白芷香豆素類有效部位的研究進(jìn)展

常金花，高大昕，劉翠哲

（河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北承德 067000）

白芷為傘形科植物白芷angelica dahurica（fisch.ex hoffm.）benth.et hook.f.或杭白芷angelica dahurica（fisch.ex hoffm.）benth.et hook.F.var.formosana（boiss.）shan et yuan的干燥根，其主要化學(xué)成分為香豆素類和揮發(fā)油類。由于揮發(fā)油類成分含量低，故近些年對(duì)白芷總香豆素及其成分的研究逐漸增多。本文針對(duì)其在藥效學(xué)和藥動(dòng)學(xué)研究、提取工藝、質(zhì)量控制及制劑開發(fā)方面歸納總結(jié)，為白芷有效部位的繼續(xù)研究提供參考。

1 藥效學(xué)和藥動(dòng)學(xué)研究

1.1 鎮(zhèn)痛作用機(jī)制 白芷香豆素對(duì)物理、化學(xué)等傷害性刺激具有明顯鎮(zhèn)痛作用，作用部位可能既在中樞也在外周，其鎮(zhèn)痛作用與阿片受體和腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)有一定的關(guān)系，使甲醛所致傷害性疼痛模型小鼠血清NO含量和腦中β-EP含量明顯下降，鎮(zhèn)痛機(jī)制可能與抑制NO的合成或釋放有關(guān)[1-2]。

1.2 對(duì)延胡索乙素鎮(zhèn)痛作用的影響 將延胡索乙素與白芷總香豆素配伍，采用小鼠醋酸扭體法、熱板鎮(zhèn)痛法、甩尾法三種模型，觀察白芷總香豆素對(duì)延胡索乙素鎮(zhèn)痛作用的影響，結(jié)果顯示延胡索乙素與白芷總香豆素配伍后具有顯著的鎮(zhèn)痛作用[3]，而且經(jīng)小腸吸收的延胡索乙素的含量均較單純延胡索總堿提取液為高，并隨方中白芷總香豆素加入量的增加，延胡索乙素的小腸吸收呈現(xiàn)明顯增加的趨勢(shì)[4]。

1.3 透皮吸收特性 白芷香豆素類有效部位在大鼠皮膚中滲透系數(shù)與人體皮膚接近，冰片和月桂氮酮能夠促進(jìn)該類成分的滲透[5]。在考察丙二醇、油酸、氮酮及其聯(lián)用促滲劑對(duì)川白芷香豆素有效部位中歐前胡素透皮吸收動(dòng)力學(xué)特性的影響中發(fā)現(xiàn)：5%丙二醇有一定促滲作用，10%丙二醇對(duì)藥物的擴(kuò)散和透皮有一定阻滯作用，氮酮的促滲作用往往不隨使用濃度的提高而增加，存在最佳用量，濃度過大，可能得到相反的效果，使用氮酮、油酸、丙二醇（2：1：1）聯(lián)合促滲劑，歐前胡素透皮速率增加最明顯[6]。

1.4 對(duì)家兔氨茶堿藥動(dòng)學(xué)的影響 白芷香豆素成分能抑制氨茶堿在兔體內(nèi)的代謝，使其消除速度常數(shù)降低，半衰期延長(zhǎng)，AUC值增大，清除率下降[7]。

1.5 藥動(dòng)學(xué)研究和大鼠小腸內(nèi)的吸收特性 大鼠灌胃給予白芷香豆素提取物后， 應(yīng)用高效液相法測(cè)定歐前胡素的血藥濃度，擬合數(shù)據(jù)，結(jié)果歐前胡素在大鼠體內(nèi)呈二室模型分布，主要藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)為：tmax=0.75h，Cmax=（2.165±0.289）mg·L-1，t1/2=（5.449±2.040）h，AUC0-t=（7.204±3.966）mg·h·L-1，AUC0-∞=（7.512±4.190）mg·h·L-1[8]。歐前胡素和異歐前胡素在大鼠體內(nèi)的最佳吸收部位都是結(jié)腸，腸道內(nèi)吸收良好；在酸性條件下，吸收受到pH值影響，吸收機(jī)制可能包括被動(dòng)擴(kuò)散與主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)[9]。

2 提取工藝

2.1 乙醇回流提取 先將白芷粉碎過20目篩，加8倍量75%或95%乙醇，提取3次，每次3或4個(gè)小時(shí)，所得的提取物中香豆素類成分的含量較高[10-12]。

2.2 滲濾法 袁瑜等[13]應(yīng)用滲漉法提取白芷總香豆素，采用單因素和正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以白芷總香豆素的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，結(jié)果表明滲漉法提取總香豆素含量高，其最佳工藝條件為：8倍量75%乙醇，浸泡8h，滲漉速度0.5ml/min，白芷藥材顆粒粒度對(duì)總香豆素的含量影響不大。陳賢春等[14]確定的最佳工藝為白芷藥材浸泡24h，加8倍量的80%乙醇。鄭翠英等[15]在實(shí)驗(yàn)中選擇的條件是6倍量的60%乙醇浸泡6h后進(jìn)行滲濾。

2.3 微波法 劉紅梅等[16]采用微波輔助萃取白芷香豆素類成分，結(jié)果表明微波功率、微波輻射時(shí)間、溶劑用量、溶劑濃度、浸泡時(shí)間、藥材粉碎度等參數(shù)對(duì)自芷有效成分的提取具有交互作用，優(yōu)選出的最佳萃取工藝為：微波功率450W，輻射時(shí)間10min，浸泡時(shí)間30min，固液比為1：4，乙醇濃度為95%，粉碎度為40目。

2.4 CO2超臨界流體法 超臨界萃取技術(shù)是近年來發(fā)展起來的一種新的提取、純化方法，具有萃取溫度低、高效快速、有機(jī)溶劑殘留少等優(yōu)點(diǎn)，尤其適用于中草藥的提取精制，特別是香豆素類成分。影響香豆素含量的主要因素是萃取壓力、溫度、時(shí)間和藥材的粉碎度等工藝參數(shù)[17]。黃欣等[18]采用的萃取條件是：以無水乙醇作為改性劑，萃取壓35MPa，萃取溫度45℃，藥材粒度60目，萃取時(shí)間3h，此時(shí)得到的總香豆素收率最高。

2.5 大孔樹脂 何芳輝等[19]應(yīng)用大孔樹脂純化白芷總香豆素，以總香豆素的比吸附量（mg/ml）、解吸率（%）、純度（%）為評(píng)價(jià)指標(biāo)篩選樹脂類型，用紫外分光光度法測(cè)定白芷總香豆素含量，結(jié)果表明大孔樹脂可用于白芷總香豆素的純化，而且在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)考慮用混合樹脂對(duì)其進(jìn)行純化。

3 白芷香豆素類有效部位的質(zhì)量研究

采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)提取分離得到的川白芷香豆素有效部位進(jìn)行成分研究，共鑒定出11種香豆素類成分，主要成分為氧化前胡素、歐前胡素、異歐前胡素，其相對(duì)含量分別達(dá)到10.23%、6.58%和5.16%[20]。

3.1 香豆素類成分的鑒別 常用薄層色譜法鑒別白芷提取物中的歐前胡素和異歐前胡素[21]。此外，蔡敏等[22]應(yīng)用HPLC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)，快速鑒別出禹白芷中白當(dāng)歸素、氧化前胡素、白當(dāng)歸腦、歐前胡素、蛇床夫內(nèi)酯和異歐前胡素6個(gè)主要的呋喃香豆素成分。

3.2 香豆素類成分的含量測(cè)定 通常應(yīng)用高效液相色譜（HPLC）法，測(cè)定白芷提取物中單一成分，或同時(shí)測(cè)定歐前胡素和異歐前胡素兩種成分，或歐前胡素、氧化前胡素和異歐前胡素三種成分的含量，來控制白芷香豆素提取物的質(zhì)量[23-25]。

3.3 總香豆素的含量測(cè)定 馬逾英等[26]應(yīng)用紫外分光光度法測(cè)定川白芷中總香豆素類成分的含量，其結(jié)果表明該法準(zhǔn)確、快速、重復(fù)性好，可用于川白芷藥材中總香豆素的測(cè)定。

3.4 指紋圖譜 李玲等[27]以川白芷香豆素有效部位為研究對(duì)象，建立了10批樣品的RP-HPLC指紋圖譜，此指紋圖譜較全面地反映了川白芷香豆素類有效部位化學(xué)成分的特征，可用于川白芷香豆素有效部位的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

王婷婷等[28]建立白芷質(zhì)量的高效液相色譜指紋圖譜評(píng)價(jià)方法，簡(jiǎn)便、可靠，可用于白芷的真?zhèn)舞b別和質(zhì)量評(píng)價(jià)。

3.5 干燥方法對(duì)白芷香豆素類成分含量的影響 通過比較室內(nèi)陰干、戶外風(fēng)干、不同溫度烘干和硫磺熏干方法對(duì)白芷香豆素類成分含量的影響，發(fā)現(xiàn)白芷室內(nèi)陰干和戶外風(fēng)干需時(shí)較長(zhǎng)，硫磺熏干白芷需時(shí)較短，外觀潔白，性狀較好，但歐前胡素和異歐前胡素含量都較前兩者顯著降低；35℃烘干白芷時(shí)間短，根中歐前胡素和異歐前胡素含量也高；而70℃和105℃烘干，歐前胡素含量顯著降低[29]。王夢(mèng)月等[30]在實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)以曬干法最好，香豆素的含量高，而經(jīng)硫磺煙熏后香豆素的含量大幅度降低。張玉方等[31]通過試驗(yàn)還證實(shí)了白芷被熏透前的9小時(shí)，隨著硫熏時(shí)間的延長(zhǎng)，香豆素類含量急劇下降，熏透后則下降不明顯。因此，不能通過減少硫熏的時(shí)間來降低香豆素成分的損失。

4 制劑開發(fā)

白芷香豆素固體分散體：選擇聚乙二醇6000（PEG）、聚乙烯吡咯烷酮K30（PVP）、泊洛沙姆188等為載體，應(yīng)用熔融法和溶劑法，均可制成白芷香豆素固體分散體，而且以聚乙烯吡咯烷酮K30制備的白芷香豆素固體分散體的體外溶解度和溶出速率提高最為明顯[32]。高溫及強(qiáng)光均能降低白芷香豆素固體分散體中歐前胡素的含量，濕度雖未影響其含量，但PVP的引濕性可引起白芷香豆素固體分散體自身質(zhì)量的增加[33]。

5 結(jié)語

綜上所述，白芷香豆素類有效部位具有鎮(zhèn)痛作用，其作用機(jī)制可能在外周也可能在中樞，與延胡索乙素配伍后，可增強(qiáng)其鎮(zhèn)痛作用和小腸吸收量。通常采用醇提法得到白芷香豆素類有效部位，近年發(fā)現(xiàn)超臨界萃取法的提取率更高。對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究表明：高效液相法可以測(cè)定該類成分的含量。應(yīng)用白芷香豆素類成分投料制備了如固體分散體、分散片等新型制劑，但是這方面的研究還比較少，今后隨著藥理作用研究的進(jìn)一步深入，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的逐步完善還會(huì)開發(fā)出更加有效、穩(wěn)定的新制劑。

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