目安眼膏治療兔單純皰疹病毒性角膜炎的研究

譚涵宇，張湘暉 ，張明亮 *，何 群 ，伍參榮 ，張 健 ，王霜玲

（1.湖南中醫(yī)藥大學中醫(yī)眼科學重點學科，湖南 長沙 410208；2.湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院眼科，湖南 長沙 410007；3.上海市眼病防治中心，上海 200040）

單皰病毒性角膜炎 (herpes simplex keratitis，HSK)大部份為HSV-Ⅰ型感染所引起，其發(fā)病率和致盲率均占角膜病的首位。根據目前治療HSK現(xiàn)狀，阿昔洛韋是治療該病的首選藥物，但對角膜修復、愈合及再生作用欠佳，而蜂蜜能增強機體的免疫功能，對創(chuàng)面具有收斂、保護及愈合等作用。蜂蜜與ACV配伍制成的目安眼膏，既能增強治療HSK的藥效，又能提高角膜修復、愈合及再生能力，但藥效與蜂蜜濃度有密切關系[1-2]，本實驗采用不同濃度目安眼膏和3%ACV眼膏、卡波姆凝膠基質眼膏治療實驗性兔單純皰疹病毒性角膜炎，用裂隙燈觀察角膜病變并進行Trouzdale評分，現(xiàn)將實驗方法及結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 新西蘭大白兔20只（40只眼）由湖南中醫(yī)藥大學動物實驗室提供，體質量2.0～2.5kg，雌雄各半，經檢查無眼疾。動物合格證號：醫(yī)動字20-003。

1.1.2 藥物 目安眼膏I號蜂蜜為5 g，目安眼膏Ⅱ號蜂蜜為10 g，分別加ACV 3 g入卡波姆凝膠基質中至100 g，卡波姆凝膠基質（卡波姆-940、吐溫-80、尼泊金乙醋、甘油、蒸餾水）。由湖南中醫(yī)藥大學藥學院提供。3%阿昔洛韋眼膏（上海第九制藥廠生廠，批號：050502）。阿昔洛韋原料（湖北科益藥業(yè)股份有限公司生產，批號：060204）。2%熒光素鈉（湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院藥劑科生產，批號：050607）。紫云英蜂蜜（湖南省藥材公司生產，經我校周日寶教授鑒定符合《中華人民共和國藥典》2005版一部規(guī)定）；0.4%Benoxil溶液（日本參天制藥株式會社生產）。

1.1.3 儀器 手持裂隙燈，NIKON FX照相機，裂隙燈日本TOPCON公司生產。

1.2 方法

1.2.1 單皰病毒性角膜炎模型的制作 參照角膜環(huán)鉆法以及上皮劃痕法[3-4]。0.4%Benoxil溶液（日本Saten參天制藥有限公司）3次表面麻醉，6 mm環(huán)鉆在角膜中央作一壓痕，并用30-gauge針在其壓痕內作“#”劃痕，微量取樣品25μL病毒懸液滴入兔雙眼結膜囊內，輕合眼瞼按摩1 min，接種24 h出現(xiàn)畏光，流淚裂隙燈下提示造模成功。

1.2.2 分組和給藥方法 模型兔隨機分4組，每組5只(10眼)。I組：目安眼膏 I號；Ⅱ組：目安眼膏Ⅱ號；Ⅲ組：ACV組(陽性對照組)；IV組：凝膠基質眼膏(陰性對照組)。涂眼藥 3次/d，每次給藥 0.1 g，間隔 4 h(8 am、12 nm、4 pm)，雙眼接受同樣治療14 d。

1.2.3 裂隙燈觀察 于接種病毒后 1、2、4、6、8、10、12、14 d進行裂隙燈觀察并行Trouzdale評分。其他評價參數(shù)包括眼瞼、結膜、虹膜和房水等。角膜上皮病變面積評分標準參考有關文獻[5]0分：正常的透明角膜；0.1～0.9分：點狀上皮病變1～9個；1分：點狀上皮病變10個以上，或小潰瘍面積占角膜面積25%以下；2分：角膜潰瘍面積占角膜面積25%～50%；3分：角膜潰瘍面積占角膜面積50%～75%；4分：角膜潰瘍面積占角膜面積＞75%。

1.3 統(tǒng)計學分析

2 結果

4組實驗角膜接種前均無眼疾，在接種病毒后24 h出現(xiàn)病變，結膜充血、流淚、畏光、角膜上多為點狀，短棒狀及短樹枝狀淺層角膜上皮病變，病變首先從劃痕處角膜上皮缺損部位開始形成，但各組角膜病變程度之間比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。接種2 d后病變逐漸呈典型的樹枝狀和地圖狀潰瘍，第6～8天各組的角膜病變到達高峰期。各組角膜病變的情況見表1，各組并發(fā)癥的情況見表 2～4。

2.1 目安眼膏I組

接種病毒后1 d角膜上皮為點狀病變，從2 d開始，逐漸發(fā)展成樹枝狀，6～8 d病變進入高峰，樹枝狀及地圖狀典型病變出現(xiàn)，平均評分為1.16～1.30，基質水腫，到14 d平均分值為0.12，平均治愈天數(shù)11.2 d。結膜炎發(fā)病率為100%，虹膜炎發(fā)病率為10%，眼瞼皰疹發(fā)病率為10%，前房積膿發(fā)病率為0。

2.2 目安眼膏Ⅱ組

與前組相似，接種病毒后1 d即見點狀病變，隨后發(fā)展成樹枝狀及地圖狀潰瘍，6～8 d為病變高峰，平均評分在1.45～1.78之間，到14 d上皮病變分值為0.45。實驗過程中結膜炎發(fā)病率為100%，虹膜炎發(fā)病率為20%，眼瞼皰疹20%，前房積膿發(fā)病率為0。

2.3 ACV眼膏組

2 d后病變以點狀病灶為主，同時有較多短棒狀病灶，無潰瘍形成。病變在6～8 d達高峰，基質水腫，浸潤輕微，9 d上皮開始愈合。結膜炎發(fā)病率100%，虹膜炎發(fā)病率30%，眼瞼皰疹發(fā)病率20%，前房積膿發(fā)病率為0。

2.4 凝膠基質眼膏組

接種后2 d，出現(xiàn)典型的樹枝狀病灶，病變面積不斷擴大，6～8 d達高峰，形成地圖狀潰瘍，基質水腫，浸潤，角膜平均評分介于2.72～3.2之間，此后上皮病變呈好轉趨勢，但病變向基質層發(fā)展，雖然上皮病變縮小，但是基質水腫較重，上皮評分從高峰期后逐漸下降,未觀察到自愈的例數(shù)。結膜炎和虹膜炎發(fā)病率為100%，前房積膿發(fā)病率40%，眼瞼皰疹發(fā)病率為30%。4個處理組之間的角膜上皮病變面積比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），目安眼膏I號分別與目安眼膏Ⅱ號和ACV眼膏之間角膜病變面積比較，差異有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05），目安眼膏Ⅱ號和ACV眼膏之間角膜病變面積比較，兩組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表1 目安眼膏對各組兔角膜病變不同時間段評分比較 （分，n=10，）

表1 目安眼膏對各組兔角膜病變不同時間段評分比較 （分，n=10，）

組別 1 d 2 d 3 d 4 d I組 0.84±0.05 0.88±0.03 0.96±0.08 1.01±0.14Ⅱ組 0.84±0.04 0.92±0.07 1.10±0.13 1.18±0.10Ⅲ組 0.85±0.07 0.92±0.09 1.12±0.11 1.16±0.08 IV 組 0.89±0.12 1.32±0.19 1.66±0.28 2.02±0.20 5 d 6 d 7 d 8 d 9 d 10 d 1.10±0.21 1.16±0.20 1.24±0.22 1.30±0.23 0.81±0.16 0.55±0.15 1.26±0.18 1.45±0.22 1.66±0.24 1.78±0.20 1.42±0.18 1.34±0.12 1.24±0.18 1.48±0.24 1.69±0.25 1.82±0.21 1.46±0.20 1.25±0.18 2.27±0.21 2.72±0.26 2.86±0.25 3.20±0.35 2.70±0.22 2.55±0.14

續(xù)表1

表2 各組免結膜炎發(fā)病情況

表3 各組兔眼瞼皰疹發(fā)病情況

表4 各組兔虹膜炎發(fā)病情況

3 討論

單純皰疹病毒性角膜炎由單純皰疹病毒Ⅰ型 （HSV-1）感染引起，屬中醫(yī)學“黑睛生翳”范疇。臨床表現(xiàn)類似于“聚星障”。本病常因正虛邪留而致病情纏綿難愈、反復發(fā)作。目前，很多抗病毒的西藥對本病有較好的療效，但對角膜修復，愈合及再生作用欠佳，且易復發(fā)。如用抗病毒藥物同時，合并使用能增強角膜修復，愈合及再生能力的藥物，則可使HSK更易愈合，減少愈合后遺留的瘢痕，達到防盲的目的。近10多年來研究發(fā)現(xiàn)，不少中藥對實驗性單純皰疹病毒性角膜炎有較好的療效，如趙海濱等研究表明魚腥草眼液具有一定抗病毒活性，對實驗性單純皰疹病毒性角膜炎有明顯的療效[6]。

目安眼膏含蜂蜜和阿昔洛韋，中醫(yī)認為蜂蜜除清熱解毒、潤燥止痛等功效，而且是配置眼膏較理想的增強劑和防腐劑。古代眼科方劑學中，常用于眼膏基質。以煉蜜為基質制成點眼膏是中醫(yī)眼科傳統(tǒng)制劑上一大特色，蜂蜜含大量的轉化酶(約62%～83%)，具有還原性,故能防止藥品有效成分的氧化變質，且有很高的化學穩(wěn)定性不與主藥起反應，故不影響主藥含量的測定[7]。同時阿昔洛韋是目前應用最廣的抗HSV藥物，也是現(xiàn)有抗HSV藥物中作用較強者。其作用機理為在HSV-1胸苷酶作用下，轉化為三磷酸衍生物，這種三磷酸阿昔洛韋能對HSV-1 DNA聚合酶產生強抑制作用，阻斷病毒DNA合成和抑制HSV-1復制[8]。從該實驗結果來看，4組兔角膜上皮病變程度差異如下：目安眼膏Ⅰ＜3%ACV眼膏≈目安眼膏Ⅱ＜基質，并表明兩種濃度目安眼膏對HSV-Ⅰ在角膜組織中的繁殖、復制均有抑制作用,并因此減輕角膜病變程度。但目安眼膏Ⅱ促進角膜恢復較目安眼膏Ⅰ慢,可能是由于蜂蜜濃度較高導致其滲透壓高影響角膜上皮細胞生長，而目安眼膏Ⅰ更有利于角膜上皮恢復。

[1]譚海波，張湘暉，張明亮，等.目安眼膏治療實驗性家兔單純皰疹性角膜炎研究[J].中國中醫(yī)眼科雜志，2003,13(1);12-14.

[2]倪蕊芝.蜂蜜滴眼液對角膜潰瘍的療效觀察[J].中國中醫(yī)眼科雜志，1997,3（2）：13.

[3]Wander A H,Centifan Y M,Kaufman H E.Strain specificity of clinical isolates of herps simplex virus[J].Arch Ophthalmol，1980,(98)：1 458-1 461.

[4]吳幼銳.實驗性家兔HSV-1角膜炎的掃描電鏡改變[J].眼科學報，1987,3(1)：47-51.

[5]Khardori N,Wong E,Nguyen H,et al.Effect of subinhibitory concentrations of clindamycin and trospectomycin on the adherence of staphylococcus epidermidis in an invitro model of vascular catheter colonization[J].Infect Dis,1992,（166）：108.

[6]趙海濱，彭清華，吳權龍，等.魚腥草滴眼液治療單純皰疹性角膜炎的實驗研究[J].中國中醫(yī)眼科雜志，2002，12（3）：129-131.

[7]肖國士.蜂蜜及其在眼科制劑上的應用 [J].中國中醫(yī)眼科雜志，1994,4(1)：42-43.

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