金匱腎氣丸對“恐傷腎”模型小鼠醛固酮水平的調(diào)節(jié)作用

葉菁 邱麗瑛

（江西中醫(yī)學院附屬醫(yī)院 南昌 330006）

恐懼作為一種不良精神刺激，對腎氣和腎精的直接損傷，擾亂腎臟及其它臟腑多種功能活動，影響機體正常的生理秩序，是“恐傷腎”的關(guān)鍵所在。筆者應用小站臺水環(huán)境實驗建立“恐傷腎”小鼠模型，并給予金匱腎氣丸進行干預，以此研究金匱腎氣丸對心理應激小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用，并分析其抗心理應激損傷的作用機制，為臨床防治心身疾病奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 動物分組與處理 雄性昆明種小鼠120只，體重（20±1）g，年齡均為10月齡，將實驗小鼠置于空氣控制級別為SPF（Specific Pathogen Free）二級、室溫（24±1）℃、濕度（55±5）%、明暗條件12h轉(zhuǎn)換（6點開燈，18點熄燈）的環(huán)境下進行實驗。依據(jù)實驗設(shè)計，將動物按體重隨機分為24h應激組、24h應激+給金匱腎氣丸組、18h應激組、18h應激+給金匱腎氣丸組、12h應激組、12h應激+給金匱腎氣丸組、8h應激組、8h應激+給金匱腎氣丸組、4h應激組、4h應激+給金匱腎氣丸組、正常對照組、正常對照給藥組，每組10只。動物稱重后，按組放置不同的實驗間。實驗開始后，前十組動物站臺應激，應激期間每天豆奶粉流質(zhì)食物灌胃（4h組小鼠不給予食物灌胃），每4小時1次，每次灌胃量為0.8mL。正常對照組和正常對照給藥組不參與應激實驗，但同樣灌胃給食、給藥。

1.2 血清醛固酮水平的檢測 醛固酮含量的測定采用放免法。采集全血，盡快分離血清，將標本存放于2～8℃并于24h內(nèi)測定；或置-20℃以下冷凍，至使用前于室溫平衡，若有沉淀物形成，在平衡并混勻后4℃離心去除。測試試劑盒為天津九鼎醫(yī)學生物工程有限公司生產(chǎn)的專用試劑盒，儀器為科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司生產(chǎn)的GC-911γ放射免疫計數(shù)儀。

1.3 組織醛固酮水平的檢測 將各組小鼠處死，用75%酒精消毒后進入超凈工作臺，剖開胸腹腔，在冰面上完整地迅速取出腎上腺，濾紙吸干血后，將腎上腺加5mL DMEM培養(yǎng)液用細胞勻漿器勻漿，并置于-70℃冰箱保存?zhèn)溆?。組織醛固酮含量的測定仍采用放免法。測試試劑盒為天津九鼎醫(yī)學生物工程有限公司生產(chǎn)的專用試劑盒，儀器為科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司生產(chǎn)的GC-911γ放射免疫計數(shù)儀。

1.4 統(tǒng)計學方法 所有實驗結(jié)果用SPSS11.5軟件包進行統(tǒng)計，樣品的顯著性檢驗用方差分析和t檢驗，百分比值數(shù)用卡方檢驗。

2 結(jié)果

2.1 應激不同時間對小鼠血清醛固酮的影響及中藥調(diào)節(jié) 見表1。

表1 各組小鼠血清醛固酮水平及中藥調(diào)節(jié)作用 （±S）mg/mL

表1 各組小鼠血清醛固酮水平及中藥調(diào)節(jié)作用 （±S）mg/mL

注：與正常對照組相比，#P＜0.05；##P＜0.01；與對應應激組相比，*P＜0.05，**P ＞0.05。

組別 n 血清醛固酮含量正常對照組 10 128.56±50.83正常對照給藥組 10 140.60±31.25 4h應激組 10 287.19±121.54#4h應激給藥組 10 244.28±132.00**8h應激組 10 476.48±149.73##8h應激給藥組 10 457.84±256.02**12h應激組 10 630.77±212.66##12h應激給藥組 10 558.39±170.40**18h應激組 10 741.22±228.80##18h應激給藥組 10 709.32±305.35**24h應激組 10 917.84±478.92##24h應激給藥組 10 542.36±296.71*

2.2 應激不同時間對小鼠腎上腺組織醛固酮的影響及中藥調(diào)節(jié) 見表2。

表2 各組小鼠腎上腺組織醛固酮水平及中藥調(diào)節(jié)作用 （±S） mg/mL

表2 各組小鼠腎上腺組織醛固酮水平及中藥調(diào)節(jié)作用 （±S） mg/mL

注：與正常對照組相比，#P ＜0.05，##P ＜0.01；與對應應激組相比，*P ＜0.05，**P ＞0.05。

組別 n 組織醛固酮含量正常對照組 10 164.90±42.51正常對照給藥組 10 199.86±35.74 4h應激組 10 199.40±29.87 4h應激給藥組 10 167.87±57.94**8h應激組 10 231.92±72.43#8h應激給藥組 10 221.12±53.96**12h應激組 10 426.94±84.41##12h應激給藥組 10 350.26±73.26**18h應激組 10 485.34±89.13##18h應激給藥組 10 365.82±91.46**24h應激組 10 594.17±113.99##24h應激給藥組 10 420.59±79.62*

3 討論

心理應激是機體通過認識、評價而察覺到應激原（Stressor）的威脅時引起的心理、生理機能改變的過程。情志內(nèi)傷是中醫(yī)病因?qū)W之一，心理應激理論是西醫(yī)學的基本病理過程之一，兩種理論框架上具有一定的共通之處。由于神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)的變化，進而影響到機體蛋白質(zhì)、糖、脂肪的代謝變化，以及心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、泌尿生殖系統(tǒng)的病理變化[1]。應激反應是一種全身性的綜合反應，它除了激活下丘腦-垂體-腎上腺軸（HPA軸）和交感神經(jīng)系統(tǒng)-腎上腺髓質(zhì)釋放糖皮質(zhì)激素和兒茶酚胺類物質(zhì)外，還引起多種其它激素、肽類物質(zhì)、細胞因子等神經(jīng)內(nèi)分泌介質(zhì)的分泌增多，從各個方面調(diào)整機體的適應能力，以保持應激狀態(tài)下內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定[2]。

醛固酮（aldosterone，ALD）是腎上腺鹽皮質(zhì)激素的主要成分，是腎上腺皮質(zhì)球狀帶細胞合成分泌的一種甾體激素，是電解質(zhì)排泄的重要調(diào)節(jié)因子，在維持機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定中起著重要作用。傳統(tǒng)理論認為其由腎上腺皮質(zhì)束狀帶分泌，作用于腎臟集合管增加鈉水重吸收和鉀的排泄，主要受血管腎張素Ⅱ（AngⅡ）和血漿Na+、K+濃度調(diào)控。束狀帶分泌糖皮質(zhì)激素，網(wǎng)狀帶分泌性激素，兩帶主要受垂體分泌的促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）調(diào)控。ACTH不但促進糖皮質(zhì)激素的合成與分泌，而且是維持束狀帶和網(wǎng)狀帶正常結(jié)構(gòu)的決定因素。ALD通過對血流動力學的影響以及直接細胞作用兩種主要機制參與腎臟損傷。心理應激后可引起水鹽代謝紊亂，應激和應激適應的產(chǎn)生通過HPA軸的不同位點產(chǎn)生神經(jīng)內(nèi)分泌效應，參與應激反應。在應激反應中，腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)起到了重要作用。萬瑜等[3]的研究顯示，腎素-血管緊張素系統(tǒng)與經(jīng)典的應激激素反應系統(tǒng) （下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)及交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)）之間存在密切關(guān)系。陳新等[4]發(fā)現(xiàn)，在心理應激時，循環(huán)血中的血管緊張素Ⅱ及醛固酮水平可明顯升高。心理應激刺激了下丘腦-腺垂體系統(tǒng)，釋放出更多的ACTH，ACTH對ALD的分泌有促進作用。小站臺水環(huán)境作為應激原使多種激素水平升高，如腎上腺素、去甲腎上腺素、促腎上腺皮質(zhì)激素、β-內(nèi)啡肽、β-促脂素、血管緊張素等。這些激素均為刺激ALD分泌的激素，應激原持續(xù)存在，ALD等激素水平亦持續(xù)升高。ALD分泌調(diào)節(jié)比較復雜，它既受垂體ACTH的調(diào)控，又受血鈉、血鉀、細胞外容積的影響。在機體處于應激狀態(tài)下，血漿和腦脊液中AngⅡ含量增高，大量的AngⅡ促使ALD分泌增加，且直接收縮血管，使患者血管強烈收縮，水鈉潴留，進一步加重血液動力的障礙。如此反復，使血漿中ALD濃度持續(xù)上升。

中醫(yī)學認為，腎主納氣，最為首要的是調(diào)節(jié)氣機。從中醫(yī)學角度而言，不良情志刺激首先是影響了機體正常的氣機，進而氣血津液及臟腑功能失調(diào)，陰陽失衡，機體的正氣受到損害，這與現(xiàn)代應激學說的應激原理有許多相似之處，而腎主氣的功能對機體的應激反應具有重要的調(diào)節(jié)作用?？謶謶た芍聶C體下丘腦-垂體-靶腺軸的損傷，而這又是中醫(yī)腎的功能基礎(chǔ)，這些器官的損傷必然導致“腎”的功能減退，這既證明了恐會傷腎，又初步表明了“恐傷腎”的病理機制，本研究亦為進一步研究中醫(yī)學腎臟與慢性心理應激的關(guān)系提供了一定的實驗依據(jù)，對中醫(yī)“恐傷腎”理論的研究等都具有良好的理論價值和現(xiàn)實意義。

本實驗研究表明，金匱腎氣丸抑制慢性心理應激小鼠HPA軸的興奮性，可以有效地改善小鼠的心理應激反應。本方為一首治療腎虛證的方劑，其組方以及藥物的配伍特點為補陰藥與助陽藥相互為用，以陰生陽長，陰陽互根；其作用為溫補腎陽，能調(diào)節(jié)腎的生理功能，腎主氣化，為生命之本，本方具有滋陰助陽的作用，使腎陽振奮，氣化復常。金匱腎氣丸通過補益腎氣、強壯精髓，能有效降低心理應激小鼠血清ALD水平，起到了改善患病機體免疫功能狀態(tài)的治療效果。該藥的改善作用可能與其對各種神經(jīng)遞質(zhì)和激素的代謝調(diào)節(jié)有關(guān)，通過抑制腎上腺糖皮質(zhì)激素的合成可能是其作用機理之一。同時也說明補腎法及其方藥具有良好的抗心理應激損傷作用。

[1]金惠銘.病理生理學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,2009.136-138

[2]邵楓,林文娟,王瑋雯.心理應激的免疫抑制作用及神經(jīng)內(nèi)分泌反應的相關(guān)性[J].心理學報,2001,33（1）：43-47

[3]萬瑜,楊鋼,萬曙霞,等.腎素-血管緊張素系統(tǒng)-應激激素反應系統(tǒng)[J].生理學報,1996,48（6）：521-522

[4]陳新,趙英,何愛桃,等.心理應激前后血液中部分血管活性物質(zhì)濃度的變化[J].中國行為醫(yī)學科學,2003,12（2）：148-149