非小細(xì)胞肺癌患者中Survivin抗體的臨床意義及診斷價值

馬麗 岳文濤 張麗娜 王玥 張春彥 楊學(xué)惠

Survivin作為凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis proteins, IAP）家族的重要成員，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。Survivin幾乎表達(dá)于所有的惡性腫瘤，但在人體正常終末分化的組織細(xì)胞中不表達(dá)或低表達(dá)。腫瘤自身抗體產(chǎn)生的機制雖然還不明確，但是同腫瘤相關(guān)抗原一樣，其與腫瘤的發(fā)生發(fā)展存在密切的聯(lián)系。據(jù)研究顯示在多種癌癥血清中可以檢測到Survivin自身抗體的存在，如頭頸癌、卵巢癌[1]以及消化系統(tǒng)腫瘤胃癌[2]、結(jié)腸直腸癌[3]、肝癌[4]等。在肺癌患者血清中同樣可以檢測到Survivin自身抗體[3,5]，但Survivin自身抗體能否成為具有肺癌診斷價值的腫瘤標(biāo)志物以及與肺癌病理參數(shù)是否存在相關(guān)性，目前尚不統(tǒng)一。本研究旨在以Survivin融合蛋白原核表達(dá)為基礎(chǔ)，建立肺癌患者血清中Survivin自身抗體的間接ELISA方法，探討Survivin自身抗體在215例非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）患者中可能存在的臨床意義及診斷價值。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞系及菌株 肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、E.coil菌株BL21(DE3)以及pET30a(+)載體為北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所細(xì)胞生物學(xué)實驗室凍存。

1.2 材料 pGEM-Teasy、T4 DNA連接酶、高保真酶PCR試劑盒購自NEB公司；限制性內(nèi)切酶NdeI和XhoI購自寶拓科技發(fā)展有限公司；逆轉(zhuǎn)錄酶、Oligo(dT)15 Primer購自Promega公司；鎳離子親和層析柱購自威格拉斯生物技術(shù)（北京）有限公司；Survivn單克隆抗體購自優(yōu)寧維公司；PCR引物合成及DNA測序由上海生工北京分公司生物技術(shù)有限公司完成。

1.3 研究對象 本研究使用的血清標(biāo)本于2008年3月-2009年12月由北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所標(biāo)本庫收集并提供。89例健康志愿者，20例肺部良性疾病，包括10例肺結(jié)核、6例肺炎、2例支氣管擴張癥、2例錯構(gòu)瘤；215例NSCLC患者，男性147例，女性68例，平均年齡59.25歲，其中＜60歲106例，≥60歲109例，年齡最大84歲，最小30歲。鱗癌83例，腺癌132例，臨床分期：依據(jù)1997年國際抗癌聯(lián)盟（UICC）TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，其中I期-II期44例，III期-IV期161例。全組血清收集標(biāo)準(zhǔn)：健康對照組均身體健康，體檢無異常表現(xiàn)，臨床各項生化指標(biāo)正常；肺癌患者血清標(biāo)本以及肺部良性疾病患者血清標(biāo)本均采集自首次到北京市胸科醫(yī)院就診，未經(jīng)任何化療和治療，且腫瘤類型均經(jīng)組織病理學(xué)證實，標(biāo)本分裝后于-80oC凍存。

1.3 方法

1.3.1 RT-PCR 取5×106對數(shù)生長期肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞，Trizol一步法提取總RNA，使用Access RT-PCR System（Promega A1280）反轉(zhuǎn)錄試劑盒，按照說明書操作獲得cDNA。

根據(jù)Survivin基因組序列用primer premier 5軟件設(shè)計引物，在正、負(fù)鏈的5’端分別引入NdeI和XhoI酶切位點，正義鏈：5’-TTAACTCGCGATCCATGGCAGCCAGC-3’，反義鏈：5’-AATACATATGATGGGTGCCCCGACG-3’）。取cDNA模板2 μL、2 U/μL高保真DNA聚合酶1 μL、10 mmol/L dNTP 1 μL、10 mmol/L上、下游引物各1 μL、10×PCR buffer 5 μL，補水至50 μL。熱啟動95oC、5 min，循環(huán)參數(shù)為94oC、30 s，56oC、45 s，72oC、1 min，共30個循環(huán)，72oC延伸10 min，4oC終止反應(yīng)。

1.3.2 表達(dá)載體pET30a(+)/Survivin的構(gòu)建和鑒定 PCR產(chǎn)物克隆入載體pGEM-Teasy中，轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞E.coli DH5α，藍(lán)白斑篩選，限制性內(nèi)切酶NdeI/XhoI雙酶切初步鑒定重組質(zhì)粒，挑選陽性克隆菌株，擴增并提取pGEM-Teasy/Survivin質(zhì)粒。NdeI/XhoI雙酶切pGEM-Teasy/Survivin和pET30a(+)，65oC、20 min酶滅活，切膠回收酶切片段。pET30a(+) 1 μL、pGEM-Teasy/Survivin 3 μL、T4連接酶1 μL、2×T4連接buffer 5 μL，4oC連接過夜，構(gòu)建表達(dá)載體pET30a(+)/Survivin，并轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞E.coli DH5α，挑取克隆菌株，擴增提取質(zhì)粒，PCR及雙酶切鑒定的陽性克隆菌株送往上海生物技術(shù)有限公司北京分公司進(jìn)行測序，將測序結(jié)果正確的pET30a(+)/Survivin轉(zhuǎn)化入E.coli BL21(DE3)中，用含45 μg/mL卡那青霉素LB固體培養(yǎng)基37oC過夜培養(yǎng)。

1.3.3 pET30a(+)/Survivin在E.coli BL21(DE3)中的誘導(dǎo)表達(dá) 挑取pET30a(+)/Survivin/E.coli BL21(DE3)克隆菌斑，37oC、250 rpm過夜振蕩培養(yǎng)，按照1:100比例接種于LB-kan+液體培養(yǎng)液（含30 μg/mL卡那青霉素的LB），37oC、250 rpm培養(yǎng)至OD600約0.6-0.8時，以終濃度為0.1 mmol/L、0.2 mmol/L、0.3 mmol/L、0.4 mmol/L、0.8 mmol/L、1 mmol/L IPTG誘導(dǎo)菌液3 h，分別取1 mL菌液，12 000 rpm離心1 min收集菌體，取50 μL 2×loading buffer與菌體充分混勻、100oC水浴5 min，離心后取10 μL上清用于12% SDS-PAGE電泳分析，篩選最適IPTG誘導(dǎo)濃度，同時設(shè)空載體pET30a(+)以及未誘導(dǎo)pET30a(+)/Survivin作為陰性對照。

1.3.4 Survivin融合蛋白的Western blot鑒定 取最適IPTG誘導(dǎo)菌液樣本10 μL，經(jīng)12% SDS-PAGE電泳分離后，電轉(zhuǎn)移至硝酸纖維膜上，5%脫脂奶粉4oC封閉過夜，分別用1:500抗His抗體、1:1 000 Survivin單克隆抗體37oC孵育2 h，PBST洗滌3次×10 min，1:10 000羊抗小鼠抗體-HRP 37oC孵育1 h，PBST洗滌3次×10 min，ECL顯色，Western blot分析。

1.3.5 包涵體的制備及蛋白純化 利用細(xì)胞分層分級技術(shù)，確定Survivin融合蛋白的表達(dá)形式。500 mL細(xì)菌培養(yǎng)液在最適IPTG濃度下誘導(dǎo)培養(yǎng)，收集菌體，冰浴超聲破碎，7 000 rpm、4oC離心20 min，收集沉淀，溶解于含15 mL 6 mol/L鹽酸呱、10 mmol/L Tris·Cl（pH7.0）、10 mmol/L DTT的變性液中，4oC過夜。次日7 000 rpm、4oC離心20 min，收集上清，0.45 μm濾膜過濾，4oC下以0.5 mL/min速度加入鎳離子親和層析柱中，而后分別用20 mmol/L、30 mmol/L、50 mmol/L、100 mmol/L、200 mmol/L咪唑溶液洗脫目的蛋白。收集各洗脫峰流出液，分別取10 μL樣本100oC水浴5 min，經(jīng)12% SDS-PAGE電泳確定并回收含有Survivin融合蛋白的洗脫液，4oC下PBS（pH7.4）透析3 h，冷凍干燥所得的蛋白干粉于-20oC保存。

1.3.6 間接ELISA方法的建立和血清樣本的檢測 Survivin蛋白（純度＞95%）以15 μg/mL溶于0.05 mol/L碳酸鹽緩沖液（pH9.6）中，100 μL/孔，4oC靜置過夜；棄去板孔內(nèi)液體，200 μL PBST洗板3次；100 μL 5%脫脂奶粉37oC封閉1 h；腫瘤患者血清1 μL/孔，37oC孵育2 h；200 μL PBST洗板3次；100 μL 1:10 000稀釋的羊抗人IgG-HRP， 37oC孵育1 h；200 μL PBST洗板4次；100 μL TMB顯色液，37oC避光顯色5 min；100 μL終止液終止顯色反應(yīng)，自動酶標(biāo)儀上讀取450 nm處OD值。PBS作為陰性對照孔，1:400 Survivin單克隆抗體作為陽性控制孔，10份健康人血清標(biāo)本作為陰性控制孔，幫助評價不同孔板間的差異以減少板間誤差，空白孔調(diào)零。

1.3.7 數(shù)據(jù)處理 本實驗中血清樣品OD值均取復(fù)孔均值；采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理和統(tǒng)計分析，χ2檢驗用于計數(shù)資料統(tǒng)計分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RT-PCR的結(jié)果 Survivin基因RT-PCR擴增產(chǎn)物及陰性對照（PBS作為模板）分別取5 μL樣本，經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析，結(jié)果如圖1示：在250 bp-500 bp DNA marker（上海生工DL2000）之間顯示的DNA條帶與人Survivin基因的cDNA 429 bp相符合，陰性對照無條帶出現(xiàn)。

2.2 重組質(zhì)粒的鑒定 重組質(zhì)粒pGEMT-Teasy/Survivin雙酶切后得到500 bp左右大小的片段，亞克隆至pET30a(+)中， NdeI及NdeI和XhoI酶切pET30a(+)/Survivin重組質(zhì)粒，10 μL酶切產(chǎn)物樣本經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析結(jié)果如圖2示，單酶切產(chǎn)物與線型pET30a(+)/Survivin質(zhì)粒的位置大小一致，雙酶切產(chǎn)物在400 bp-500 bp之間有一條明顯片段。酶切產(chǎn)物測序結(jié)果經(jīng)BLAST比對，與GenBank上所報道的人Survivin基因相一致，pET30a(+)/Survivin表達(dá)載體構(gòu)建成功。

2.3 Survivin蛋白的表達(dá)及鑒定 菌液經(jīng)不同濃度IPTG誘導(dǎo)，收集并制備樣本，點樣于12%SDS-PAGE電泳，分析結(jié)果如圖3示，在約19 kDa處出現(xiàn)一新蛋白條帶，其含量約占菌體總蛋白的50%，而空載體轉(zhuǎn)化的菌株無相應(yīng)蛋白條帶出現(xiàn)，說明新生蛋白條帶非空載體pET30a(+)重組到E.coil BL21(DE3)所表達(dá)的蛋白；pET30a(+)/Survivin未誘導(dǎo)菌株同樣無相應(yīng)蛋白條帶出現(xiàn)，說明在無IPTG誘導(dǎo)情況下，重組至E.coil BL21(DE3)中的Survivin基因是不能在E.coil BL21(DE3)中表達(dá)；而在IPTG誘導(dǎo)下，重組至E.coil BL21(DE3)中的Survivin基因可成功表達(dá)Survivin蛋白；由于誘導(dǎo)蛋白表達(dá)的IPTG濃度的不同，導(dǎo)致Survivin蛋白表達(dá)量不同，以0.4 mmol/L IPTG濃度誘導(dǎo)E.coil BL21(DE3)時，Survivin蛋白表達(dá)量最高，為最優(yōu)蛋白表達(dá)條件。Western blot分析結(jié)果如圖4示：抗His標(biāo)簽抗體和抗Survivin單克隆抗體孵育的新生蛋白條帶處，均可見與Survivin蛋白分子量大小相一致的特異性抗原、抗體反應(yīng)條帶，進(jìn)一步證實新生條帶為Survivin蛋白。

圖 1 Survivin基因PCR擴增的結(jié)果。M：DNA marker；1：Survivin RT-PCR產(chǎn)物；2：陰性對照。Fig 1 PCR amplification of Survivin. M: DNA marker; 1: RT-PCR product of Survivin; 2: Negtive control.

圖 2 重組質(zhì)粒的酶切鑒定。M：DNA marker；1：pET30a(+)/Survivin質(zhì)粒；2：單酶切產(chǎn)物；3：雙酶切產(chǎn)物。Fig 2 Restriction enzyme digestion analysis of the recombinant plasmid. M: DNA Marker; 1: pET30a(+)/Survivin plasmid; 2: Single restriction enzyme digestion; 3: Double restriction enzyme digestion.

圖 3 不同濃度IPTG誘導(dǎo)的Survivin的表達(dá)。M：Protein marker；1：空載體pET30a(+)；2：0 mmol/L IPTG；3：0.1 mmol/L IPTG；4：0.2 mmol/L IPTG；5：0.3 mmol/L IPTG；6：0.4 mmol/L IPTG；7：0.8 mmol/L IPTG；8：1 mmol/L IPTG。Fig 3 The expressions of pET30a(+) and pET30a(+)/Survivin induced at different IPTG concentraions. M: Protein marker; 1: pET30a(+); 2: 0 mmol/L IPTG; 3: 0.1 mmol/L IPTG; 4: 0.2 mmol/L IPTG; 5: 0.3 mmol/L IPTG; 6: 0.4 mmol/L IPTG; 7: 0.8 mmol/L IPTG; 8: 1 mmol/L IPTG.

圖 4 Survivin蛋白的Western blot的鑒定。M：Protein marker；1：抗his單克隆抗體孵育；2：抗survivin單克隆抗體孵育。Fig 4 The Western blot result of Survivin. M: Protein marker; 1: Anti-his monoantibody; 2: Anti-Survivin monoantibody.

圖 5 Survivin蛋白的純化。M：Protein marker；1：超聲后上清；2：溶解的包涵體；3：20 mmol/L咪唑洗脫液；4：30 mmol/L洗脫液；5：50 mmol/L咪唑洗脫液；6：純化的Survivin蛋白。Fig 5 Purification of Survivin protein. M: Protein marker; 1: Supersonical supernatant; 2: Solved inclusion; 3: 20 mmol/L iminazole eluention; 4:30 mmol/L iminazole eluention; 5: 50 mmol/L iminazole eluention; 6:The purificationof Survivin protein.

2.4 Survivin融合蛋白的純化 利用細(xì)胞分層分級技術(shù)確定Survivin蛋白在E.coil BL21(DE3)中是以包涵體形式大量表達(dá)。Survivin融合蛋白的C端含有6×his標(biāo)簽，采用鎳離子親和層析方法純化蛋白，利用不同濃度咪唑洗脫液洗脫蛋白，并將超聲后的上清液及不同濃度的咪唑洗脫液收集行12% SDS-PAGE電泳如圖5示，菌體冰浴超聲后上清中未見Survivin蛋白條帶，說明Survivin蛋白未表達(dá)在細(xì)菌的周質(zhì)腔中；而在含有20 mmol/L、30 mmol/L、50 mmol/L咪唑的洗滌液中可見大量的雜蛋白，說明低濃度咪唑起到了去除雜蛋白的作用；而當(dāng)洗脫液中的咪唑濃度為100 mmol/L時，可將Survivin蛋白洗脫下來，經(jīng)透析、濃縮獲得純度在95%以上Survivin蛋白。

2.5 NSCLC患者血清中Survivin自身抗體的檢測及臨床意義 利用間接ELISA方法檢測血清中Survivin自身抗體的含量，其中89例健康志愿者的A450最高值為0.683，最低值為0.162，平均值為0.427，標(biāo)準(zhǔn)差為0.115。以Mean+2SD作為陽性血清樣品的評判標(biāo)準(zhǔn)，A450≥0.657即可判為Survivin自身抗體陽性；反之，則判為陰性。Survivin在215例NSCLC患者血清的陽性率為19.5%，特異性為88.9%。而在20例肺部良性疾病患者血清中Survivin抗體檢測均為陰性，由于良性疾病的標(biāo)本例數(shù)太少，統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果不能充分代表肺部良性疾病患者情況，只能以此作為參考。

Survivin自身抗體與NSCLC患者病理參數(shù)之間是否存在統(tǒng)計學(xué)意義上的相關(guān)性，目前還存在著爭議，本實驗認(rèn)為Survivin自身抗體在NSCLC患者血清中的含量與肺部原發(fā)腫瘤的大小存在著明顯的統(tǒng)計學(xué)意義上的相關(guān)性（P＜0.05），即NSCLC患者血清中Survivin自身抗體檢測為陽性時，肺部原發(fā)腫瘤體積≥3 cm的可能性越大。Survivin自身抗體在NSCLC患者中血清中的含量與肺部腫瘤存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移也具有統(tǒng)計學(xué)意義上的相關(guān)性（P＜0.05），即NSCLC患者血清中Survivin自身抗體檢測為陽性時，NSCLC患者的腫瘤易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。而Survivin自身抗體在NSCLC患者中血清中的含量與NSCLC患者的年齡、性別、是否吸煙、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期均無相關(guān)性，具體數(shù)據(jù)見表1。

2.6 腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合檢測 本實驗通過對215例NSCLC患者病歷資料的整理及Survivin自身抗體在NSCLC患者血清中表達(dá)情況進(jìn)行統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，CEA與Survivin自身抗體聯(lián)合檢測的陽性率為42.79%，明顯高于癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA）與神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuronspecific enolase, NSE）、鱗狀細(xì)胞癌抗原（squamous cell carcinoma, SCC）、細(xì)胞角蛋白（cytokeratin,CYFせ）、胃泌素釋放肽前體（pro-gastrin releasing peptide,ProGRP）的聯(lián)合檢測的陽性率，具體數(shù)據(jù)見表2。

表 1 臨床病理參數(shù)與Survivin自身抗體表達(dá)之間的關(guān)系Tab 1 The relationship between clinicopathological parameters and the expression of anti-Survivin antibody in NSCLC

表 2 幾種腫瘤標(biāo)志物在NSCLC患者中的聯(lián)合檢測的結(jié)果Tab 2 The combined detection result of tumor markers in NSCLC

3 討論

Survivin是凋亡抑制蛋白家族中的最強的凋亡抑制因子。人Survivin基因定位于17q25，全長1 447 kb，含有4個外顯子和3個內(nèi)含子，編碼142個氨基酸，蛋白相對分子質(zhì)量約16.5 kDa。Survivin蛋白幾乎表達(dá)于所有惡性腫瘤，而在成人終末分化組織不表達(dá)或低表達(dá)。腫瘤相關(guān)的自身抗體同腫瘤相關(guān)抗原一樣與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展存在著密切聯(lián)系。目前研究顯示在許多種癌癥中均可以檢測到Survivin自身抗體的存在。為了探索Survivin自身抗體在NSCLC患者中可能存在臨床診斷價值，本實驗成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體pET30a(+)/Survivin，誘導(dǎo)表達(dá)、純化純度在95%以上的Survivin融合蛋白，并建立間接ELISA方法對215例NSCLC患者、89例健康對照以及20例肺部良性疾病患者進(jìn)行Survivin自身抗體的血清學(xué)檢測，結(jié)果顯示Survivin自身抗體在NSCLC患者血清中檢測的陽性率為19.5%，特異性為88.9%，與目前的研究結(jié)果相類似。Yagihashi等[6]利用間接ELISA方法檢測31例NSCLC患者血清中Survivin自身抗體，其陽性率為58.1%；在Rohayem等[7]研究顯示51例肺癌患者的血清中Survivin自身抗體的陽性率為21.6%；而Karanikas等[8]研究結(jié)果顯示Survivin自身抗體在76例NSCLC患者血清中的陽性率為7.7%。幾個實驗組所得的Survivin自身抗體的陽性率均與本實驗的Survivin自身抗體在肺癌患者血清中檢測的陽性率不一致，分析其原因可能是由于樣本來源、樣本大小以及使用的評判標(biāo)準(zhǔn)不同，在實驗結(jié)果上可能存在著一些差異，但在肺癌的研究中Survivin自身抗體仍是個比較有意義的腫瘤標(biāo)志物。到目前為止，Survivin自身抗體在NSCLC患者血清中表達(dá)量至今仍未能得到一個公認(rèn)的陽性定量標(biāo)準(zhǔn)，還需大量實驗進(jìn)一步研究。

Survivin自身抗體與癌癥患者病理參數(shù)之間是否存在統(tǒng)計學(xué)意義上的相關(guān)性，目前還存在著爭議，Karanikas等[8]研究結(jié)果顯示，Survivin自身抗體與NSCLC患者的病理參數(shù)之間的相關(guān)性無統(tǒng)計學(xué)意義上，僅能作為一個預(yù)后及藥效評價的參考指標(biāo)。而本實驗認(rèn)為NSCLC患者血清中Survivin自身抗體檢測為陽性時，肺部原發(fā)腫瘤體積≥3 cm的可能性越大，NSCLC患者的腫瘤更易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。腫瘤的轉(zhuǎn)移與原發(fā)腫瘤的大小的聯(lián)系緊密，原發(fā)腫瘤體積越大，腫瘤易發(fā)生轉(zhuǎn)移。但是本實驗經(jīng)相關(guān)分析得出原發(fā)腫瘤大小與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移未存在明顯相關(guān)性（r=0.167, P＞0.05），因此本實驗認(rèn)為NSCLC患者血清中的Survivin自身抗體為陽性時，NSCLC患者的腫瘤更易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。這一結(jié)論為今后Survivin自身抗體能否成為術(shù)前評估、腫瘤惡化程度及腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的參考指標(biāo)提供了潛在的研究價值。

20例肺部良性疾病患者血清中Survivin抗體檢測均為陰性，由于肺部良性疾病的標(biāo)本例數(shù)太少，不能充分說明Survivin自身抗體特異性較高這一優(yōu)勢，還需大量實驗進(jìn)一步證實。

Survivin自身抗體在215例NSCLC中的陽性檢出率不是很高，為提高腫瘤的檢測的敏感性，腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合檢測成為腫瘤臨床檢測的趨勢。目前以CEA、NSE、SCC、CYFRA、ProGRP的聯(lián)合應(yīng)用最為廣泛，但是這種組合并非是針對NSCLC的臨床檢測所設(shè)計，敏感性不是很高。為了提高診斷的質(zhì)量、尋找特異性和敏感性較高的腫瘤標(biāo)志物，腫瘤標(biāo)志物的不同組合的聯(lián)合檢測成為新的研究熱點。本實驗通過對215例NSCLC患者病歷資料的整理及Survivin自身抗體在NSCLC患者血清中表達(dá)情況進(jìn)行統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，CEA與Survivin自身抗體聯(lián)合檢測的陽性率為42.79%，明顯高于CEA與NSE、SCC、CYFRA、ProGRP的聯(lián)合檢測的陽性率，大大提高了腫瘤標(biāo)志物在NSCLC檢測的敏感性，為Survivin自身抗體可能應(yīng)用于肺癌的臨床檢測提供了廣闊的應(yīng)用前景。

總之，Survivin自身抗體作為NSCLC診斷的新亮點，其潛在價值越來越引起腫瘤研究者的廣泛關(guān)注。Survivin自身抗體與其它腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合檢測在腫瘤臨床診斷上具有廣闊的研究前景，尤其是對于高危人群的篩選和腫瘤的早期診斷上，Survivin自身抗體潛在的應(yīng)用價值還需不斷的探索。