藜蒿舒壓膠囊的毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)

諶樂(lè)禮，蔡 宏，張維民，吳 爭(zhēng)，夏芝璐，丁 晟，鄧奇濤，肖 崗

(江西省疾病預(yù)防控制中心，江西 南昌 330029)

藜蒿舒壓膠囊是由藜蒿提取物為原料制成的保健食品。藜蒿(Artemisia selengensis Turcz)學(xué)名狹葉艾，又名蘆蒿、水蒿、青艾等，主要生長(zhǎng)在鄱陽(yáng)湖一帶。本草綱目草部第十五卷記載：“藜蒿氣味甘甜無(wú)毒，主治五脹邪氣，風(fēng)寒濕脾，補(bǔ)中益氣，長(zhǎng)毛發(fā)，久食輕身，耳聰目明，防衰。中醫(yī)認(rèn)為其除食用之外還有清熱、利濕、殺蟲之功能?！庇欣酢㈤_胃、行水和解毒等功效。

近年來(lái)研究表明,藜蒿具有多方面的藥理作用[1-2]，同時(shí)藜蒿還含有豐富的人體必需微量元素和黃酮類化合物，可作為保健食品原料和純天然抗氧化劑[3-4]。藜蒿舒壓膠囊是以藜蒿生物堿具有降壓藥理作用而開發(fā)的保健食品。本實(shí)驗(yàn)采用保健食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法[5]，對(duì)藜蒿舒壓膠囊的食用安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 受試物

藜蒿舒壓膠囊，內(nèi)容物為固體粉末。人體推薦量3g/60kgBW/d。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康SPF級(jí)ICR小鼠和SPF級(jí)SD大鼠均由西普爾必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司(許可證號(hào)為SCXK(滬)2003-0002)提供，小鼠體重 18～22g，大鼠體重 60g左右。動(dòng)物房許可證號(hào)SYXK(贛)2007-0001。

1.3 方法

1.3.1 小鼠急性毒性試驗(yàn)采用最大耐受劑量法，劑量為20.0g/kg BW。Ames試驗(yàn)用平板摻入法。骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)用30h給受試物法。小鼠精子畸形試驗(yàn)為連續(xù)5d經(jīng)口給予受試物：于首次給受試物后的第35d處死動(dòng)物，取附睪制片、固定、染色、閱片。在30天喂養(yǎng)試驗(yàn)中觀察動(dòng)物一般狀況、進(jìn)食、飲水及活動(dòng)等；每周稱1次體重和2次食物攝入量，觀察體重變化，計(jì)算總食物利用率；于試驗(yàn)結(jié)束時(shí)空腹過(guò)夜斷頭采血，測(cè)量血液學(xué)及生化學(xué)指標(biāo)；稱取體重及其肝、腎、脾、性腺的重量，計(jì)算臟體比；病理組織學(xué)檢查。

1.3.2 采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用方差分析。計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 急性毒性試驗(yàn)

小鼠經(jīng)空腹灌胃后，觀察7d，雌、雄小鼠均未見中毒癥狀，無(wú)死亡，雌雄無(wú)差異。受試物對(duì)雌、雄小鼠經(jīng)口最大耐受量MTD＞20.0g/kgBW，屬無(wú)毒級(jí)。

2.2 Ames試驗(yàn)

各劑量組在加S9或不加S9條件下，均未引起回復(fù)突變菌落數(shù)明顯增加。受試物Ames試驗(yàn)結(jié)果為陰性。

2.3 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)

陽(yáng)性對(duì)照組與溶劑對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，受試物各劑量組微核率與溶劑對(duì)照組比較無(wú)明顯差異(P＞0.05)，小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)陰性。

2.4 小鼠精子畸形試驗(yàn)

陽(yáng)性對(duì)照組精子畸形率與溶劑對(duì)照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，受試物各劑量組精子畸形率與溶劑對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，小鼠精子畸形試驗(yàn)陰性。

2.5 30d喂養(yǎng)試驗(yàn)

用體重60g左右SPF級(jí)斷乳大鼠80只，雌雄各半。隨機(jī)分為4組，即對(duì)照組和3個(gè)受試物組，各劑量組動(dòng)物分別喂飼按比例添加受試物配制的全價(jià)營(yíng)養(yǎng)飼料(進(jìn)食量按體重的10%計(jì)算)其在高、中、低劑量組飼料中的比例分別為5.00%、2.5%、1.25%，連續(xù)喂飼30d。劑量分別為5、2.5、1.25g/kgBW，相當(dāng)于人體推薦量的100、50、25倍。對(duì)照組給予全價(jià)營(yíng)養(yǎng)飼料。單籠喂養(yǎng)，自由飲食，記錄大鼠進(jìn)食量、體重，連續(xù)觀察30d。

表1 受試物對(duì)大鼠體重(g)影響(x±s，n＝10)

2.5.1 動(dòng)物一般狀況。試驗(yàn)期間動(dòng)物的活動(dòng)、攝食、飲水、排便等一般狀況未見明顯異常。

2.5.2 受試物對(duì)大鼠體重的影響。如表1。

表2 受試物對(duì)大鼠食物利用率的影響(x±s，n＝10)

由表1可見，雌、雄各劑量組動(dòng)物體重與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，說(shuō)明受試物在本試驗(yàn)條件下對(duì)動(dòng)物的體重?zé)o明顯影響。

2.5.3 受試物對(duì)大鼠總食物利用率的影響。如表2。

由2可見，雌、雄各劑量組動(dòng)物的進(jìn)食量和總食物利用率與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明受試物在本試驗(yàn)條件下對(duì)動(dòng)物的進(jìn)食量和總食物利用率無(wú)明顯影響。

2.5.4 血液學(xué)檢查結(jié)果。 如表3。

由表3可見，雌、雄各劑量組動(dòng)物的血常規(guī)指標(biāo)與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明受試物在本試驗(yàn)條件下對(duì)動(dòng)物的血常規(guī)指標(biāo)無(wú)明顯影響。

表3 受試物對(duì)大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響(x±s，n＝10)

2.5.5 血清生化檢驗(yàn)結(jié)果。如表4所示。

表4 受試物對(duì)大鼠血清生化指標(biāo)的影響 (x±s，n＝10)

由表4可見，各劑量組動(dòng)物的血清生化指標(biāo)(谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、肌酐、膽固醇、甘油三酯、總蛋白、白蛋白、尿素氮、血糖)與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明受試物在本試驗(yàn)條件(下轉(zhuǎn)第464頁(yè))周血出現(xiàn)少量的HbF紅細(xì)胞，在陰道出血時(shí)即使沒(méi)有胎兒血經(jīng)洗脫和染色后乃有少量陽(yáng)性紅細(xì)胞，造成難以診斷，筆者采取在取陰道血的同時(shí)采集母體外周血一份一同做HbF檢測(cè)，如果陰道血的HbF紅細(xì)胞含量大于外周血的HbF紅細(xì)胞，即可診斷有胎兒血；陰道血的HbF紅細(xì)胞含量與母體外周血持平，結(jié)合臨床指針、胎心監(jiān)護(hù)、B超等檢查可排除胎兒宮內(nèi)失血。

妊娠期陰道出血是否含有胎兒血，胎兒血紅蛋白是診斷的決定性因素[4]，對(duì)于臨床處理病情起到十分關(guān)鍵的作用。筆者通過(guò)2年多的時(shí)間對(duì)113例陰道出血的孕婦進(jìn)行HbF紅細(xì)胞的檢測(cè)，其結(jié)果與臨床診斷和病人病情一致。妊娠期陰道出血時(shí)檢測(cè)出含胎兒血 (陰道血HbF紅細(xì)胞含量高于外周血)，說(shuō)明胎兒在宮內(nèi)有出血現(xiàn)象，結(jié)合B超診斷，如果提示胎兒還活著，孕周大于35周，立即行剖宮產(chǎn)以結(jié)束妊娠，挽救孕婦和胎兒的生命為第一。經(jīng)檢測(cè)陰道血為母體血，不含胎兒血，妊娠在35周前，胎兒未達(dá)到成熟，陰道出血量不多，情況穩(wěn)定的孕婦可采取期待療法進(jìn)行治療。

HbF的洗脫和染色方法以及抗堿試驗(yàn)，可快速確定母體血中是否含過(guò)多胎兒紅細(xì)胞，有助于對(duì)分娩前胎兒晚期出血做出迅速判斷[5]，為鑒別妊娠期陰道出血時(shí)是否含有胎兒血提供診斷依據(jù)。該方法操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)快速、結(jié)果準(zhǔn)確、方便開展，對(duì)臨床幫助很大，為臨床醫(yī)生采取準(zhǔn)確、果斷治療措施提供依據(jù)，降低胎兒和孕產(chǎn)婦死亡率意義非常大。

[1]葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].第3版,南京:東南大學(xué)出版社,2006:184-185.

[2]戴旻笙,傅慶詔,陳菊芳,等.血紅蛋白F及紅細(xì)胞直徑測(cè)定及意義[J].中華婦產(chǎn)科雜志,2000,35(4):234-235.

[3]沈柏均主編.人類臍血:基礎(chǔ)與臨床[M].天津:天津科學(xué)出版社,1995:16.

[4]段如麟,陳解民,徐增祥.婦產(chǎn)科急癥學(xué)[M].第1版,北京:人民軍醫(yī)出版社,1998:45.

[5]程 偉.人胎兒血紅蛋白的檢測(cè)及其臨床意義[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2009,13(10):1474-1475.