HPLC 法測(cè)定利血平注射液中利血平的含量

肖音，郭偉英（遼寧醫(yī)學(xué)院，錦州市121001）

利血平注射液是由枸櫞酸、L-鹽酸半胱氨酸、硫脲、濃氨水、丙二醇、注射用水制成的肌肉注射用制劑，其通過(guò)抗去甲腎上腺素能神經(jīng)產(chǎn)生降低血壓的作用，臨床用于高血壓危象。利血平注射液載于《中國(guó)藥典》2005版[1]，其含量測(cè)定方法采用紫外吸收分光光度（UV）法。由于該制劑中輔料多達(dá)6種，所以用UV法進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，需進(jìn)行復(fù)雜的預(yù)處理，如采取不同溶劑進(jìn)行多次提取，不僅操作煩瑣且提取時(shí)所用的氯仿等有機(jī)溶劑對(duì)操作人員身體有嚴(yán)重?fù)p害。而目前尚未見(jiàn)關(guān)于以高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定利血平注射液中利血平含量的文獻(xiàn)報(bào)道[2～4]。筆者在本文中建立了以HPLC法代替UV法測(cè)定該制劑含量的方法。結(jié)果表明，該法簡(jiǎn)便、精確，可用于利血平注射液的含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

FL2200 HPLC儀、FL2200紫外檢測(cè)器、FL9500S色譜工作站均由浙江溫嶺福立分析儀器有限公司提供；BS223S型電子天平（北京賽多利斯系統(tǒng)有限公司）。

利血平注射液（廣東邦民制藥廠有限公司，批號(hào)：20080306、20080712、20080904，規(guī)格：1 mg·1 mL－1）；利血平標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100041-200311，純度：99.99%）；甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純，水為自制重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Venusil XBP-C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（52∶48，用冰醋酸調(diào)酸度為pH＝（3±0.2））；檢測(cè)波長(zhǎng)：268 nm；流速：1 mL·min－1；柱溫：28 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備。精密稱取利血平標(biāo)準(zhǔn)品10 mg，置于100 mL容量瓶中，甲醇溶解并加至刻度，搖勻，即得濃度為0.1 mg·mL－1的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，備用。

2.2.2 供試品溶液的制備。取利血平注射液以1支，精密量取1 mL置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備。按處方比例取不含利血平的其它成分，照生產(chǎn)工藝和“2.2.2”項(xiàng)下方法制成缺利血平的陰性樣品溶液。

2.3 專屬性考察

分別吸取標(biāo)準(zhǔn)品貯備液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10 μL，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果，利血平的保留時(shí)間約7.4 min，主峰與輔料峰分離良好，且陰性樣品無(wú)干擾，色譜見(jiàn)圖1

圖1 高效液相色譜圖A.標(biāo)準(zhǔn)品；B：陰性樣品；C.供試品；1.利血平Fig 1 HPLC chromatographyA.standard sample；B.negative control；C.test sample；1.reserpine

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密吸取上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，加入甲醇稀釋至不同濃度4、6、8、10、12、14、16 μg·mL－1，分別取10 μL注入色譜儀，按上述“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。以進(jìn)樣量（x，μg·mL－1）為橫坐標(biāo)，峰面積（y）為縱坐標(biāo)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為y＝4.870 2x+0.208 5（r＝0.999 1）。結(jié)果表明，利血平檢測(cè)濃度在4～16 μg·mL－1范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

取濃度為10 μg·mL－1的標(biāo)準(zhǔn)品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定。結(jié)果，RSD＝0.37%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品（批號(hào)：080306）6份，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，各取樣10 μL測(cè)定，結(jié)果，計(jì)算得含量的RSD＝1.1%，表明方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批供試品溶液10 μL分別于0、2 、4 、6、8、10、12 h進(jìn)樣，測(cè)定。結(jié)果，峰面積的RSD＝0.84%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的利血平注射液，分別精密加入利血平標(biāo)準(zhǔn)品適量，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.9 樣品含量測(cè)定

取3批樣品（批號(hào)分別為20080306、20080712、20080904），照“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定利血平的峰面積，計(jì)算含量，并與UV法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較，見(jiàn)表2。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝3）

3 討論

利血平在218、268、292 nm波長(zhǎng)處均有最大吸收，其中以在268 nm波長(zhǎng)下吸收最強(qiáng)，故確定最大吸收波長(zhǎng)為268 nm。

《中國(guó)藥典》采用UV法測(cè)定利血平注射液含量時(shí)，由于制劑中輔料過(guò)多且結(jié)構(gòu)對(duì)測(cè)定造成干擾，所以必須進(jìn)行多次提取，步驟煩瑣，且提取時(shí)用到了氯仿等高致癌有機(jī)溶劑，這些問(wèn)題都可以通過(guò)本文的HPLC法得到解決，采用HPLC法可以直接進(jìn)樣測(cè)定。

因國(guó)內(nèi)尚未有關(guān)HPLC法測(cè)定利血平注射液含量的文獻(xiàn)報(bào)道，所以筆者建立的HPLC法對(duì)利血平注射液的含量測(cè)定方法是一種有益的補(bǔ)充，且本文方法與UV法測(cè)得利血平注射液含量的結(jié)果基本一致，但與后者相比較，本法測(cè)定結(jié)果更準(zhǔn)確，精密度高，操作更簡(jiǎn)便。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：264.

[2]梁選革，石慧秋.HPLC法測(cè)定復(fù)方利血平片中利血平的含量[J].中國(guó)藥房，2007，18（25）：1 978.

[3]王 昕，孫 悅，米亞嫻.HPLC法測(cè)定復(fù)方降壓平片中利血平的含量[J].天津藥學(xué)，2003，15（6）：15.

[4]歐陽(yáng)曉梅，何英梅，常 琦.RP-HPLC法測(cè)定利血平片劑的含量[J].中國(guó)藥事，2003，17（12）：758.