase 2.4L FG、Neutrase、Flavourzyme 天津諾維信生物技術(shù)有限公司;木瓜蛋白酶 廣州華琪生物科技有限公司;枯草桿菌中性蛋白酶 廣西南寧龐博生物工程有限公司;GSH-Px試劑盒、SOD試劑盒 南京建成生物工程研究所;藍(lán)色葡聚糖2000、Giemsa(吉姆薩)染料 北京鼎國生物技術(shù)有限責(zé)任公司;牛血清白蛋白、細(xì)胞色素C、氧化型谷胱甘肽 上海源聚生物科技有限公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    DBS-100電腦全自動部分收集器 上海滬西分析儀器廠有限公司;PHS-25數(shù)顯pH計 上海精密科學(xué)儀器有限公司;UV2300紫外-可見分光光度計 上海天美科學(xué)儀器有限公司;ALLEGRA-64R冷凍離心機(jī) 上海科峻儀器公司;TENSOR 27型紅外光譜儀 德國 Bruker光譜儀器公司。

    1.3 方法

    1.3.1 工藝流程

    魚蛋白多肽的制備[9-10]:按魚肉:水=1:3(m/m)配制水解底物→55℃預(yù)熱并維持恒溫→調(diào)節(jié)pH值→加入Alcalase蛋白酶→酶解(條件為pH9.5、55℃、時間3h)→酶滅活→離心→過濾→真空濃縮→冷凍干燥→多肽樣品。

    多肽-鋅配合物的制備:用多肽樣品配制一定濃度的多肽溶液→調(diào)節(jié)pH值→加入一定量鋅(Zn2+)溶液→合成反應(yīng)→沉降分離→沉淀物干燥→多肽-鋅配合物成品(每次均設(shè)置3個平行組)。

    1.3.2 測定方法

    配合率:采用EDTA-Na2滴定法測定鋅的配合率[8],計算公式為:鋅的配合率/%=m1/m0×100,式中,m0為加入反應(yīng)體系中的鋅量/g,m1為配合物中的鋅質(zhì)量/g;蛋白含量:采用凱氏定氮法[11];肽含量:采用雙縮尿法[12];配合物結(jié)構(gòu)特征:紅外光譜儀法[13]。

    1.3.3 實驗設(shè)計及指標(biāo)測定

    40只小鼠隨機(jī)分為4組,每組10只,放在一個鼠籠中飼養(yǎng),鼠籠規(guī)格22cm×18cm×16cm。小鼠分組為:①對照組,每天灌胃生理鹽水0.4mL;②低劑量組,每天灌胃質(zhì)量濃度為0.25mg/mL的魚蛋白多肽-鋅配合物(魚蛋白多肽-鋅配合物中鋅含量為6.5×104mg/kg)溶液0.4mL;③中劑量組,每天灌胃質(zhì)量濃度為0.5mg/mL的魚蛋白多肽-鋅配合物溶液0.4mL;④高劑量組,每天灌胃質(zhì)量濃度為1.0mg/mL的魚蛋白多肽-鋅配合物溶液0.4mL。小鼠自由進(jìn)食基礎(chǔ)飼料及飲水。飼養(yǎng)30d,飼養(yǎng)結(jié)束后,每組采集7只小鼠平行進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的檢測。

    SOD和GSH-Px活力測定:按照說明書方法分別測定肝組織SOD和腎組織GSH-Px活力。

    巨噬細(xì)胞吞噬百分率測定:往小鼠腹腔內(nèi)注射滅菌肉湯培養(yǎng)基1mL(巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)劑)→24h后再注射1%雞紅細(xì)胞懸液1mL→間隔30min,頸椎脫臼處死小鼠→將其仰臥固定于鼠板上,正中剪開腹壁皮膚,經(jīng)腹腔注入生理鹽水2mL,輕揉腹部1min→然后吸出腹腔洗液1mL,于2片載玻片上涂勻→移置37℃孵箱溫育30min→孵畢,于生理鹽水中漂洗,以除去未貼片細(xì)胞→晾干→以1:1丙酮甲醇溶液固定5min→1:10(V/V) Giemsa-磷酸緩沖液染色30min→再用蒸餾水漂洗→晾干→顯微鏡下觀察巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的情況。通過顯微鏡計數(shù)巨噬細(xì)胞,每張片計數(shù)100個,按下式計算吞噬百分率。

    配合物對超氧自由基的清除率測定:鄰苯三酚比色法[14]。

    1.3.4 統(tǒng)計分析

    采用SPSS 17.0軟件包中的ANOVA過程進(jìn)行方差分析,多重比較選用LSD法和Tamhanes T2法。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 影響多肽與Zn2+配合反應(yīng)的因素

    2.1.1 反應(yīng)溫度對配合反應(yīng)的影響

    設(shè)定pH7,多肽與Zn的質(zhì)量比為4:1,反應(yīng)時間30min,溫度分別為30、40、50、60、70、80、90、100℃等條件下,多肽與鋅反應(yīng)生成多肽-鋅配合物的得率及配合率見圖1。

    圖1 反應(yīng)溫度對配合反應(yīng)的影響Fig.1 Effect of reaction temperature on Zn (Ⅱ)-tilapia peptide complexes yield and the percentage of Zn engaged in chleation

    從圖1可看出,在80℃以下,隨著反應(yīng)溫度的逐漸上升,多肽-鋅配合物的得率及Zn2+的配合率都不斷增加,到80℃以后,得率增加緩慢,而配合率則稍有降低。說明溫度對配合反應(yīng)有影響,溫度升高有利于多肽與Zn2+的接觸與結(jié)合,但溫度過高,可能使分子運(yùn)動加快反而不利于多肽與Zn2+的結(jié)合作用。因此,選定80℃作為反應(yīng)的適宜溫度。

    2.1.2 反應(yīng)時間對配合反應(yīng)的影響

    在pH7,多肽與鋅的質(zhì)量比為4:1,溫度為80℃,反應(yīng)時間分別為10、20、30、40、50、60、70、80min等條件下,多肽與鋅發(fā)生配合反應(yīng)生成多肽-鋅配合物的得率及配合率見圖2??梢钥闯觯?0min之前,反應(yīng)速度很快,隨著時間的增加,得率及配合率都得到快速提高,當(dāng)時間達(dá)到30min以后,得率及配合率增幅很低,基本不再增加。因此,說明多肽與鋅的配合反應(yīng)速度較快,在30min內(nèi)能夠基本完成。因此,反應(yīng)時間選擇30min即可。

    圖2 反應(yīng)時間對配合反應(yīng)的影響Fig.2 Effect of reaction time on Zn (Ⅱ)-tilapia peptide complexes yield and the percentage of Zn engaged in chleation

    2.1.3 pH值對配合反應(yīng)的影響

    圖3 pH值對鋅配合率的影響Fig.3 Effect of pH on Zn (Ⅱ)-tilapia peptide complexes yield and the percentage of Zn engaged in chleation

    由圖3可以看出,pH值對得率及配合率都有較大影響。其中,pH5時得率及鋅配合率已達(dá)最高。當(dāng)pH值超過7,由于產(chǎn)生Zn(OH)2沉淀,同時溶液中的部分蛋白多肽也會被沉淀,導(dǎo)致溶液中蛋白多肽和游離Zn2+的含量均有所減少,鋅的配合率降低。當(dāng)pH值小于5時,得率及鋅配合率也不高,可能是H+濃度增加不利于Zn2+與多肽分子之間的結(jié)合。因此,選定pH5作為制備的適宜酸度。

    2.1.4 蛋白水解度(DH)對配合反應(yīng)的影響

    圖4顯示,蛋白質(zhì)的水解度對配合物的得率有影響,隨DH的升高,得率緩慢降低。相比之下,水解度對Zn配合率的影響較大,水解度越大,Zn配合率越高。由于蛋白質(zhì)的水解度與多肽分子質(zhì)量分布有密切關(guān)系,一般來講,水解度越大,多肽的平均分子質(zhì)量就越小,多肽與Zn2+的配合作用更加容易,因而Zn配合率會逐漸增加。而得率降低可能是由于小肽太多,其總含量超過了與Zn2+配合的適宜比例,那么配合物的得率就相對降低。當(dāng)水解度達(dá)到15%以后,鋅配合率增加幅度不大。因此,綜合考慮,選擇水解度15%為宜。

    圖4 水解度對鋅配合率的影響Fig.4 Effect of protein hydrolyzing degree on Zn (Ⅱ)-tilapia peptide complexes yield and the percentage of Zn engaged in chleation

    2.1.5 多肽與鋅的質(zhì)量比對配合反應(yīng)的影響

    在適宜溫度及時間、水解度為15%的條件下,多肽與鋅的質(zhì)量比對多肽-鋅配合物的得率及配合率的影響見圖5??梢钥闯?,多肽與鋅質(zhì)量比對得率及配合率的影響都較大。當(dāng)多肽與鋅質(zhì)量比低時,多肽分子中的配位基團(tuán)與Zn2+之間接觸機(jī)會減少,得率及配合率不高。多肽與鋅質(zhì)量比增加,得率及配合率也相應(yīng)有所提高,當(dāng)多肽與鋅的質(zhì)量比為4:1時,得率及鋅配合率最高,分別為55%和54%。隨著多肽與鋅質(zhì)量比的進(jìn)一步增加,Zn2+與多肽分子中的配位基團(tuán)結(jié)合受阻,發(fā)生配合作用的概率不再增加,因而配合物的得率及配合率就不增加。

    圖5 多肽與鋅質(zhì)量比對鋅配合率的影響Fig.5 Effect of degree of hydrolysis of tilapia meat hydrolysate on Zn (Ⅱ)-tilapia peptide complexes yield and the percentage of Zn engaged in chleation

    2.2 多肽-鋅配合物的光譜特征

    2.2.1 多肽-鋅配合物的紅外光譜特征

    分別測定了多肽(PEP)和多肽-鋅配合物(Zn-PEP)的光譜特性,見圖6。

    從圖6可知,多肽及多肽-鋅配合物(鋅-PEP)的FTIR光譜在強(qiáng)度和吸收頻率方面均存在較大差異。PEP在3392.96cm-1處的吸收峰在Zn-PEP中移至3325.67cm-1,紅移了67.92cm-1;PEP合成Zn-PEP后,在3080.61cm-1處的吸收峰消失;這些譜帶分別對應(yīng)著PEP的NH對稱伸縮振動和反對稱伸縮振動。說明多肽分子的氨基和羧基都參與了Zn2+的配位,而且PEP中與Zn結(jié)合的氧同NH之間還可能存在著氫鍵。PEP在2970.89cm-1處的吸收峰在Zn-PEP中移至2968.85cm-1,紅移了2.04cm-1,紅移前后是PEP中CH2、CH基團(tuán)的伸縮振動,這說明Zn2+與PEP的作用而導(dǎo)致PEP結(jié)構(gòu)構(gòu)型的部分改變。PEP合成Zn-PEP后,在2084.13cm-1處的吸收峰消失;PEP在1662.11cm-1處的吸收峰在Zn-PEP中移至1654.34cm-1,紅移了7.77cm-1,這是COO-或CO伸縮振動,說明PEP中羧基的氧參與了Zn2+的配位作用。PEP在1583.22cm-1處的吸收峰消失,進(jìn)一步說明羧基上的氧直接與Zn2+有直接的配位作用。PEP在1452.59、1398.70、1319.41、1161.86、1115.31、1079.64、1049.05cm-1等處的吸收峰發(fā)生的紅移,都表明PEP與Zn2+有配位作用,并生成了新的配合物。PEP在1262.64cm-1處的吸收峰消失,表明殘基上的氨基和羧基氧均可能與Zn2+直接成鍵,并由氫鍵締合作用。Zn-PEP在878.56cm-1處附近的吸收峰加強(qiáng)和在602.26cm-1處吸收峰的紅移,有可能是Zn2+與N、O所形成的配合鍵的伸縮振動引起。

    圖6 多肽及多肽-鋅配合物的紅外光譜圖Fig.6 FTIR spectra of tilapia peptides and their complexes with Zn (Ⅱ)

    圖7 多肽及多肽-鋅配合物的紫外光譜圖Fig.7 Ultraviolet absorption spectra of tilapia peptides and their complexes with Zn

    2.2.2 多肽-鋅配合物的紫外光譜特征

    多肽和多肽-鋅配合物的紫外吸收光譜見圖7。多肽的最大吸收峰在210nm處(圖7A),這是由肽鍵上羰基(C=O)n→π*電子躍遷引起的;配合物的最大紫外吸收峰在216nm處(圖7B),與多肽的最大吸收峰210nm處相比,位移了6nm,這是由于Zn2+與多肽中的N、O形成配合鍵后,影響了肽鍵上羰基(C=O)n→π*的電子躍遷。另外,配合物在272nm處有一個較弱的新吸收峰出現(xiàn),這是配體(N-C-O)中π→π*電子躍遷所致。綜合紅外及紫外光譜解析結(jié)果可知,Zn2+與多肽分子的N、O之間形成了配合鍵,引起多肽分子骨架的部分變化,配合作用發(fā)生在氨基殘基和肽鍵的N、O原子上。

    2.3 多肽-鋅配合物的生物活性

    2.3.1 多肽-鋅配合物對腎GSH-Px活力的影響

    通過動物實驗,多肽-鋅配合物對小鼠腎GSH-Px、肝SOD和腹腔巨噬細(xì)胞活力的影響見表1。給小鼠灌喂低劑量的配合物,GSH-Px活力便得到顯著提高,對照組的GSH-Px活性均顯著低于各劑量組。GSH-Px是機(jī)體重要的抗氧化酶,具有清除H2O2與氫過氧化物等作用。GSH-Px活力的提高,有助于提高機(jī)體的抗氧化能力。配合物對GSH-Px活性的影響可能與鋅水平有關(guān)。張文敏等[15]研究了人血清中Zn水平與GSH-Px活性的關(guān)系,

    結(jié)果認(rèn)為正常人體血清Zn水平與GSH-Px活性呈明顯的正相關(guān)。

    2.3.2 多肽-鋅配合物對肝SOD的影響

    從表1可以看出,3個劑量組的SOD活力與對照組有顯著性差異,中低劑量組與高低劑量組之間也有顯著差異,說明配合物能顯著提高SOD活力。曹國華等[16]研究認(rèn)為,不同補(bǔ)鋅劑量對SOD有較大的影響,適度的補(bǔ)鋅量能真正利于小鼠的機(jī)體健康。因此,配合物提高SOD活力可能與其含有的鋅元素有關(guān)。

    2.3.3 多肽-鋅配合物對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的影響

    巨噬細(xì)胞對顆粒性物質(zhì)具有吞噬功能。如果將待測巨噬細(xì)胞與吞噬顆粒(如雞紅細(xì)胞、白色念珠菌、酵母細(xì)胞等)混合溫育一定時間,顆粒物質(zhì)可被巨噬細(xì)胞吞噬。因此,可根據(jù)吞噬百分率和吞噬指數(shù)反映巨噬細(xì)胞的吞噬活力。從表1可以看出,低劑量組與對照組無差異,中、高劑量組與對照組有明顯差異,中低、高低劑量組之間也有明顯差異。因此,可以認(rèn)為,多肽-鋅配合物對提高機(jī)體巨噬細(xì)胞的吞噬活力有顯著作用。機(jī)體巨噬細(xì)胞的吞噬活力的提高可能與配合物中多肽及鋅兩種組分都有關(guān)系。

    表1 多肽-鋅配合物對小鼠腎GSH-Px、肝SOD和腹腔巨噬細(xì)胞活力的影響(±s,n=7)Table 1 Effects of Zn-peptides complexes on kidney GSH-Px and hepatic SOD activities and the percentage of macrophages engaged in phagocytosis in mice (±s,n=7)

    表1 多肽-鋅配合物對小鼠腎GSH-Px、肝SOD和腹腔巨噬細(xì)胞活力的影響(±s,n=7)Table 1 Effects of Zn-peptides complexes on kidney GSH-Px and hepatic SOD activities and the percentage of macrophages engaged in phagocytosis in mice (±s,n=7)

    注:同列數(shù)據(jù)肩注字母不同者表示差異顯著(P<0.05)。

    組別 GSH-Px活力/(U/mg)SOD活力/(U/mg) 吞噬百分率/%對照組(A) 55.63±7.52a 105.43±5.63a 35.71±2.31a低劑量組(B) 99.15±7.13b 139.59±8.03b 38.86±1.96a中劑量組(C) 117.39±10.00c 190.16±23.48c 42.71±3.65b高劑量組(D) 110.95±14.65bc 218.46±25.66c 42.57±3.33b

    2.3.4 多肽-鋅配合物對體外超氧陰離子自由基的清除作用

    由圖8可以看出,多肽-鋅配合物對體外超氧陰離子自由基有一定清除作用,并且這種作用隨著配合物質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng)。當(dāng)多肽-鋅配合物質(zhì)量濃度達(dá)到一定值時,它對體外超氧陰離子自由基的清除率不再增加。多肽-鋅配合物對體外超氧陰離子自由基的清除作用機(jī)理尚不清楚,可能是多肽-鋅配合物本身具有抗氧化作用,例如,張亞麗[5]的研究表明大豆多肽絡(luò)合鋅對油脂有抗氧化性;也可能是配合物中的多肽組分在發(fā)揮作用,因為已發(fā)現(xiàn)有多種多肽都具有抗氧化活性[17]。

    圖8 多肽-鋅配合物對超氧陰離子自由基的清除效果Fig.8 Concentration dependence of scavenging rate of Zn (Ⅱ)-tilapia peptide complexes against superoxide anion free radicals

    3 結(jié) 論

    在適宜條件下,魚肉水解蛋白多肽能夠與Zn2+發(fā)生配合作用生成多肽-鋅配合物。配合物的光譜特征表明,Zn2+與多肽分子中的氨基殘基和肽鍵的N、O原子發(fā)生配合作用形成配合鍵。所制備的多肽-鋅配合物體現(xiàn)出一定地增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬能力、提高肝組織SOD和腎組織GSH-Px的活力、清除超氧陰離子自由基等生物活性。

    [1] 吳燕燕, 李來好, 岑劍偉. 酶法由羅非魚加工廢棄物制取調(diào)味料的研究[J]. 南方水產(chǎn), 2006, 2(1): 49-53.

    [2] TORREGGIANI A, FINI G, BOTTURA G. Effect of transition metal binding on the tautomeric equilibrium of the carnosine imidazolic ring[J]. Journal of Molecular Structure, 2001, 30(565/566): 341-346.

    [3] HIROKAZU T, AKIRA O, TSUTOMU M. An anti-HIV peptide, T22,forms a highly active complex with Zn(II)[J]. Biochemical and Biophysical Research Communications, 1996, 229(2): 648-652.

    [4] BUGLYO P, NAGY E M, FARKAS E. New insights into the metal ionpeptide hydroxamate interactions: Metal complexes of primary hydroxamic acid derivatives of common dipeptides in aqueous solution[J]. Journal of Polyhedron, 2006, 12(14): 1-9.

    [5] 張亞麗. 脫脂豆粕多肽絡(luò)合鹽的應(yīng)用特性研究[J]. 哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報: 自然科學(xué)版, 2005, 21(1): 93-95.

    [6] 高素蘊(yùn), 潘思軼, 郭康權(quán). 大豆分離蛋白水解物螯合鋅(Ⅱ)的合成與制備[J]. 食品科學(xué), 2003, 24(10): 117-120.

    [7] 許慶陵, 閆磊. Zn(Ⅱ)-大豆多肽配合物的合成[J]. 食品科技, 2008(8): 31-34.

    [8] VOGLER R, GELINSKY M, GUO L F, et al. Solution behaviour and zinc complexation of di- and tripeptides with two cysteine units[J].Inorganica Chimica Acta, 2002, 339: 1-8.

    [9] 曾慶祝, 許慶陵. 酶解-膜分離組合制備ACE抑制肽[J]. 食品科學(xué),2008, 29(2): 229-233.

    [10] 曾慶祝, 許慶陵, 黃儒強(qiáng). 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制肽的分離[J]. 水產(chǎn)學(xué)報, 2007, 31(6): 818-824.

    [11] 大連輕工業(yè)學(xué)院. 食品分析[M]. 北京: 中國輕工業(yè)出版社, 1994: 98-235.

    [12] 張龍翔, 張庭芳, 李令媛. 生化試驗方法和技術(shù)[M]. 2版. 北京: 高等教育出版社, 1997.

    [13] 中本一雄. 無機(jī)及配位化合物的紅外和拉曼光譜[M]. 黃德如, 汪仁慶, 譯. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 1981.

    [14] 王春波, 賀孟泉, 秦守哲. 海洋膚的體外抗氧化作用[J]. 中國海洋藥物, 1998, 67(3): 15-17.

    [15] 張文敏, 張萌, 姜桔紅. 腫瘤-睪丸抗原LAGE-1基因的原核表達(dá)純化和抗血清制備[J]. 中華腫瘤防治雜志, 2006, 13(15): 1154-1157.

    [16] 曹國華, 陳吉棣, 劉小鵬. 運(yùn)動、鋅銅營養(yǎng)與自由基代謝. Ⅵ. 不同量鋅補(bǔ)充對缺鋅運(yùn)動小鼠體內(nèi)自由基生成與清除的影響[J]. 中華運(yùn)動醫(yī)學(xué)雜志, 1992, 82(1): 423-425.

    [17] 鄭惠娜, 章超樺, 曹文紅. 海洋蛋白酶解制備生物活性肽的研究進(jìn)展[J]. 水產(chǎn)科學(xué), 2008, 27(7): 370-373.

    Preparation and Biological Activities of Zn (Ⅱ)–Tilapia Peptide Complexes

    XU Qing-ling1,ZENG Qing-zhu1,*,YAN Lei2,LIN Jin-ying1,GU Cai-qin1,ZHAN Yu1,F(xiàn)AN Ya-ming1,HUANG Ru-qiang3
    (1. Department of Food Engineering, College of Chemistry and Chemical Engineering, Guangzhou University, Guangzhou 510006,China;2. Guangzhou Lushi Fisheries Co. Ltd., Guangzhou 510820, China;3. Department of Bioengineering, School of Life Science, South China Normal University, Guangzhou 510631, China)

    S985.1

    A

    1002-6630(2010)10-0075-06

    2009-09-09

    廣州市屬高??萍加媱濏椖?廣州市教育局08C082);廣州大學(xué)引進(jìn)人才科研啟動項目(2007)

    許慶陵(1965—),女,高級實驗師,學(xué)士,主要從事生物活性物質(zhì)制備及其應(yīng)用研究。

    E-mail:qinglingxu65@yahoo.com.cn

    *通信作者:曾慶祝(1965—),男,教授,博士,主要從事生物活性物質(zhì)制備及其應(yīng)用研究。E-mail:zqz@gzhu.edu.cn

    猜你喜歡
    羅非魚多肽水解
    羅非魚養(yǎng)殖模式
    貿(mào)易戰(zhàn),羅非魚首當(dāng)其沖!面臨眾多不利因素,昔日的王者羅非魚還能打一場翻身戰(zhàn)嗎?
    番石榴中結(jié)合多酚堿水解與酸水解法提取工藝優(yōu)化的比較
    羅非魚 年總產(chǎn)量全國第三位
    高多肽含量苦瓜新品種“多肽3號”的選育
    抗HPV18 E6多肽單克隆抗體的制備及鑒定
    鹽類的水解考點(diǎn)探究
    鹽類水解的原理及應(yīng)用
    胎盤多肽超劑量應(yīng)用致嚴(yán)重不良事件1例
    徐寒梅:創(chuàng)新多肽藥物研究與開發(fā)
    日本一二三区视频观看| 国产成人啪精品午夜网站| 久久久久久久久免费视频了| 亚洲色图av天堂| 亚洲精品在线观看二区| av有码第一页| 久久久国产成人免费| 级片在线观看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 男人舔奶头视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 1024手机看黄色片| 国产激情偷乱视频一区二区| 嫩草影视91久久| 一二三四社区在线视频社区8| 我要搜黄色片| 两人在一起打扑克的视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 成人一区二区视频在线观看| 性欧美人与动物交配| 久久久久国产一级毛片高清牌| www.熟女人妻精品国产| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久久人妻av系列| xxxwww97欧美| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产av又大| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | www日本在线高清视频| ponron亚洲| 欧美黄色片欧美黄色片| 免费看十八禁软件| 国产高清videossex| 欧美日韩精品网址| 国产私拍福利视频在线观看| 成年人黄色毛片网站| 最近最新中文字幕大全电影3| 欧美日韩精品网址| 国产精品久久久人人做人人爽| 色播亚洲综合网| 婷婷丁香在线五月| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产精品一及| 99在线视频只有这里精品首页| 久久热在线av| 老司机靠b影院| 99精品欧美一区二区三区四区| 久久精品成人免费网站| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲色图av天堂| avwww免费| 国产成人精品无人区| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 又黄又粗又硬又大视频| 国产真人三级小视频在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 不卡一级毛片| 日本 av在线| 国产黄色小视频在线观看| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲专区字幕在线| 午夜a级毛片| 久久亚洲真实| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲色图av天堂| 久久这里只有精品中国| 中亚洲国语对白在线视频| 99热这里只有精品一区 | 亚洲精品在线美女| 亚洲中文av在线| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产1区2区3区精品| 午夜视频精品福利| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| aaaaa片日本免费| 精品久久久久久久久久久久久| 丝袜美腿诱惑在线| 婷婷精品国产亚洲av| 欧美一级毛片孕妇| 国产1区2区3区精品| 国产视频一区二区在线看| 村上凉子中文字幕在线| 天堂√8在线中文| 欧美黑人巨大hd| 国产单亲对白刺激| 亚洲成a人片在线一区二区| 两人在一起打扑克的视频| 国内精品久久久久精免费| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 久久人人精品亚洲av| 精品乱码久久久久久99久播| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 天天一区二区日本电影三级| 一进一出抽搐gif免费好疼| 日韩精品中文字幕看吧| 国产97色在线日韩免费| 黑人欧美特级aaaaaa片| 黄色成人免费大全| 国产精品久久久av美女十八| 国产精品久久久人人做人人爽| or卡值多少钱| 国产高清视频在线播放一区| 一二三四在线观看免费中文在| 午夜免费成人在线视频| 村上凉子中文字幕在线| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 免费av毛片视频| 麻豆国产97在线/欧美 | 国产亚洲欧美98| av福利片在线| а√天堂www在线а√下载| 日本a在线网址| 久久久久久久精品吃奶| 国产成年人精品一区二区| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 此物有八面人人有两片| 亚洲国产精品999在线| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 久久伊人香网站| 最新美女视频免费是黄的| 成人永久免费在线观看视频| 久久久久久人人人人人| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产不卡一卡二| 日本精品一区二区三区蜜桃| 日韩av在线大香蕉| 亚洲人成伊人成综合网2020| 久久草成人影院| 啦啦啦韩国在线观看视频| 日本三级黄在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 97人妻精品一区二区三区麻豆| 免费高清视频大片| 精品久久久久久久末码| 国产精品亚洲av一区麻豆| 怎么达到女性高潮| 手机成人av网站| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲美女黄片视频| 九色成人免费人妻av| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲国产精品成人综合色| 老鸭窝网址在线观看| 日韩有码中文字幕| 正在播放国产对白刺激| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 午夜成年电影在线免费观看| 真人做人爱边吃奶动态| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产精品亚洲美女久久久| 激情在线观看视频在线高清| 人人妻人人看人人澡| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 制服丝袜大香蕉在线| 在线观看美女被高潮喷水网站 | bbb黄色大片| 亚洲国产看品久久| 亚洲精品在线美女| 男女床上黄色一级片免费看| 男插女下体视频免费在线播放| 91av网站免费观看| 长腿黑丝高跟| 欧美黑人欧美精品刺激| 69av精品久久久久久| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产精品98久久久久久宅男小说| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲精品在线观看二区| 搡老岳熟女国产| 欧美一区二区国产精品久久精品 | 美女免费视频网站| a级毛片a级免费在线| 国产区一区二久久| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 国产私拍福利视频在线观看| 校园春色视频在线观看| 一二三四社区在线视频社区8| 久久久国产精品麻豆| 久久久久久大精品| 亚洲五月婷婷丁香| 久久久国产成人精品二区| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产精品一区二区免费欧美| 在线观看66精品国产| 无遮挡黄片免费观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲av第一区精品v没综合| 一夜夜www| 天堂√8在线中文| 欧美一区二区国产精品久久精品 | 精品欧美国产一区二区三| 精品一区二区三区四区五区乱码| www国产在线视频色| 日日夜夜操网爽| 国产精品免费视频内射| 又粗又爽又猛毛片免费看| 在线免费观看的www视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 久久精品91无色码中文字幕| 亚洲av电影不卡..在线观看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 欧美+亚洲+日韩+国产| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 美女 人体艺术 gogo| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲最大成人中文| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 亚洲乱码一区二区免费版| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产成年人精品一区二区| 精品欧美国产一区二区三| 久久热在线av| 国产一区二区三区视频了| 男女床上黄色一级片免费看| 制服诱惑二区| 波多野结衣巨乳人妻| 国产野战对白在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 美女黄网站色视频| 欧美zozozo另类| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产一区二区在线av高清观看| 日日干狠狠操夜夜爽| xxxwww97欧美| 黄色毛片三级朝国网站| 午夜福利高清视频| 午夜a级毛片| 一本久久中文字幕| 校园春色视频在线观看| 国产伦在线观看视频一区| 午夜福利高清视频| 国产精品九九99| 男人的好看免费观看在线视频 | 黑人操中国人逼视频| 欧美日本亚洲视频在线播放| videosex国产| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 高潮久久久久久久久久久不卡| 麻豆久久精品国产亚洲av| av天堂在线播放| 91麻豆av在线| 国内精品久久久久精免费| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 久久精品综合一区二区三区| 在线观看免费午夜福利视频| 国产99久久九九免费精品| 久久久久亚洲av毛片大全| 日本a在线网址| 国产成人啪精品午夜网站| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲精品美女久久av网站| 精品熟女少妇八av免费久了| 欧美乱码精品一区二区三区| 成人三级黄色视频| 久久九九热精品免费| 91大片在线观看| 老汉色∧v一级毛片| 最近视频中文字幕2019在线8| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 亚洲avbb在线观看| netflix在线观看网站| 999久久久精品免费观看国产| 长腿黑丝高跟| 亚洲人成电影免费在线| 午夜日韩欧美国产| 亚洲国产看品久久| aaaaa片日本免费| 老汉色∧v一级毛片| 国产精品久久视频播放| 不卡av一区二区三区| 午夜福利免费观看在线| 成人欧美大片| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产av一区在线观看免费| 亚洲成人精品中文字幕电影| 桃色一区二区三区在线观看| 在线a可以看的网站| 国产精品久久久人人做人人爽| a级毛片在线看网站| 亚洲国产欧美人成| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲av成人一区二区三| 国产亚洲精品第一综合不卡| 99riav亚洲国产免费| 怎么达到女性高潮| 午夜福利在线在线| 欧美在线一区亚洲| 成人亚洲精品av一区二区| 老熟妇仑乱视频hdxx| av超薄肉色丝袜交足视频| 免费在线观看日本一区| 日韩精品免费视频一区二区三区| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产视频一区二区在线看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 伦理电影免费视频| 悠悠久久av| 中文字幕熟女人妻在线| www.精华液| 一区二区三区高清视频在线| 午夜福利免费观看在线| 日韩有码中文字幕| 一本综合久久免费| 黄色女人牲交| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲av成人精品一区久久| 免费在线观看影片大全网站| 天堂√8在线中文| 午夜影院日韩av| 免费看美女性在线毛片视频| 两人在一起打扑克的视频| 手机成人av网站| 香蕉av资源在线| 亚洲成av人片免费观看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| av中文乱码字幕在线| 久久中文字幕一级| 日本在线视频免费播放| 日本黄大片高清| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 欧美成人免费av一区二区三区| 人人妻人人澡欧美一区二区| 欧美色欧美亚洲另类二区| 又粗又爽又猛毛片免费看| 99精品久久久久人妻精品| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产精品 国内视频| 亚洲一区中文字幕在线| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产免费男女视频| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 日韩欧美国产一区二区入口| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 欧美+亚洲+日韩+国产| 免费在线观看黄色视频的| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 日日干狠狠操夜夜爽| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲七黄色美女视频| 一本综合久久免费| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 白带黄色成豆腐渣| 国产精品 国内视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲av五月六月丁香网| 免费看美女性在线毛片视频| 香蕉久久夜色| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产精品 国内视频| 国产精品99久久99久久久不卡| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 九色国产91popny在线| 美女黄网站色视频| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 深夜精品福利| 日韩大尺度精品在线看网址| 国产精品一区二区三区四区久久| 一级毛片精品| 精品久久久久久久毛片微露脸| 亚洲av成人一区二区三| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产午夜精品论理片| 成在线人永久免费视频| 亚洲专区字幕在线| 亚洲黑人精品在线| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产一级毛片七仙女欲春2| 给我免费播放毛片高清在线观看| 日本黄色视频三级网站网址| 在线观看日韩欧美| 国产av在哪里看| 国产亚洲欧美98| 在线视频色国产色| 国产精品久久电影中文字幕| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 天堂影院成人在线观看| 99热只有精品国产| 免费在线观看日本一区| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产午夜精品论理片| 国产黄色小视频在线观看| 岛国在线观看网站| 一边摸一边抽搐一进一小说| 老司机靠b影院| 一进一出抽搐动态| 亚洲自拍偷在线| 精品午夜福利视频在线观看一区| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 十八禁网站免费在线| 国产激情偷乱视频一区二区| 日韩欧美免费精品| 亚洲国产精品合色在线| 99riav亚洲国产免费| 不卡一级毛片| x7x7x7水蜜桃| 国产不卡一卡二| 国产高清videossex| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 成人精品一区二区免费| 国产伦人伦偷精品视频| 久热爱精品视频在线9| 俺也久久电影网| 妹子高潮喷水视频| bbb黄色大片| 2021天堂中文幕一二区在线观| 欧美3d第一页| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲男人的天堂狠狠| 免费av毛片视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 搡老熟女国产l中国老女人| 狠狠狠狠99中文字幕| 日韩精品中文字幕看吧| 又大又爽又粗| 999久久久国产精品视频| 99久久精品国产亚洲精品| 美女大奶头视频| 人妻久久中文字幕网| 欧美午夜高清在线| 免费观看精品视频网站| 嫩草影院精品99| 欧美精品啪啪一区二区三区| 嫁个100分男人电影在线观看| 日韩欧美 国产精品| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产成人精品无人区| 国产亚洲av高清不卡| 1024手机看黄色片| 国产野战对白在线观看| svipshipincom国产片| 国产精品,欧美在线| 精品国产乱子伦一区二区三区| 一二三四社区在线视频社区8| 人人妻人人看人人澡| 51午夜福利影视在线观看| 国产乱人伦免费视频| 亚洲成av人片免费观看| 日本五十路高清| 99热这里只有精品一区 | 亚洲av日韩精品久久久久久密| 特级一级黄色大片| 最近最新免费中文字幕在线| ponron亚洲| 性欧美人与动物交配| 国产免费av片在线观看野外av| 精品国产乱子伦一区二区三区| 嫩草影院精品99| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 最近在线观看免费完整版| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲欧美精品综合久久99| 丰满的人妻完整版| 一级毛片高清免费大全| 大型av网站在线播放| 久久精品91蜜桃| 免费在线观看亚洲国产| 草草在线视频免费看| 看免费av毛片| 午夜亚洲福利在线播放| 老司机在亚洲福利影院| 色播亚洲综合网| 免费无遮挡裸体视频| 欧美黑人巨大hd| 欧美性长视频在线观看| 一夜夜www| 成人永久免费在线观看视频| 91成年电影在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 久久 成人 亚洲| 日韩欧美三级三区| 亚洲第一电影网av| av中文乱码字幕在线| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲熟女毛片儿| 热99re8久久精品国产| 国产又色又爽无遮挡免费看| 中文字幕久久专区| 制服丝袜大香蕉在线| 久久香蕉精品热| 精品一区二区三区四区五区乱码| 两个人免费观看高清视频| 精品国产乱子伦一区二区三区| 日韩欧美免费精品| 日本黄色视频三级网站网址| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲国产精品sss在线观看| 欧美一级毛片孕妇| 99re在线观看精品视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 欧美日本亚洲视频在线播放| 精品一区二区三区四区五区乱码| 久久精品人妻少妇| 日本一区二区免费在线视频| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 欧美色视频一区免费| 12—13女人毛片做爰片一| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 神马国产精品三级电影在线观看 | 久久精品国产清高在天天线| 午夜日韩欧美国产| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲 国产 在线| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 岛国在线观看网站| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲美女黄片视频| 亚洲av电影不卡..在线观看| 精品国产美女av久久久久小说| 黄色a级毛片大全视频| 久久久久久久午夜电影| 欧美一级a爱片免费观看看 | 精品欧美一区二区三区在线| 国产av在哪里看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲精品在线观看二区| 午夜激情福利司机影院| 国产精品亚洲一级av第二区| 18禁美女被吸乳视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产91精品成人一区二区三区| 级片在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 在线国产一区二区在线| 1024视频免费在线观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 日本在线视频免费播放| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 女同久久另类99精品国产91| 成年免费大片在线观看| 深夜精品福利| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 久久久国产成人免费| 男女下面进入的视频免费午夜| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲国产精品成人综合色| 91字幕亚洲| 天堂影院成人在线观看| 免费观看人在逋| 久久婷婷成人综合色麻豆| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 午夜激情福利司机影院| 久久精品国产清高在天天线| 欧美乱色亚洲激情| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 啦啦啦免费观看视频1| 一级毛片精品| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲真实伦在线观看| 久久人妻av系列| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 老熟妇仑乱视频hdxx| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 黄色视频,在线免费观看| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 精品日产1卡2卡| 视频区欧美日本亚洲| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 性欧美人与动物交配| 亚洲精品美女久久av网站| 国产精品99久久99久久久不卡| xxxwww97欧美| 一二三四社区在线视频社区8| 欧美日韩精品网址| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国内精品一区二区在线观看| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 一进一出好大好爽视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 99在线视频只有这里精品首页| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产熟女xx| 99在线视频只有这里精品首页| 久久这里只有精品中国| 欧美日韩国产亚洲二区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 欧美乱码精品一区二区三区| 最近在线观看免费完整版| 国产免费av片在线观看野外av| 欧美乱色亚洲激情| 可以在线观看的亚洲视频| 丰满的人妻完整版| 99国产精品一区二区三区| 三级毛片av免费| 深夜精品福利| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产69精品久久久久777片 | 后天国语完整版免费观看| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 欧美乱色亚洲激情|