高效液相色譜法快速分離測(cè)定4種青霉素類藥物

關(guān)翠林，樊月琴

(山西大同大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院，山西大同 037009）

高效液相色譜法快速分離測(cè)定4種青霉素類藥物

關(guān)翠林，樊月琴

(山西大同大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院，山西大同 037009）

利用高效液相色譜法分離氨芐西林鈉、美洛西林鈉、青霉素V鉀、氯唑西林鈉4種青霉素類藥物.色譜柱為Shim-pack VP-ODS柱(150mm×4.6mm，4.6μm)，流動(dòng)相為0.02mol/L的磷酸二氫鉀溶液-甲醇(體積比為50：50),流速為1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)208 nm，柱溫40℃.在該色譜條件下，氨芐西林鈉、美洛西林鈉、青霉素V鉀、氯唑西林鈉能得到完全分離，線性關(guān)系良好 (r＞0.9944),用于4種青霉素含量的測(cè)定，回收率均在97.5%～100.7%之間,方法準(zhǔn)確、靈敏，適用于青霉素類藥物的質(zhì)量控制和含量測(cè)定.

高效液相色譜法 氨芐西林鈉 美洛西林鈉 青霉素V鉀 氯唑西林鈉

青霉素類藥物是一種重要的抗生素，20世紀(jì)40年代初，開始用于臨床.經(jīng)過(guò)半個(gè)多世紀(jì)的發(fā)展，合成出了性能更加優(yōu)良的耐酸耐酶青霉素(如氯唑西林鈉)和廣普長(zhǎng)效青霉素(如青霉素V鉀、氨芐西林鈉和美洛西林鈉)等，這些青霉素類藥物在臨床上應(yīng)用非常廣泛[1].

2000年版中國(guó)藥典二部[2]中對(duì)青霉素類藥物含量測(cè)定采用分光光度法或電位滴定法.分光光度法操作煩瑣，顯色不穩(wěn)定，易產(chǎn)生誤差.電位滴定法影響因素多，重現(xiàn)性差.目前高效液相色譜法已被廣泛用于青霉素類藥物的測(cè)定[3-8]，本文研究了高效液相色譜-紫外檢測(cè)法分離氯唑西林鈉、青霉素V鉀、氨芐西林鈉和美洛西林鈉四種青霉素類藥物的條件，并將建立的方法用于四種青霉素藥物制劑含量的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)該方法快速、準(zhǔn)確、靈敏，適用于青霉素類藥物的質(zhì)量控制和含量測(cè)定.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

日本島津(SHINADZU)LC-10A高效液相色譜儀系統(tǒng)：DGU-14A在線脫氣機(jī)，LG-10AT四元梯度泵，CTO-10A柱溫箱，SPD-M10A二極管陣列檢測(cè)器，CLASS-VP色譜工作站，Milli-Q純水器(Millipore公司)；HANGPING FA2004電子天平 (上海天平儀器廠).

甲醇為色譜純；氨芐西林鈉、美洛西林鈉、青霉素V鉀、氯唑西林鈉標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)于北京中生生物工程高科技公司；氨芐西林鈉、美洛西林鈉、氯唑西林鈉粉針劑和青霉素V鉀片樣品均購(gòu)于山西威奇達(dá)藥業(yè)有限公司；配制試劑用水均為Milli-Q純水器處理的超純水.

1.2 色譜條件

色譜柱：Shim-pack VP-ODS柱 (150 mm×4.6 mm，4.6μm)；流動(dòng)相：0.02mol/L的磷酸二氫鉀溶液-甲醇(體積比為50：50)；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：20μL；檢測(cè)溫度：40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：208 nm.

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 應(yīng)用試劑的配制

流動(dòng)相的配制：稱取適量的磷酸二氫鉀固體，加超純水分別制成濃度為 0.005、0.015、0.025、0.01、0.02 mol/L的磷酸二氫鉀溶液，再用0.45μm微孔過(guò)濾膜過(guò)濾.

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制

稱取氨芐西林鈉、美洛西林鈉、青霉素V鉀、氯唑西林鈉標(biāo)準(zhǔn)品各0.1 g，用流動(dòng)相配制成濃度為1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液；取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液各50μL，分別置于50 mL的容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度線，配成濃度為1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液.測(cè)定時(shí)取上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制成適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液.

1.3.3 樣品溶液的配制

稱取氨芐西林鈉、美洛西林鈉、氯唑西林鈉粉針劑和青霉素V鉀片粉末各50 mg，用流動(dòng)相溶解并定容于50 mL的容量瓶中，配成濃度為1 mg/mL的樣品溶液，用0.45μm微孔過(guò)濾膜過(guò)濾.測(cè)定時(shí)取上述濃度的溶液配置成適宜濃度的樣品溶液.

2 結(jié)果與討論

2.1 分離條件的選擇與優(yōu)化

2.1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取20μL的1μg/mL標(biāo)準(zhǔn)混合溶液進(jìn)樣，結(jié)果顯示：在208 nm處，氨芐西林鈉、美洛西林鈉、青霉素V鉀和氯唑西林鈉均有較靈敏的響應(yīng)，且干擾小、分離佳，便于檢測(cè)，因此選擇208 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng).

2.1.2 流動(dòng)相的選擇

以不同體積比的0.02 mol/L磷酸二氫鉀-甲醇為流動(dòng)相，以混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣分析.當(dāng)甲醇的比例為50%時(shí)，在12 min內(nèi)各組分能得到較好的分離，且分析時(shí)間較短，故選擇0.02mol/L磷酸二氫鉀-甲醇(50：50)為流動(dòng)相.

2.2 精密度試驗(yàn)

在1.2色譜條件下，用濃度為1μg/mL標(biāo)準(zhǔn)混合溶液日間連續(xù)進(jìn)樣11次，氨芐西林鈉、美洛西林鈉、青霉素V鉀、氯唑西林鈉的RSD分別為0.54%、1.02%、0.48%和0.37%.

2.3 方法的線性關(guān)系與檢出限

取適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用流動(dòng)相稀釋并定容于10 mL比色管中，配制濃度分別為0.05、0.10、0.50、1.00、2.00、5.00μg/mL等6個(gè)水平青霉素的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液.每個(gè)溶液分別進(jìn)樣3次，以峰面積對(duì)濃度作工作曲線，用稀釋法測(cè)定四種青霉素藥物的檢出限.其線性范圍、線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限列于表1，其中X表示青霉素的質(zhì)量濃度，Y表示青霉素的峰面積.

表1 四種青霉素的回歸分析結(jié)果及線性范

表2 回收率試驗(yàn)(n=3)

2.4 加標(biāo)回收試驗(yàn)

分別移取50μL 1.3.3樣品濾液各三份，分別置于50mL的容量瓶中，再分別加入25mL的1.00 μg/mL、50μL的1 mg/mL和100μL的1 mg/mL的氯唑西林鈉、青霉素V鉀、氨芐西林鈉、美洛西林鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，用流動(dòng)相稀釋至刻度.在1.2色譜條件下進(jìn)樣，做加標(biāo)回收試驗(yàn)，結(jié)果見表2.

2.5 實(shí)際樣品的測(cè)定

對(duì)1.3.3樣品濾液在上述色譜條件下操作，用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算氨芐西林鈉、美洛西林鈉、氯唑西林鈉和青霉素V鉀的含量，結(jié)果見表3.

表3 樣品測(cè)定結(jié)果(n=3)

圖1至圖5分別為青霉素類藥物標(biāo)準(zhǔn)混合溶液和樣品色譜圖.

圖1 四種青霉素標(biāo)準(zhǔn)混合溶液色譜圖

圖2 氯唑西林鈉樣品色譜圖(*)

圖3 青霉素V鉀樣品色譜圖(*)

圖4 氨芐西林鈉樣品色譜圖(*)

圖5 美洛西林鈉樣品色譜圖(*)

3 結(jié)語(yǔ)

目前，高效液相色譜-紫外檢測(cè)法已被廣泛用于各種青霉素類藥物的測(cè)定.它具有靈敏度高、選擇性好、分析時(shí)間短、樣品用量少和易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，已在醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用，但同時(shí)分離氨芐西林鈉、美洛西林鈉、青霉素V鉀、氯唑西林鈉四種青霉素類藥物含量還未見報(bào)道.該方法無(wú)需衍生化，且快速、準(zhǔn)確、靈敏度高，適用于青霉素類藥物的質(zhì)量控制和含量測(cè)定.

[1]李安良.藥物化學(xué)[M].北京：高等教育出版社，1999：571.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[S].北京:北京化學(xué)工業(yè)出版社，2000：353-354.

[3]LuoW H，Ang C YW，Deck J.Simultaneous determination of Amoxicillin and Ampicillin in bovinemilk by HPLCwith Fluorescence detection[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,1997，45：1264-1268.

[4]Shakoor O，Taylor R B.Analysis of Ampicillin，Cloxacillin and their related substances in capsules，syrups and suspensions by HPLC[J].The Analyst，1996,121(10)：1473-1477.

[5]王超，王星.柱前衍生高效液相色譜法測(cè)定豬肉中5種青霉素殘留量[J].分析化學(xué)研究簡(jiǎn)報(bào)，2001，29(7)：779-781.

[6]林萍，陳研.高效液相色譜法替代電位滴定法測(cè)定青霉素鈉含量[J].黑龍江醫(yī)藥，2004，17(4)：256-257.

[7]曾令高.高效液相色譜法測(cè)定氯唑西林鈉的含量及其有關(guān)物質(zhì)[J].藥物分析雜志，2004，24(4)：406-407.

[8]王超，李淑娟.測(cè)定牛奶中五種青霉素殘留量的高效液相色譜柱前衍生法[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2000，19(6)：72-74.

Rapid Separation and Determ ination of Four Penicillins by HPLC

GUAN Cui-lin，F(xiàn)AN Yue-qin
(School of Chemistry and Chemical Engineering，ShanxiDatong University，Datong Shanxi，037009)

A high performance liquid chromatographic method，coupled with ultraviolet detection(HPLC-UV)，was developed for the determination of Ampicillin Sodium，Mezlocilin Sodium，Phenoxymethylpenicillin Potassium and Cloxacillin Sodium.It employed a Shim-pack VP-ODS column(150mm×4.6mm，4.6μm)and amobile phase of 50 volumes of potassium dihydrogen phosphate and 50 volumes ofmethanol at a flow rate of 1.0mL/min.The detection wavelength was set at 208 nm；The temperature of column was 40℃.At this condition Ampicillin Sodium，Mezlocilin Sodium，Phenoxymethylpenicillin Potassium and Cloxacillin Sodium could be completely separated.The proposed method was used for the content determinioation of four penicillins preparation，the recovery was in the range 97.5%～100.7%.The proposed HPLCmethod is convenient，accurate.

high performance liquid chromatographic method (HPLC)；Ampicillin Sodium；Mezlocilin Sodium；Phenoxymethylpenicillin Potassium；Cloxacillin Sodium

O652.63

A

〔編輯楊德兵〕

1674-0874(2010)02-0038-03

2009-12-25

山西大同大學(xué)科研項(xiàng)目[2008K6]

關(guān)翠林(1968-)，女，山西陽(yáng)高人,碩士，副教授，研究方向:液相色譜的應(yīng)用.