班慧敏
(河南省夏邑縣第二人民醫(yī)院,河南夏邑 476445)
卵巢早衰患者外周血細(xì)胞免疫檢測(cè)及其臨床意義
班慧敏
(河南省夏邑縣第二人民醫(yī)院,河南夏邑 476445)
目的:探討卵巢早衰患者外周血中細(xì)胞免疫檢測(cè)及其臨床意義。方法:采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)15例卵巢早衰患者、15例自然絕經(jīng)后婦女和20例健康育齡婦女外周血中CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞水平;用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定卵泡刺激素(FSH)和雌激素(E2)水平。結(jié)果:POF組CD4+T淋巴細(xì)胞低于健康育齡婦女組(P<0.05),CD8+T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞水平和B淋巴細(xì)胞水平高于健康育齡婦女組(P<0.05);POF組FSH水平高于健康育齡婦女組,而E2水平低于健康育齡婦女組;POF組與自然絕經(jīng)后婦女組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:卵巢早衰患者細(xì)胞免疫水平低下,與自然絕經(jīng)后者水平相似。
卵巢早衰;免疫檢測(cè);外周血
卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)是指女性 40 歲前由于卵巢內(nèi)卵泡耗竭而發(fā)生的卵巢功能衰竭。臨床表現(xiàn)為繼發(fā)性或原發(fā)性閉經(jīng),以血清卵泡刺激素上升和雌激素水平下降為特征,并伴有不同程度的一系列低雌激素癥狀[1]。大量流行病學(xué)資料和相關(guān)研究顯示POF的發(fā)生、發(fā)展與細(xì)胞免疫功能密切相關(guān)[2-3],且現(xiàn)階段研究主要是以患者的體液免疫指標(biāo)為主,細(xì)胞免疫研究較少[4]。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)15例卵巢早衰患者、15例自然絕經(jīng)后婦女和20例健康育齡婦女外周血中CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞水平,探討卵巢早衰患者外周血中細(xì)胞免疫水平變化及其臨床意義。
①POF組:商丘市第一人民醫(yī)院2010年2~7月婦科門診POF患者15例,年齡24~40歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)為年齡≤40周歲,自然月經(jīng)周期狀態(tài)下,閉經(jīng)3個(gè)自然周期或者6個(gè)月以上,血清 FSH>40 IU/L,E2<25 pg/ml,陰道超聲提示子宮小,卵巢測(cè)值小于正常,無(wú)卵泡或卵泡聲像不清,并伴有潮熱、多汗、面部潮紅、性欲低下等一系列低雌激素癥狀。②自然絕經(jīng)婦女組:商丘市第一人民醫(yī)院體檢的女性15例,年齡50~71歲,自然絕經(jīng)1年以上,排除心、腦、肝、腎等慢性疾病。③健康育齡婦女組:商丘市第一人民醫(yī)院體檢的健康育齡女性20例,年齡23~39歲,與POF組年齡比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
流式細(xì)胞儀為BD FACS Calibur;BD MultestTMCD3/CD45/CD4/CD8,BD MultestTMCD3/CD16+CD56/CD45/CD19 和 同性對(duì)照小鼠抗人IgG1均購(gòu)自美國(guó) BD公司?;瘜W(xué)發(fā)光儀為Siemens Immulite 2000,卵泡刺激性 FSH,和雌激素(E2),試劑盒均購(gòu)自Siemens公司。
清晨空腹取外周靜脈血2 ml分別于EDTA抗凝管和肝素抗凝管中。檢測(cè)細(xì)胞免疫時(shí)用微量移液器加入50 μl EDTA 抗凝全血,調(diào)整細(xì)胞濃度為(1~10)×109/L,置混合器上混勻;按試劑說(shuō)明分別加入相應(yīng)抗體20 μl,室溫下避光孵育20 min;然后加入 300 μl溶血?jiǎng)?、混勻、避光靜置 10 min,1 400 r/min離心5 min,棄上清。用PBS緩沖液洗滌1次,加入PBS重新懸浮細(xì)胞,避光靜置10 min,上流式細(xì)胞儀用Multitest軟件檢測(cè)分析。測(cè)定FSH和E2時(shí),化學(xué)發(fā)光儀器Siemens Immulite 2000加入相應(yīng)試劑后按說(shuō)明進(jìn)行測(cè)定。
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析處理。各組數(shù)據(jù)用±s表示,組間數(shù)據(jù)比較用t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05。
POF患者與自然絕經(jīng)婦女相比,外周血FSH和E2水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);POF患者與健康育齡婦女相比,外周血FSH和E2水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。
表1 3組患者的血清FSH和E2水平變化(±s)
表1 3組患者的血清FSH和E2水平變化(±s)
與健康育齡婦女組相比,*P<0.05
組別 例數(shù)(n) 年齡(歲) FSH(IU/L) E2(pg/ml)POF組自然絕經(jīng)婦女組健康育齡婦女組P值15 15 20-26~40 50~71 23~39-56.68±9.67*51.23±8.93 6.88±1.93 0.014 15.57±4.48*16.80±3.66 89.23±29.23 0.017
POF組CD4+T淋巴細(xì)胞低于健康育齡婦女組(P<0.05),CD8+T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞水平高于健康育齡婦女組(P<0.05);POF組與自然絕經(jīng)后婦女組細(xì)胞免疫指標(biāo)相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。
至今為止,POF的病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。現(xiàn)行大量流行病資料和相關(guān)研究顯示POF發(fā)病不僅與遺傳因素、內(nèi)分泌代謝、理化因素、藥物影響和微生物感染有關(guān),而且POF的發(fā)生、發(fā)展還與機(jī)體免疫功能密切相關(guān)。20世紀(jì)80年代,F(xiàn)riedman CI等[5]發(fā)現(xiàn)POF患者體內(nèi)發(fā)生細(xì)胞免疫改變,患者卵巢活檢后可見原始卵泡或初級(jí)卵泡周圍有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),顯微鏡下可見T淋巴細(xì)胞分泌的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)內(nèi)外卵泡膜細(xì)胞、顆粒細(xì)胞、黃體細(xì)胞和白體細(xì)胞,從而揭開了對(duì)POF患者細(xì)胞免疫功能的研究。
表2 3組患者的細(xì)胞免疫水平變化(±s)
表2 3組患者的細(xì)胞免疫水平變化(±s)
與健康育齡婦女組相比,*P<0.05
組別 例數(shù) CD4+T(%) CD8+T(%)CD19+B(%)(CD16+CD56)+NK(%)POF組自然絕經(jīng)婦女組健康育齡婦女組P值15 15 20-45.16±6.67*41.23±8.93 53.51±6.46 0.037 29.68±6.79*28.26±5.74 16.88±6.03 0.018 25.57±4.48*26.80±3.66 16.23±7.23 0.026 28.23±6.54*16.23±4.93 18.57±4.48 0.020
目前對(duì)POF患者細(xì)胞免疫功能的研究尚無(wú)一致結(jié)論。王文軍等[6]運(yùn)用免疫酶組化技術(shù),檢測(cè)POF患者、自然絕經(jīng)后婦女及健康育齡婦女的外周血T淋巴細(xì)胞亞群,發(fā)現(xiàn)POF患者、自然絕經(jīng)婦女和健康育齡婦女的CD3+T淋巴細(xì)胞水平一致;CD4+T淋巴細(xì)胞亞群在3組婦女中無(wú)明顯差異;POF患者及自然絕經(jīng)婦女的CD8+T淋巴細(xì)胞明顯升高,CD4+/CD8+明顯降低。雷小敏等[7]采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)POF患者與亞群健康育齡婦女外周血淋巴細(xì)胞CD3+T、CD4+T和CD8+T淋巴細(xì)胞的變化,結(jié)果顯示POF組CD4+T淋巴細(xì)胞低于健康育齡婦女組,CD8+T淋巴細(xì)胞高于健康育齡婦女組,CD4+/CD8+明顯降低。楊桂艷等[8]的研究表明POF患者與健康育齡婦女CD4+T和CD8+T細(xì)胞百分比及CD4+/CD8+比值均無(wú)明顯差異。本研究發(fā)現(xiàn)POF組CD4+T淋巴細(xì)胞水平低于健康育齡婦女組(P<0.05),CD8+T淋巴細(xì)胞水平高于健康育齡婦女組(P<0.05);POF組與自然絕經(jīng)后婦女組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究結(jié)合以上結(jié)果表明CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和CD4/CD8比值反應(yīng)POF患者細(xì)胞免疫功能狀態(tài)的局限性。原因可能有兩方面:一方面由于CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞各自包含了很多功能各異的細(xì)胞群體,另一方面可能與POF患者處于疾病的不同發(fā)展階段有關(guān)。
此外,本研究還發(fā)現(xiàn)POF組NK細(xì)胞水平和B淋巴細(xì)胞水平高于健康育齡婦女組(P<0.05)。NK細(xì)胞作為一種不需要組織相容性復(fù)合物限制的非特異殺傷細(xì)胞,年輕女性的NK細(xì)胞高于老年人。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明健康育齡婦女組NK細(xì)胞水平高于自然絕經(jīng)婦女組,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而POF組NK細(xì)胞水平顯著高于健康育齡婦女組,表明POF患者免疫功能亢進(jìn)的一種表現(xiàn),可能是引起POF的一個(gè)輔助因素。由于CD4+T細(xì)胞能廣泛表達(dá)和分泌細(xì)胞因子如TNF-γ等。這些細(xì)胞因子可直接作用于B細(xì)胞,促進(jìn)B細(xì)胞增殖、分化和分泌Ig,同時(shí)B細(xì)胞也可誘導(dǎo)NK和LAK等多種殺傷細(xì)胞分化和發(fā)揮效應(yīng),導(dǎo)致卵巢的抗原靶細(xì)胞損傷或凋亡。卵巢的過(guò)度損傷及凋亡,造成卵泡閉鎖,排卵障礙,最后發(fā)生POF。
本研究提示POF患者體內(nèi)免疫翻譯、免疫調(diào)節(jié)等同自然絕經(jīng)后婦女一樣均處于衰老狀態(tài),且自身免疫性增強(qiáng)。但從研究結(jié)果看采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞免疫指標(biāo)判斷POF的免疫發(fā)病因素價(jià)值有限,且費(fèi)用昂貴,不適合臨床上的廣泛應(yīng)用。
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R392.7
B
1674-4721(2010)12(a)-084-02
2010-10-22)