乙肝病毒攜帶者病毒基因分型與C基因啟動(dòng)子及前C區(qū)變異的相關(guān)性分析

張 勇,石 銘,綦盛麟

(大連市第六人民醫(yī)院,遼寧大連 116031)

乙肝病毒攜帶者病毒基因分型與C基因啟動(dòng)子及前C區(qū)變異的相關(guān)性分析

張 勇,石 銘,綦盛麟

(大連市第六人民醫(yī)院,遼寧大連 116031)

為探討乙型肝炎病毒基因分型與C基因啟動(dòng)子(CP)及前C區(qū)變異(PC)的相關(guān)性,我們對(duì)89例乙型肝炎病毒攜帶者進(jìn)行病毒基因分型,觀察其間的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 我院門診及住院乙肝病毒攜帶者89例,用ABI7500基因熒光定量對(duì)其進(jìn)行病毒含量、基因分型、C基因啟動(dòng)子(CP)及前C區(qū)變異(PC)檢測(cè),取其外周血用《KL型免疫圖像分析儀》測(cè)其T淋巴細(xì)胞Ag-NORs活性,肝組織穿刺標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)病理切片。

1.2 研究方法

1.2.1 乙肝病毒基因分型及C基因啟動(dòng)子及前C區(qū)變異檢測(cè) 100 μ l待檢血清樣本模板提取嚴(yán)格按照提取試劑盒操作說(shuō)明書操作;HBV DNA提取模板加入PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系,反應(yīng)條件:反應(yīng)管先在50℃保溫5 min,然后94℃保溫5 min,再按 93℃30 s→60℃90 s循環(huán)40次;置ABI 7500全自動(dòng)定量PCR儀上進(jìn)行病毒基因分型及C基因啟動(dòng)子及前C區(qū)變異檢測(cè)分析。

表1 引物設(shè)計(jì):C基因啟動(dòng)子前C區(qū)

1.2.2 肝組織病理檢測(cè) 穿刺標(biāo)本至少在鏡下包括3個(gè)以上匯管區(qū),標(biāo)本連續(xù)切片,蘇木精伊紅(HE)染色,鏡下觀察肝內(nèi)炎癥、組織結(jié)構(gòu)改變及纖維化程度。

表2 炎癥活動(dòng)度(G)與纖維化程度(S)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[1]

1.2.3 T淋巴細(xì)胞核仁形成區(qū)嗜銀蛋白(Ag-NORs)活性檢測(cè) 采用《KL型免疫圖像分析儀》測(cè)其T淋巴細(xì)胞Ag-NORs活性,結(jié)果以IS%表示。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理 結(jié)果經(jīng)SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。

2 結(jié)果

2.1 不同病毒基因分型患者外周血中生物化學(xué)指標(biāo)變化 見(jiàn)表3,B型與C型乙肝患者病毒含量、e抗原陰性率、PC%變異率有明顯差異:B型乙肝患者病毒平均含量明顯低于C型患者(P＜0.001);而e抗原陰性及PC%變異率明顯高于C型乙肝患者(P＜0.01)。兩者間CP%變異率無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。

表3 病毒基因分型患者外周血中生物化學(xué)指標(biāo)變化

2.2 C型基因患者CP與PC變化對(duì)肝組織及T淋巴細(xì)胞AgNORs活性影響 C型基因患者中,兩者的肝組織損傷程度有明顯的差異,CP變異組肝組織炎癥及纖維化程度明顯高于PC變異組(G1-G2/G0;S1-S2/S0-S1),PC變異組T淋巴細(xì)胞AgNORs活性明顯高于CP變異組。見(jiàn)表4

表4 CP與PC變化對(duì)肝組織及T淋巴細(xì)胞 AgNORs活性影響

3 討論

乙型肝炎病毒按照基因序列的不同可以分為A-H八個(gè)基因型,在我國(guó)主要是B、C型,不同的基因型有不同的臨床表現(xiàn)、病毒含量的改變及免疫功能的變化[2]。

HBV本身有極高的復(fù)制率,在病毒復(fù)制過(guò)程中由于其逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏校對(duì)活性,而導(dǎo)致乙型肝炎病毒發(fā)生基因突變,基因突變廣泛存在于基因組的不同部位,基因組不同區(qū)段的變異性有顯著不同,HBV基因組S、C、P、X 區(qū) 、前 C 區(qū) 、前 S2、前S1 區(qū)變異性依次增高[3,4]。其中C基因啟動(dòng)子(CP)及前C區(qū)(PC)變異是導(dǎo)致e抗原分泌減少。因此,臨床上對(duì)CP與PC變異率的檢測(cè)至關(guān)重要。

《2006西安病毒性肝炎會(huì)議乙肝病毒防治指南》中對(duì)乙肝病毒攜帶者治療的意見(jiàn)是對(duì)這部分患者進(jìn)行肝組織病理穿刺檢查,觀察肝組織損傷程度,來(lái)進(jìn)一步確診和相應(yīng)治療,而現(xiàn)實(shí)中這些患者由于對(duì)肝穿的恐懼及不理解,很難接受肝穿檢測(cè)。國(guó)內(nèi)對(duì)乙肝病毒攜帶者的研究大多局限于病毒基因分型與病毒含量及療效關(guān)系,對(duì)乙肝病毒攜帶者進(jìn)行病毒基因分型同時(shí)觀察PC與CP變異率,T淋巴細(xì)胞AgNORs含量與肝組織病變程度相關(guān)性,國(guó)內(nèi)未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。

我們?cè)趯?duì)患者進(jìn)行肝組織穿刺的同時(shí),利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)乙型肝炎病毒進(jìn)行基因分型及CP與PC變異檢測(cè)發(fā)現(xiàn):乙型肝炎病毒攜帶者中,乙型肝炎病毒基因型B比C型更容易通過(guò)前C區(qū)變異誘導(dǎo)e抗原轉(zhuǎn)化,C型乙型肝炎病毒攜帶者病毒含量及e抗原陽(yáng)性率高于B型乙肝病毒攜帶者。B型乙肝病毒攜帶者容易發(fā)生PC變異,而C型乙肝病毒攜帶者容易發(fā)生CP變異,C型乙肝病毒攜帶者中,PC與CP組比較,T淋巴細(xì)胞AgNORs含量明顯升高,肝組織炎癥及纖維化程度有明顯改善。C型乙肝病毒攜帶者中,PC與CP變化可間接反映肝組織的損傷程度,且PC比CP組T淋巴細(xì)胞Ag-NORs活性明顯升高。

[1]中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)會(huì)、肝病學(xué)分會(huì).病毒性肝炎防治方案[S].中華肝臟雜志,2000,8(6):324.

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