強(qiáng)心飲對(duì)阿霉素誘導(dǎo)大鼠慢性心肌損傷的保護(hù)作用*

嚴(yán) 驊，高俊杰，蔣梅先，嚴(yán)世蕓

(1.上海中醫(yī)藥大學(xué) 附屬曙光醫(yī)院，上海 201203;2.上海中醫(yī)藥大學(xué)，上海 201203)

強(qiáng)心飲對(duì)阿霉素誘導(dǎo)大鼠慢性心肌損傷的保護(hù)作用*

嚴(yán) 驊1，高俊杰1，蔣梅先1，嚴(yán)世蕓2

(1.上海中醫(yī)藥大學(xué) 附屬曙光醫(yī)院，上海 201203;2.上海中醫(yī)藥大學(xué)，上海 201203)

目的:探討強(qiáng)心飲對(duì)阿霉素所致心肌病心力衰竭大鼠的心肌保護(hù)作用。方法:雄性Wistar大鼠隨即分為6組，除空白組外，均采用尾靜脈每周注射阿霉素2mg/kg，共6周制備心肌病心力衰竭大鼠模型，治療組同時(shí)分別給予強(qiáng)心飲高、中、低劑量，西藥對(duì)照組給予培哚普利。治療結(jié)束后進(jìn)行血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)，檢測(cè)心衰血漿大鼠腦鈉素(BNP)、心肌谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量，并進(jìn)行心肌病理檢查。結(jié)果:經(jīng)阿霉素慢性心肌毒性損傷后，MDA含量增高，GSH-PX、SOD活性降低;而強(qiáng)心飲治療組的LVEF和FS均較模型組高，且心肌MDA含量降低，GSH-PX、SOD活性升高。結(jié)論:強(qiáng)心飲具有抗氧化作用，針對(duì)阿霉素所引起的心肌損傷具有保護(hù)作用。

強(qiáng)心飲;阿霉素;心肌病心衰;心肌損傷;抗氧化

本研究運(yùn)用阿霉素制備心肌病心力衰竭大鼠的慢性心肌損傷模型，觀察強(qiáng)心飲對(duì)心肌損傷的保護(hù)作用，從而探討該藥可能的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供可靠的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物、試劑與儀器

強(qiáng)心飲主要由制附子、豬茯苓、白芍、補(bǔ)骨脂、鹿角片等藥物組成，按處方比例稱(chēng)取中藥材，加水煎煮、濃縮并取上清;培哚普利(施維雅，批號(hào)9D0437);滅菌注射用生理鹽水均為市售品;鹽酸阿霉素(浙江海正藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)091001)粉針。血漿心鈉素(BNP);心肌谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量測(cè)定試劑盒由西唐生物技術(shù)研究所提供。DENLEY DRAGON Wellscan MK 3酶標(biāo)儀，芬蘭;GE心動(dòng)超聲儀Vivid i S/N及探頭10S-RS，美國(guó);KLIMBLE微量電動(dòng)組織勻漿器，美國(guó);奧林巴斯顯微鏡IX71，日本。

1.2 分組及給藥

選擇體重180g～200g的 Wistar雄性大鼠 (上海中科院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)80只，除空白對(duì)照為10只大鼠外，余組數(shù)量相同。將鹽酸阿霉素粉針用滅菌注射用生理鹽水配成濃度為1mg/ml的阿霉素溶液(避光)。除空白對(duì)照組外，其余各組大鼠分別于每周尾靜脈注射阿霉素溶液2mg/kg，共六周?？瞻讓?duì)照組同時(shí)腹腔注射等容積的生理鹽水。在注射阿霉素同時(shí)，每日1次給予治療用藥，即強(qiáng)心飲低、中、高劑量組分別灌胃給予 4.325、8.65、17.3g/kg(生藥量);培哚普利制成0.8mg/ml溶液，每日1次灌胃給予4mg/kg;空白對(duì)照組和模型組給予同體積蒸餾水灌胃。

1.3 取材與指標(biāo)檢測(cè)

治療結(jié)束后，用 25%烏拉坦 5mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，應(yīng)用心動(dòng)超聲儀分別測(cè)量大鼠射血分?jǐn)?shù)(EF)及左室收縮率(FS)。然后心臟采血，利用ELISA測(cè)定血漿心鈉素(BNP);組織 GSH-PX、SOD活力及MDA含量，最后處死大鼠，將心室肌組織置于10%甲醛溶液中，固定24h后常規(guī)石蠟包埋，HE及天狼猩紅(VG)染色，進(jìn)行病理圖像分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

2.1 強(qiáng)心飲對(duì)模型大鼠心功能的影響

表1顯示，模型組與空白對(duì)照組比較，各項(xiàng)指標(biāo)均存在較為顯著的差異，左心射血分?jǐn)?shù)(LVEF)和左室縮短分?jǐn)?shù)(FS)顯著降低(P<0.01)，強(qiáng)心飲中、高劑量組能顯著提高CHF大鼠的LVEF和 FS水平，且與濃度呈正相關(guān)關(guān)系，提示本方能夠改善CHF大鼠左室收縮和舒張功能。模型組血漿BNP水平明顯升高，與空白對(duì)照組相比差異顯著(P<0.01);各治療組血漿BNP水平較模型組均有不同程度的降低，其中培哚普利和強(qiáng)心飲高劑量組作用最強(qiáng)(P<0.05)，中劑量和低劑量組作用次之。

表1 強(qiáng)心飲對(duì)心肌病心衰大鼠心功能的影響(±s)

表1 強(qiáng)心飲對(duì)心肌病心衰大鼠心功能的影響(±s)

注:與模型組比較:*P<0.05， P<0.01

組別 n EF(%) FS(%) BNP(pg/ml)空 白 對(duì) 照 組 10 83.586±3.34 47.452±3.94 77.875±24.09 模 型 組 9 44.602±9.35 19.326±4.84 407.791±154.85培 哚 普 利 組 10 59.559±6.42 28.083±3.50 191.011±37.23*強(qiáng)心飲低劑量組 9 51.223±6.01* 22.639±3.41 225.154±94.43強(qiáng)心 飲 中 劑 量 組 11 56.412±4.28 25.544±2.59 227.548±91.95強(qiáng)心 飲 高 劑 量 組 10 62.488±6.21 29.468±3.92 189.391±74.76*

2.2 強(qiáng)心飲對(duì)模型大鼠心肌病理形態(tài)學(xué)影響

HE染色顯示，空白對(duì)照組心肌細(xì)胞排列均勻整齊緊致，橫紋清楚，細(xì)胞大小均一，心肌細(xì)胞間隙無(wú)變化(圖1A);模型組大鼠有不同程度的炎性病變，心肌細(xì)胞變性、壞死，排列紊亂，輪廓不清，相鄰細(xì)胞體積增大，排列紊亂、核大深染(圖1B);各治療組心肌病變均較模型組有改善(圖1C-D)。

圖1 強(qiáng)心飲對(duì)心肌病理形態(tài)學(xué)改變的影響(HE染色×200)

天狼猩紅染色(VG染色)顯示，空白對(duì)照組的膠原纖維較少(圖2A);模型組在病變部位出現(xiàn)紅色膠原染色(圖2B)，較空白對(duì)照組的膠原纖維明顯增加，表示在病灶局部膠原結(jié)締組織增生，間質(zhì)纖維化，各治療組心肌病變程度均輕于模型組，強(qiáng)心飲高劑量改善較其他為明顯(圖2C-D)。

圖2 強(qiáng)心飲對(duì)心肌病理形態(tài)學(xué)改變的影響(VG染色×200)

2.3 強(qiáng)心飲對(duì)模型大鼠GSH-PX、SOD活力及MDA含量的影響

表2顯示，模型組SOD、GSH-PX與空白對(duì)照組相比活力降低(分別為 P<0.01、P<0.05)，MDA含量水平升高(P<0.01)，差異顯著;強(qiáng)心飲高劑量組SOD活力水平較模型組有明顯提高，而GSH-PX活力水平則是強(qiáng)心飲中、高劑量組提高較為明顯(P<0.05);各治療組MDA含量與模型組相比均顯著降低，其中培哚普利作用最強(qiáng)，強(qiáng)心飲高劑量組作用次之(P<0.01)。

表2 強(qiáng)心飲對(duì)心肌病心衰大鼠SOD、GSH-PX活力及MDA含量的影響

3 討論

心肌病心衰是心臟病的嚴(yán)重階段，多數(shù)患者常因心力衰竭進(jìn)行性加重而死亡或因心律心常而發(fā)生猝死，因其發(fā)病率及病死率高而成為21世紀(jì)亟待解決的難題。心肌病心衰是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)病名，中醫(yī)學(xué)無(wú)此病名，但有類(lèi)似癥狀的描述。如《景岳全書(shū)·喘促》也有記載:“虛喘者，氣短而不息……慌張氣怯，聲低息短，皇皇然若氣欲斷，提之若不能升，吞之若不相及，勞動(dòng)則甚，而惟急促似喘，但得引長(zhǎng)一息為快?！备鶕?jù)患者的臨床表現(xiàn)，此病可屬中醫(yī)“心悸”、“怔忡”、“胸痹”、“喘證”、“痰飲”、“水腫”之范疇。心主血脈，心藏血脈之氣，血脈之運(yùn)行依賴(lài)于心陽(yáng)、心氣。心肌病心衰多病重日久，致心氣陽(yáng)虛，心主血脈功能失施，血脈瘀阻。而久病及腎，亦可致命門(mén)火衰，不能溫煦心陽(yáng)，則君火更衰?？梢?jiàn)，本病重在陽(yáng)氣虧虛，并由此繼發(fā)水飲瘀血標(biāo)實(shí)之候，且水飲瘀血一經(jīng)產(chǎn)生，再傷陽(yáng)氣，致陽(yáng)氣更虛，故本病為本虛標(biāo)實(shí)之候，且虛實(shí)錯(cuò)雜，多臟受累，纏綿難愈。強(qiáng)心飲以溫補(bǔ)心腎、利水化痰消瘀為治療原則，標(biāo)本兼顧，收到了良好的臨床療效。

為觀察強(qiáng)心飲對(duì)心肌病心衰模型的心肌損傷保護(hù)作用機(jī)理，我們選擇采用大鼠尾靜脈注射阿霉素復(fù)制心肌病心力衰竭模型，造模時(shí)間為6周，使心肌和心功能慢性損害更接近臨床。阿霉素引起心臟毒性的原因尚未完全清楚，目前較多認(rèn)為與氧自由基有關(guān)，氧自由基所導(dǎo)致的氧化損傷是阿霉素引起心肌損傷的主要原因。脂質(zhì)過(guò)氧化是許多毒物發(fā)生毒作用的關(guān)鍵，也是細(xì)胞損傷的形式之一。超氧化物歧化酶(SOD)是需氧生物體內(nèi)一種含不同金屬元素的酶蛋白，是惟一可以消耗超氧化物自由基的酶，因此測(cè)定其活力可間接反映自由基產(chǎn)生的情況。心肌谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)是一種含硒蛋白，能使有害的過(guò)氧化物還原成無(wú)害的羥基化物和水，同時(shí)促進(jìn)H2O2的分解，保護(hù)細(xì)胞膜等組織的結(jié)構(gòu)和功能不受過(guò)氧化物的干擾和損傷。它不僅能清除體內(nèi)的脂質(zhì)過(guò)氧化物，還能阻斷脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程。機(jī)體的脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)生許多對(duì)機(jī)體具有毒性的代謝產(chǎn)物，其中毒性最大的是丙二醛(MDA)，MDA是氧自由基與生物膜多聚不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，其產(chǎn)生的量與氧自由基的量及脂質(zhì)過(guò)氧化的程度呈正相關(guān)，故檢測(cè)MDA可反映氧自由基的水平及脂質(zhì)過(guò)氧化的程度。機(jī)體的氧系統(tǒng)過(guò)度激活還能刺激心肌纖維合成增多，導(dǎo)致心肌纖維化。

本實(shí)驗(yàn)中，模型組大鼠心肌組織中脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA含量顯著升高，提示心肌遭受到自由基的侵害;同時(shí)抗氧化物質(zhì)酶性清除劑SOD與GSHPX活力明顯降低，意味著心肌清除自由基以及心肌抗氧化能力降低。以上結(jié)果均證實(shí)，模型組大鼠心肌損傷中存在氧化應(yīng)激反應(yīng)，心肌組織中氧自由基的產(chǎn)生與清除失衡，導(dǎo)致心肌細(xì)胞損傷。而治療組中的強(qiáng)心飲高劑量組SOD活力水平較模型組有明顯提高;強(qiáng)心飲中、高劑量組的GSH-PX活力水平都有明顯提高;強(qiáng)心飲各劑量組的MDA含量與模型組相比顯著下降，說(shuō)明強(qiáng)心飲在藥效上有保護(hù)心肌組織SOD及GSH-PX活性，減少M(fèi)DA生成，防止心肌細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化及改善脂肪酸代謝和心肌代謝，保護(hù)心肌細(xì)胞，從而達(dá)到改善心肌病心衰大鼠的心臟功能。在病理形態(tài)學(xué)分析中也觀察到，強(qiáng)心飲治療組的炎性病變、局部膠原結(jié)締組織增生及間質(zhì)纖維化均較模型組有所改善。此次實(shí)驗(yàn)研究為臨床應(yīng)用提供了一定的理論基礎(chǔ)。氧化應(yīng)激可能是心肌病的發(fā)生和發(fā)展的重要因素之一，盡早進(jìn)行針對(duì)性治療，中斷氧化應(yīng)激的惡性循環(huán)，就可以更好地保護(hù)心臟的結(jié)構(gòu)和功能。

Protective Effect of Qiang Xin Yin on Chronic Myocardium Injury Induced by Adriacin in Rats

YAN Hua1，GAO Jun-jie1，JIANG Mei-xian1，YAN Shi-yun2
(1.Shuguang Hospital affiliated to Shanghai University of TCM，Shanghai201203，China;2.Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai201203，China)

Objective:To investigate the protective effect of Qiangxin Beverage on the cardiomyopathy chronic heart disease induced by adriamycin(ADM)cardiotoxicity in rats.Methods:Male Wistar rats were randomly divided into six groups.Besides the control group，each group were injected with adriamycin(ADM，2 mg·kg－1tail intravenous injection)weekly for 6 weeks.Meanwhile，4 ADM-injected groups were

the treatment of Qiangxin Beverage(high、middle、low dose)and perindopril，respectively.After the treatment，survivors were observed hemodynamics changes.B-type Natriretic peptide(BNP)the activities of GSH-PX and SOD、MDA were measured and and the hearts were removed for histological examination by light microscopy.Results:LVEF and FS were increased.Compared with the injury group，the activities of GSH-PX and SOD were higher，and the MDA lever was lower in therapy group.Conclusion:The Qiangxin Beverage has protective effect and antioxidative effect on the cardiomyopathy chronic heart disease induced by adriamycin(ADM)cardiotoxicity in rats.

Qiangxin Beverage;Adriamycin;cardiomyopathy;CHF;myocardial injury;Antioxidative effect

R285.5

B

1006-3250(2010)07-0557-03

上海市教育委員會(huì)科研創(chuàng)新項(xiàng)目(09YZ136)

2009-11-08

嚴(yán)驊，女，醫(yī)學(xué)博士，助理研究員，從事中藥對(duì)心血管疾病的作用以及病毒抑制方面的研究。E-mail:yanh1218@hotmail.com。