慢性疼痛基因治療的研究現(xiàn)狀

田玉科 楊少兵

華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院麻醉科教研室

慢性疼痛是指急性組織損傷修復(fù)后疼痛持續(xù)狀態(tài)超過(guò)1個(gè)月或疼痛反復(fù)發(fā)作超過(guò)3個(gè)月以上。長(zhǎng)期嚴(yán)重的慢性疼痛會(huì)明顯影響患者生活質(zhì)量，給患者帶來(lái)生理、心理和社會(huì)功能的改變。目前的常規(guī)治療方法中沒(méi)有一種治療能獲得非常滿意的療效， 每種方法都存在一定的缺陷以及各種不良反應(yīng)。因此尋找一種安全有效、作用持久、經(jīng)濟(jì)方便、副作用小的鎮(zhèn)痛方法已成為目前研究的焦點(diǎn)。隨著細(xì)胞分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)的發(fā)展，基因治療作為一項(xiàng)新的生物治療手段，已被廣泛應(yīng)用于多種疾病的治療與研究。

疼痛的基因療法是引入外源基因以超表達(dá)內(nèi)源性止痛物質(zhì)、抗炎物質(zhì)或抑制傷害性物質(zhì)的作用[1-4]而實(shí)現(xiàn)的。包括兩方面：一是上調(diào)抗痛基因的表達(dá)，利用基因重組技術(shù)將抗痛基因、調(diào)控因子基因以及疼痛相關(guān)受體基因[5]插入載體，構(gòu)建重組病毒載體或非病毒載體，導(dǎo)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)，以初級(jí)傳入神經(jīng)和脊髓背角神經(jīng)作為靶點(diǎn)產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用；二是下調(diào)疼痛基因表達(dá)，通過(guò)反義寡核苷酸使目標(biāo)蛋白水平下調(diào)，降低神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)源性疼痛分子的表達(dá)以達(dá)到鎮(zhèn)痛目的，或者下調(diào)疼痛作用位點(diǎn)，如蛋白激酶C、NMDA受體和神經(jīng)素1受體等。

1 鎮(zhèn)痛基因

1.1 阿片肽基因

目前發(fā)現(xiàn)的阿片肽類(lèi)有二十多種，可分4類(lèi)：腦啡肽類(lèi)、β-內(nèi)啡肽類(lèi)、強(qiáng)啡肽類(lèi)及前孤啡肽類(lèi)。目前用于鎮(zhèn)痛研究主要是前兩類(lèi)：

①腦啡肽基因（enkephalin）：包括甲硫氨酸腦啡肽和亮啡肽，是重要的鎮(zhèn)痛介質(zhì)，對(duì)δ受體的選擇性較強(qiáng)，許多抑制性遞質(zhì)通過(guò)腦啡肽介導(dǎo)的阿片受體作用發(fā)揮鎮(zhèn)痛效應(yīng)。研究人員將人前腦啡肽原基因插入單純皰疹病毒（HSV），在小鼠皮下注射腦啡肽原基因重組的病毒后，能逆轉(zhuǎn)百日咳細(xì)菌毒素所引起的熱痛敏，提示重組有人前腦啡肽原基因的病毒能削弱中樞調(diào)節(jié)的病理性疼痛和痛覺(jué)過(guò)敏[6]。此外，攜帶前腦啡肽原基因的HSV對(duì)嗎啡耐受的慢性疼痛具有鎮(zhèn)痛效果，而利用納洛酮拮抗可以逆轉(zhuǎn)其鎮(zhèn)痛效應(yīng)[7]，這表明其鎮(zhèn)痛作用是通過(guò)阿片受體介導(dǎo)的。我們的研究也證實(shí)腦啡肽基因是一種良好的鎮(zhèn)痛基因：將腦啡肽基因轉(zhuǎn)染入永生化星形膠質(zhì)細(xì)胞，在注射入大鼠蛛網(wǎng)膜下腔后可表達(dá)腦啡肽，產(chǎn)生良好的鎮(zhèn)痛效果[8]，利用慢病毒作用載體也有同樣的鎮(zhèn)痛效應(yīng)[9]。

②β-內(nèi)啡肽基因（beta-endorphin）：β-內(nèi)啡肽對(duì)μ和δ受體均有較強(qiáng)的親和力，它的鎮(zhèn)痛效應(yīng)要強(qiáng)于腦啡肽。β-內(nèi)啡肽能夠直接作用于脊髓的μ受體，還能夠通過(guò)結(jié)合脊髓后角中的ε受體，增加腦啡肽的分泌從而產(chǎn)生更強(qiáng)的鎮(zhèn)痛效應(yīng)。研究人員將β-內(nèi)啡肽基因轉(zhuǎn)入大鼠疼痛模型，測(cè)量大鼠的熱痛和機(jī)械痛，并測(cè)定腦脊液內(nèi)β-內(nèi)啡肽的濃度，發(fā)現(xiàn)β-內(nèi)啡肽的表達(dá)量明顯提高，大鼠痛閾也相應(yīng)增高[10]。

1.2 細(xì)胞因子家族

可用于慢性疼痛基因治療的免疫調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子有IL-2和IL-10，具有中樞和外周鎮(zhèn)痛作用。Yao等[11]將IL-2基因重組在pcDNA3.1上，構(gòu)建大鼠疼痛模型后測(cè)量其熱痛閾，發(fā)現(xiàn)采用轉(zhuǎn)IL-2基因能明顯發(fā)揮鎮(zhèn)痛效應(yīng)，且鎮(zhèn)痛效果同IL-2基因表達(dá)水平成正相關(guān)。

1.3 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子

神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子是一類(lèi)能夠促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞分化和再生、刺激神經(jīng)遞質(zhì)釋放及改變神經(jīng)元特性的蛋白分子，目前用于基因治療的主要是腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）。BDNF能在大腦和脊髓水平調(diào)節(jié)神經(jīng)肽的功能，從而抑制疼痛信息的傳遞。Cejas等[12]用永生化神經(jīng)細(xì)胞株轉(zhuǎn)染BDNF基因后，移植到疼痛模型大鼠的蛛網(wǎng)膜下腔，在第2～7周發(fā)現(xiàn)能明顯降低觸誘發(fā)痛和熱痛過(guò)敏。

1.4 疼痛傳導(dǎo)路徑

痛覺(jué)由外周神經(jīng)進(jìn)入脊髓背角，在此更換神經(jīng)元后發(fā)出纖維交叉到對(duì)側(cè)，經(jīng)脊髓丘腦側(cè)束上行抵達(dá)丘腦，并經(jīng)過(guò)換元進(jìn)一步投射到大腦皮層，其中的任何一個(gè)環(huán)節(jié)都可能是治療疼痛的潛在靶點(diǎn)。例如，NR2B是神經(jīng)元胞膜NMDA受體（N-methyl-D-aspartate receptor，NMDAR）的2B亞基，在脊髓水平主要分布于脊髓背角的淺層，參與痛覺(jué)信息的傳遞和調(diào)控。我們將NR2B基因插入腺病毒，能在大鼠體內(nèi)表達(dá)NR2B抗原以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生NR2B特異性抗體，并與神經(jīng)元或膠質(zhì)細(xì)胞膜上的NR2B結(jié)合，下調(diào)NR2B的表達(dá)或阻斷NR2B的激活，在神經(jīng)病理性疼痛模型中發(fā)揮良好的鎮(zhèn)痛作用[13，14]。

2 基因轉(zhuǎn)移載體

載體攜帶目的基因的高效表達(dá)是基因治療成功的關(guān)鍵。目前將轉(zhuǎn)基因物質(zhì)導(dǎo)入靶組織的有效方法有多種[2]，可用物理方法如電穿孔、超聲、基因槍等，也可用生物或化學(xué)載體的方法。載體方法可粗略分為兩大類(lèi)：病毒載體和非病毒載體。

2.1 病毒載體

病毒載體以病毒顆粒的方式，通過(guò)病毒包膜蛋白和宿主細(xì)胞膜的相互作用，使外源基因進(jìn)入宿主細(xì)胞內(nèi)。病毒載體轉(zhuǎn)染效率高，轉(zhuǎn)基因表達(dá)穩(wěn)定。這些病毒載體包括腺病毒、腺相關(guān)病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒和單純皰疹病毒。

2.1.1 腺病毒及腺相關(guān)病毒腺病毒載體

不同于單鏈逆轉(zhuǎn)錄DNA 病毒載體感染分裂細(xì)胞，它在分裂和非分裂細(xì)胞中均有高轉(zhuǎn)染效率。有研究證明鞘內(nèi)注射腺病毒載體后主要感染腦膜細(xì)胞，提示腺病毒載體可能有其他特異性的靶細(xì)胞[15]。我們的研究采用腺病毒作為載體能夠有效表達(dá)目的基因，從而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛效果[13，14]。腺病毒靶細(xì)胞的高逆轉(zhuǎn)引起的外源基因瞬時(shí)表達(dá)是限制其應(yīng)用的最大障礙。對(duì)腺病毒載體進(jìn)行修飾即為腺相關(guān)病毒載體，其本身無(wú)害，也不致炎或產(chǎn)生抗體。利用腺相關(guān)病毒感染坐骨神經(jīng)，可以發(fā)現(xiàn)在背根神經(jīng)節(jié)上的細(xì)、中和粗神經(jīng)纖維均能有效地表達(dá)[16]。相似的研究也證實(shí)：攜帶IL-10基因的腺病毒或腺相關(guān)病毒，在注射入蛛網(wǎng)膜下腔后移入腦膜細(xì)胞，能逆轉(zhuǎn)脊神經(jīng)結(jié)扎誘發(fā)的慢性疼痛癥狀[17，18]。

2.1.2 單純皰疹病毒（Herpes Simplex Virus， HSV）

HSV為雙鏈DNA病毒，其固有靶細(xì)胞是初級(jí)傳入神經(jīng)元，這賦予其它載體系統(tǒng)所不能相比的優(yōu)越性，而其它載體系統(tǒng)沒(méi)有特異性的靶細(xì)胞[19，20]。皮下注射HSV后，直接感染神經(jīng)元，經(jīng)過(guò)幾個(gè)周期的復(fù)制，進(jìn)入外周傳入神經(jīng)末梢，逆行至脊髓背根感覺(jué)神經(jīng)節(jié)胞體，在胞體中潛伏并不與宿主染色體組發(fā)生整合。單純皰疹病毒載體有如下優(yōu)點(diǎn)：由其嗜神經(jīng)性能夠作用于專(zhuān)一的靶細(xì)胞；經(jīng)過(guò)神經(jīng)軸突進(jìn)入中樞，避免了血腦屏障的障礙，給藥方式簡(jiǎn)便，能減少給藥次數(shù)及減輕藥物的副作用。這些優(yōu)點(diǎn)使HSV在慢性疼痛的基因治療中頗具前景[21，22]。

2.2 非病毒載體

包括細(xì)胞載體、脂質(zhì)體載體、細(xì)菌載體、人工染色體載體及受體載體等。細(xì)胞載體包括早期使用的腫瘤細(xì)胞，和最近研究較多的神經(jīng)干細(xì)胞、永生化神經(jīng)細(xì)胞，以及骨髓間充質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、造血干細(xì)胞等其他非神經(jīng)細(xì)胞，具有取材和培養(yǎng)方便、基因轉(zhuǎn)染容易、表達(dá)效率高、無(wú)移植排斥反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中能發(fā)揮較好的鎮(zhèn)痛效應(yīng)[8]。脂質(zhì)體載體已經(jīng)用于臨床，目前用于基因治療載體的脂質(zhì)體及其類(lèi)似物包括陽(yáng)離子脂質(zhì)體及其類(lèi)似物如脂聚-L/D-賴(lài)氨酸、聚陽(yáng)離子脂質(zhì)體、陰離子脂質(zhì)體、pH敏感型脂質(zhì)體、融合脂質(zhì)體以及在脂質(zhì)體上連接糖脂或含多羥基物質(zhì)（如PEG）的立體穩(wěn)定性脂質(zhì)體等[23]。目前細(xì)菌作為基因治療載體的實(shí)驗(yàn)均是在小鼠體內(nèi)完成，載體的效力和安全性尚有待進(jìn)一步研究[24]。

3 慢性疼痛基因治療的臨床研究

目前關(guān)于慢性疼痛的基因治療大都只限于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)水平，雖然在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)擁有很好的鎮(zhèn)痛效果，但是由于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的局限性，使基因鎮(zhèn)痛療法離臨床應(yīng)用依然十分遙遠(yuǎn)。

目前研究人員已經(jīng)開(kāi)始關(guān)注基因治療的臨床應(yīng)用前景。2009年Wolfe的研究小組[25，26]率先將基因治療疼痛帶入臨床研究階段中。他們首先進(jìn)行了完善的臨床前期準(zhǔn)備。在構(gòu)建了HSV介導(dǎo)的前腦啡肽原表達(dá)載體和谷氨酸脫羧酶（Glutamic Acid Decarboxylase，GAD）表達(dá)載體后，通過(guò)動(dòng)物疼痛模型觀察了兩種HSV病毒載體的鎮(zhèn)痛效果。之后進(jìn)一步對(duì)該病毒載體進(jìn)行基因修飾，以減少其同源性重組和野生型突變的發(fā)生率。兩種基因載體經(jīng)皮下注射小鼠后檢測(cè)各組織中HSV所攜帶目的基因的表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)除了注射部位皮膚、鄰近肌肉組織以及相應(yīng)節(jié)段的DRG神經(jīng)元中發(fā)現(xiàn)目的基因前腦啡肽原和GAD的表達(dá)外，其他組織中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯的表達(dá)，表明該基因載體擁有良好的生物學(xué)分布特性。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)小鼠的體重、進(jìn)食沒(méi)有變化，各種組織在肉眼及顯微鏡下均未見(jiàn)明顯的病理學(xué)改變，小鼠的各項(xiàng)血液生化指標(biāo)也均正常。這些臨床前期研究表明，HSV介導(dǎo)的鎮(zhèn)痛基因載體不僅擁有良好的鎮(zhèn)痛效果，而且擁有良好的靶向性，在生物學(xué)分布以及毒理學(xué)上已符合臨床研究的要求。這些都是基因治療疼痛應(yīng)用于臨床人群的基本要求，同時(shí)也是一直以來(lái)限制基因治療手段應(yīng)用于臨床的主要因素。Wolfe的研究小組[25，26]在完善的臨床前期準(zhǔn)備后將這兩種HSV基因載體應(yīng)用于12～24名頑固性癌痛患者，比較不同濃度病毒的鎮(zhèn)痛效果，并觀察臨床副作用。目前該實(shí)驗(yàn)結(jié)果尚未報(bào)道。這是首次將基因治療慢性疼痛應(yīng)用于臨床人群，其結(jié)果值得期待。

4 慢性疼痛基因治療存在的問(wèn)題

4.1 慢性疼痛基因治療的安全性

4.1.1 載體的安全性

非病毒載體一般無(wú)毒，而病毒載體都具有一定的神經(jīng)毒性，特別是HSV。腺病毒的毒性反應(yīng)主要是通過(guò)激發(fā)細(xì)胞免疫反應(yīng)造成炎性浸潤(rùn)。同源性重組和野生型突變，以及病毒基因整合入宿主DNA所產(chǎn)生的影響是限制病毒載體應(yīng)用的一個(gè)主要因素。研究表明腺相關(guān)病毒能夠整合到宿主DNA中，破壞一些重要基因如腫瘤抑制基因、癌基因等，導(dǎo)致腫瘤的產(chǎn)生，從而成為致癌物質(zhì)[27]。

另外，病毒載體的免疫反應(yīng)也是其毒性之一。腺相關(guān)病毒能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫反應(yīng)，不僅能夠在外周血清中檢測(cè)出抗體，而且在中樞系統(tǒng)中的腦脊液、腦實(shí)質(zhì)等也能發(fā)現(xiàn)抗體的存在[28-30]。尤其是當(dāng)腺相關(guān)病毒攜帶異原性基因時(shí)，更容易誘發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng)。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)雖然沒(méi)有發(fā)現(xiàn)腺相關(guān)病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫，而在一些臨床試驗(yàn)中卻發(fā)現(xiàn)腺相關(guān)病毒能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫反應(yīng)，并使病毒所攜帶的目的基因不能表達(dá)[31]，但是關(guān)于這一方面的臨床研究非常有限，缺乏足夠的數(shù)據(jù)支持。

4.1.2 基因產(chǎn)物的安全性

基因產(chǎn)物的有效表達(dá)是達(dá)到鎮(zhèn)痛目的的關(guān)鍵因素，但是其過(guò)量表達(dá)可能會(huì)引起相應(yīng)的副作用，導(dǎo)致神經(jīng)功能的損害，如含阿片肽基因載體的過(guò)量表達(dá)可能會(huì)導(dǎo)致呼吸抑制和成癮性的產(chǎn)生。

當(dāng)所選擇的鎮(zhèn)痛靶點(diǎn)不僅僅在疼痛中起重要作用時(shí)，其過(guò)量表達(dá)也會(huì)可能引起其他的副作用。如利用蛋白激酶C、NMDA受體、BDNF等基因治療疼痛時(shí)，均存在這種可能性。以NMDA受體為例，NMDA受體是腦內(nèi)受谷氨酸調(diào)控的一類(lèi)興奮性氨基酸受體，被激活后可引起鈣內(nèi)流，而鈣內(nèi)流是傳遞一些細(xì)胞內(nèi)生理病理信號(hào)的重要途徑。其不僅參與了疼痛病理過(guò)程，而且廣泛參與機(jī)體的多種生理活動(dòng)，如學(xué)習(xí)記憶、突觸可塑性等，并在其中起著重要的作用[32]。以NMDA受體作為基因治療的靶點(diǎn)，在達(dá)到鎮(zhèn)痛目的的同時(shí)可能會(huì)影響到正常的生理功能，改變神經(jīng)元的突觸可塑性，甚至產(chǎn)生認(rèn)知功能的損害。我們?cè)诶肗MDA基因治療慢性疼痛時(shí)已經(jīng)注意到這些問(wèn)題，并對(duì)大鼠的認(rèn)知功能和運(yùn)動(dòng)功能進(jìn)行了相應(yīng)的觀察，其結(jié)果令人滿意[14，33]。

4.2 基因治療疼痛的障礙

大多數(shù)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)受到血腦屏障的障礙。血腦屏障是中樞神經(jīng)系統(tǒng)與外周之間的生理屏障和代謝屏障，它是一種動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)，能夠根據(jù)機(jī)體環(huán)境快速做出調(diào)整以維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)。研究表明病毒載體、裸寡核苷酸等基因治療手段均不能有效進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)。解決這一問(wèn)題的方法有：①直接從實(shí)質(zhì)內(nèi)或蛛網(wǎng)膜下注射復(fù)合物；②繞開(kāi)血腦屏障轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入中樞；③一過(guò)性地破壞血腦屏障，使注射的復(fù)合物能透過(guò)。第一種方法雖然能夠取得最為直接的鎮(zhèn)痛效果，但其注射方式所帶來(lái)的創(chuàng)傷也不容忽視。HSV是第二種方法的典型代表，利用HSV作為載體能夠經(jīng)過(guò)外周內(nèi)源性軸漿轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)繞開(kāi)血腦屏障，進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，這似乎是疼痛基因治療的理想方法。第三種方法也許會(huì)拓寬我們的治療手段，例如疼痛對(duì)血腦屏障通透性的影響，使得外周用藥進(jìn)入中樞系統(tǒng)成為可能。因?yàn)榘ㄌ弁丛趦?nèi)的一些病理狀態(tài)會(huì)影響血腦屏障的結(jié)構(gòu)和功能，使其通透性發(fā)生相應(yīng)的調(diào)整。而且，疼痛引起的炎性反應(yīng)也能破壞內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連接和粘著連接，形成內(nèi)皮裂縫，導(dǎo)致血腦屏障的完整性遭到破壞，通透性增加[34]。這為外周給藥到中樞神經(jīng)系統(tǒng)提供了良好的途徑。

隨著生物治療技術(shù)的發(fā)展，有望發(fā)現(xiàn)并篩選出更為合適的基因載體，能夠更有效地表達(dá)目的基因；同時(shí)對(duì)慢性疼痛機(jī)制的深入研究，會(huì)發(fā)現(xiàn)更為明確的疼痛干擾基因，將兩者有效結(jié)合有望能為慢性疼痛患者帶來(lái)滿意的治療效果。而且，在對(duì)基因治療安全性的不斷追求與驗(yàn)證中，基因治療這一新穎的治療方法不僅能夠提供足夠的鎮(zhèn)痛效果，還能為慢性疼痛患者排除其他治療手段所帶來(lái)的副作用。

[1]Meunier A., Braz J, Cesselin F, et al. From inflammation to pain:experimental gene therapy[J]. Med Sci (Paris), 2004, 20(3): 325-30.

[2]Pohl M, Braz J. Gene therapy of pain: emerging strategies and future directions[J]. Eur J Pharmacol., 2001, 429(1-3): 39-48.

[3]Pohl M, Meunier A, Hamon M, et al. Gene therapy of chronic pain [J]. Curr Gene Ther., 2003, 3(3): 223-38.

[4]Glorioso JC, Mata M, Fink DJ. Gene therapy for chronic pain [J]. Curr Opin Mol Ther., 2003, 5(5): 483-8.

[5]Xu Y, Gu Y, Xu GY, et al. Adeno-associated viral transer of opioid receptor gene to primary sensory neurons: a strategy to increase opioid antinociception [J]. Proc Natl Acad Sci USA., 2003, 100: 6204-9.

[6]Yeomans DC ,Jones T ,Laurito CE, et al. Reversal of ongoing thermal hyperalgesia in mice by a recombinant herpesvirus that encodes human preproenkephalin[J]. Mol Ther., 2004, 9 (1) : 24-9.

[7]Yoshimura N, Franks ME, Sasaki K, et al. Gene therapy of bladder pain with herpes simplex virus (HSV) vectors expressing preproenkephalin(PPE) [J]. Urology, 2001, 57:116.

[8]Xu Y, Tian XB, An K, et al. Lumbar transplantation of immortalized enkephalin-expressing astrocytes attenuates chronic neuropathic pain[J].Eur J Pain., 2008, 12(4): 525-33.

[9]Tian X, Wang G, Xu Y, et al. An improved tet-on system for gene expression in neurons delivered by a single lentiviral vector [J]. Hum Gene Ther., 2009, 20(2): 113-23.

[10]Wu CM, Lin MW, Cheng JT, et al. Regulated ,electroporation-mediated delivery of pro- opiomelanocortin gene suppresses chronic constriction injury-induced neuropathic pain in rats[J ]. Gene Ther., 2004, 11(11): 933-40.

[11]Yao MZ, Gu JF, Wang JH, et al. Adenovirus-mediated interleukin-2 gene therapy of nociception [J]. Gene Ther., 2003, 10 (16) :1392-9.

[12]Cejas PJ ,Martinez M ,Karmally S, et al. Lumbar transplant of neurons genetically modified to secrete brain - derived neurotrophic factor attenuates allodynia and hyperalgesia after sciatic nerve constriction [J].Pain, 2000, 86 (1-2): 195-210.

[13]Wang GM, Tian YK, Chen JP, et al. Evaluation of NR2B peptide as subunit vaccines against experimental neuropathic pain [J]. Chin Med J (Engl).,2007, 120(8): 643-7.

[14]Wang GM, Tian XB, Chen JP, et al. Prevention of neuropathic pain in an animal model of spare nerve injury following oral immunization with recombinant adenovirus serotype 5-mediated NR2B gene transfer [J].Gene Ther., 2007, 14(24): 1681-7.

[15]Gudmundsson G, Bosch A, Davidson BL, et al. Interleukin-10 modulates the severity of hypersensitivity pneumonitis in mice [J]. Am J Respir Cell Mol Biol., 1998, 19(5): 812-8.

[16]Gu Y, Xu Y, Li GW, et al. Remote nerve injection of mu opioid receptor adeno-associated viral vector increases antinociception of intrathecal morphine[J]. J Pain.,2005, 6(5): 447-54.

[17]Milligan ED, Sloane EM, Langer SJ, et al. Controlling neuropathic pain by adeno-associated virus driven production of the anti-in fl ammatory cytokine,interleukin-10[J]. Mol Pain., 2005, 1:9.

[18]Milligan ED, Langer SJ, Sloane EM, et al. Controlling pathological pain by adenovirally driven spinal production of the anti-in fl ammatory cytokine,interleukin-10[J]. Eur J Neurosci., 2005a, 21(8): 2136-48.

[19]Mata M, Hao S, Fink DJ. Gene therapy directed at the neuroimmune component of chronic pain with particular attention to the role of TNF-α[J].Neurosci Lett., 2008, 437(3): 209-13.

[20]Mata M, Glorioso J, Fink DJ. Development of HSV-mediated gene transfer for the treatment of chronic pain [J]. Exp Neurol., 2003, 184(Suppl 1):S25-9.

[21]Zhou Z, Peng X, Hao S, et al. HSV-mediated transfer of interleukin-10 reduces inflammatory pain through modulation of membrane tumor necrosis factor alpha in spinal cord microglia [J]. Gene Ther., 2008, 15(3):183-90.

[22]Hao S, Mata M, Glorioso JC, et al. HSV-mediated expression of interleukin-4 in dorsal root ganglion neurons reduces neuropathic pain[J].Mol Pain., 2006, 2:6.

[23]Ramesh R ,Saeki T ,Templeton NS, et al. Successful treatment of primary and disseminated human lung cancers by systemic delivery of tumor suppressor genes using an improved liposome vector[J]. Mol Ther., 2001,3(3): 337-50.

[24]Mei S, Theys J, Landuyt W, et al. Optimization of tumor-targeted gene delivery by engineered attenuated Salmonella typhimurium[J]. Anticancer Res., 2002, 22 (6A): 3261-6.

[25]Wolfe D, Wechuck J, Krisky D, et al. A Clinical Trial of Gene Therapy for Chronic Pain [J]. Pain Med., 2009, 10(7): 1325-30.

[26]Wolfe D, Mata M, Fink DJ. A human trial of HSV mediated gene transfer for the treatment of chronic pain [J]. Gene Therapy, 2009,16(4): 455-60.

[27]Smith RH. Adeno-associated virus integration: virus versus vector [J].Gene Therapy, 2008, 15: 817–22.

[28]Kaplitt MG, Feigin A, Tang C, et al. Safety and tolerability of gene therapy with an adenoassociated virus (AAV) borne GAD gene for Parkinson’s disease: an open label, phase I trial[J]. Lancet, 2007, 369: 2097-105.

[29]Marks Jr WJ, Ostrem JL, Verhagen L, et al. Safety and tolerability of intraputaminal delivery of CERE-120 (adeno-associated virus serotype 2-neurturin) to patients with idiopathic Parkinson’s disease: an openlabel, phase I trial[J]. Lancet Neurol, 2008, 7:400-8.

[30]Worgall S, Sondhi D, Hackett NR, et al. Treatment of late infantile neuronal ceroid lipofuscinosis by CNS administration of a serotype 2 adenoassociated virus expressing CLN2 cDNA[J]. Hum Gene Ther., 2008,19: 463-74.

[31]Herzog RW. Immune responses to AAV capsid: are mice not humans after all[J]? Mol Ther., 2007, 15: 649-50.

[32]Kalia LV, Kalia SK, Salter MW. NMDA receptors in clinical neurology:excitatory times ahead[J]. Lancet Neurol., 2008, 7(8):742-55.

[33]楊少兵, 王公明, 田玉科, 等. rAd5/NR2B鎮(zhèn)痛疫苗對(duì)神經(jīng)病理性痛大鼠認(rèn)知功能的影響[J]. 中華麻醉學(xué)雜志, 2010, 30(2): 162-4.

[34]Lalive PH. Autoantibodies in in fl ammatory demyelinating diseases of the central nervous system[J]. Swiss Med Wkly., 2008, 138(47-48): 692-707.

傅志儉，女，主任醫(yī)師，山東大學(xué)教授、博士生導(dǎo)師，現(xiàn)任山東省立醫(yī)院麻醉科主任兼疼痛科主任。

為國(guó)際疼痛研究會(huì)（IASP）會(huì)員、中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)麻醉學(xué)醫(yī)師分會(huì)副主任委員、中華醫(yī)學(xué)會(huì)疼痛學(xué)分會(huì)常務(wù)委員、山東省醫(yī)師協(xié)會(huì)麻醉學(xué)醫(yī)師分會(huì)主任委員、山東省醫(yī)學(xué)會(huì)疼痛學(xué)分會(huì)主任委員、山東省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)麻醉與鎮(zhèn)痛專(zhuān)業(yè)委員會(huì)副主任委員、《中華麻醉學(xué)雜志》通訊編委、《國(guó)際麻醉學(xué)與復(fù)蘇雜志》、《中國(guó)疼痛醫(yī)學(xué)雜志》、《臨床麻醉學(xué)雜志》、《實(shí)用疼痛學(xué)雜志》、《山東醫(yī)藥》、Anaesthesia（中文版）編委。

電子郵箱：zhijian_fu@163.com

田玉科，主任醫(yī)師、教授、博士生導(dǎo)師、博士后指導(dǎo)教師。

現(xiàn)任華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院麻醉學(xué)教研室主任。中華醫(yī)學(xué)會(huì)理事、中華醫(yī)學(xué)會(huì)麻醉學(xué)分會(huì)副主任委員、中德醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)副理事長(zhǎng)、中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)麻醉學(xué)醫(yī)師分會(huì)常委、湖北省醫(yī)學(xué)會(huì)常務(wù)理事、中華醫(yī)學(xué)會(huì)武漢分會(huì)副會(huì)長(zhǎng)、武漢市科協(xié)委員、德國(guó)麻醉與危重醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)“榮譽(yù)會(huì)士”、美國(guó)麻醉醫(yī)師協(xié)會(huì)會(huì)員；《中華麻醉學(xué)雜志》、《臨床麻醉學(xué)雜志》常務(wù)編委，《華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)（英德文版）》，《臨床外科學(xué)雜志》編委。1992年起享受?chē)?guó)務(wù)院特殊津貼。

從事臨床麻醉及危重醫(yī)學(xué)三十余年，主要研究方向?yàn)樘弁椿A(chǔ)與治療，麻醉與免疫，血液稀釋在圍術(shù)期的應(yīng)用。近年來(lái)在國(guó)際國(guó)內(nèi)專(zhuān)業(yè)雜志上發(fā)表論文二百余篇，SCI收錄8篇，其主要研究成果發(fā)表在Gene Therapy、Huamn Gene Therapy、European Journal of Pain、Brain Research等雜志。主編著作4部，副主編著作2部，參編教材及著作十余部。先后以課題負(fù)責(zé)人承擔(dān)國(guó)家自然科學(xué)基金4項(xiàng)，國(guó)家教育部歸國(guó)人員基金1項(xiàng)，國(guó)家教育部博士點(diǎn)基金1項(xiàng)，湖北省科技廳重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目2項(xiàng)，湖北省衛(wèi)生廳科研基金1項(xiàng)，國(guó)際合作課題2項(xiàng)。

2006年獲湖北省科技進(jìn)步二等獎(jiǎng)1項(xiàng)，2001年獲湖北省科技進(jìn)步三等獎(jiǎng)1項(xiàng)，1999年湖北省衛(wèi)生廳科技進(jìn)步二等獎(jiǎng)1項(xiàng)，2005年、2006年連續(xù)兩年獲武漢市科技進(jìn)步三等獎(jiǎng)1項(xiàng)。

電子郵箱：yktian@tjh.tjmu.edu.cn