脾虛證與免疫系統(tǒng)關(guān)系研究概況與思考

陳學(xué)習(xí)，張英杰，李美霞，吳 赟

（福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州 350108）

脾虛證與免疫系統(tǒng)關(guān)系研究概況與思考

陳學(xué)習(xí)，張英杰，李美霞，吳 赟

（福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州 350108）

“脾為之衛(wèi)”、“四季脾旺不受邪”是中醫(yī)理論對脾防衛(wèi)、免疫功能的高度概括。為探討脾虛證與免疫系統(tǒng)的關(guān)系，本文從免疫器官、特異性免疫、非特異性免疫、體液免疫、免疫遺傳等角度進行了綜述，對當(dāng)前研究現(xiàn)狀給予客觀分析、評價，并提出了對將來研究模式與方法的思考與展望。

脾虛證；免疫系統(tǒng)；免疫機制

中醫(yī)藥理論中關(guān)于 “脾為之衛(wèi)”（《靈樞·五癃津液別論》）、“四季脾旺不受邪”（《金匱要略·臟腑經(jīng)絡(luò)先后病篇》）、“脾為后天之本”（《脾胃論》）以及“脾氣虛而四肢不用，五臟不安”（《靈樞·本神》）等有關(guān)脾胃生理及病理的論述，均反映了“脾（胃）”與機體防御機能（免疫功能）之間存在密切關(guān)系。脾的防衛(wèi)功能與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)免疫功能有許多相似之處，近年來基礎(chǔ)免疫學(xué)和臨床免疫學(xué)大量動物實驗和臨床研究證明，免疫系統(tǒng)和免疫功能的改變是脾虛證本質(zhì)研究的重要內(nèi)容之一，為探討脾虛證與免疫系統(tǒng)相關(guān)研究奠定了基礎(chǔ)。

1 脾虛證與免疫器官

免疫器官形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變，是其功能異常的物質(zhì)基礎(chǔ)。脾虛所致中樞免疫器官（骨髓、胸腺）及外周免疫器官（淋巴結(jié)、脾臟及其他淋巴組織）的重量減輕、實質(zhì)萎縮、骨髓細胞增殖、分化和造血功能減弱等免疫力降低的臨床表現(xiàn)與中醫(yī)脾虛證候基本吻合。目前，研究脾虛證與免疫器官的關(guān)系主要從觀察模型動物各免疫器官的臟器指數(shù)、病理切片及超微結(jié)構(gòu)等方面著手。黃秀深等[1]研究發(fā)現(xiàn)濕困脾胃模型大鼠脾臟及胸腺臟器系數(shù)降低，胸腺皮質(zhì)厚度及中央動脈淋巴鞘直徑變小，證明脾虛大鼠免疫器官的發(fā)育受到抑制。陳芝喜等[2]采用利血平注射法復(fù)制脾虛動物模型，觀察到模型動物脾、腎等多臟器組織中RNA含量下降，脾臟、胸腺等多臟器組織增殖減弱，進而影響到免疫細胞正常功能。組織器官超微結(jié)構(gòu)的改變是脾虛及免疫功能下降的客觀指標(biāo)之一，雷娓娓等[3]用電子顯微鏡觀察了脾虛大鼠脾臟淋巴細胞及胸腺細胞超微結(jié)構(gòu)的改變，發(fā)現(xiàn)脾臟淋巴細胞稀少，個別細胞的核周間隙增大，核內(nèi)染色質(zhì)輕度減少，胞質(zhì)和細胞器亦減少。陳國志等[4]通過觀察饑飽失常結(jié)合勞倦過度法建立的脾虛大鼠模型發(fā)現(xiàn)，模型動物免疫器官萎縮、腫脹、空化、排列不整齊。王運平等[5]采用大黃水煎劑灌胃法復(fù)制脾虛模型小鼠并檢測其免疫功能，發(fā)現(xiàn)模型動物的脾臟重量、脾臟臟器指數(shù)、胸腺重量及胸腺指數(shù)等指標(biāo)均低于正常小鼠，并存在非常顯著性差異。另外，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認為，黏膜免疫系統(tǒng)是人體最大的免疫器官，可使機體免受外界抗原及致病微生物的干擾，成為機體與外界的第一道防線。腸道和相關(guān)淋巴組織是構(gòu)成人體以SIgA為主要抗體的公共黏膜免疫系統(tǒng)的主要器官，在以泄瀉為主要癥狀的脾虛證中，腸道免疫起到了重要的調(diào)節(jié)作用，為脾虛證與腸道局部免疫提供了免疫學(xué)證據(jù)。許長照等[6]研究發(fā)現(xiàn)，脾虛小鼠圓頂區(qū)被淹而減少，M細胞數(shù)也明顯降低，表明脾虛證腸道免疫功能低下，腸黏膜屏障作用減弱而易患病。王文波等[7]研究報道，應(yīng)用免疫組織化學(xué)法研究脾虛證胃腸道黏膜的各種淋巴細胞，再結(jié)合全身的細胞與體液免疫功能變化，將有助于進一步全面地揭示脾虛證免疫功能變化的本質(zhì)。

2 脾虛證與非特異性免疫

脾為氣血生化之源，脾虛所致水谷精微轉(zhuǎn)輸不足、氣血生化乏源，機體非特異性免疫功能下降，致使機體基本屏障作用減弱。許多動物實驗與臨床研究均表明脾虛證普遍存在非特異性免疫功能異常，主要表現(xiàn)在自然殺傷細胞活性、巨噬細胞吞噬能力、全血白細胞吞噬指數(shù)、嗜酸性粒細胞等功能低下或數(shù)量減少以及血漿纖維結(jié)合蛋白水平下降等。王運平等[8]以脾虛小鼠腹腔巨噬細胞吞噬率和吞噬指數(shù)為觀察指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)補中益氣湯能活化巨噬細胞，顯著提高其吞噬能力，提高免疫功能，從而改善脾虛癥狀表現(xiàn)。陳勇等[9]觀察防己黃芪湯灌胃給藥后可明顯對抗脾虛小鼠腹腔巨噬細胞和脾臟T細胞功能降低程度，脾虛小鼠的脾臟T細胞經(jīng)ConA激活后增殖化活性和產(chǎn)生IL-2的活性明顯受到抑制。章梅等[10]研究發(fā)現(xiàn)脾虛患者血清可溶性細胞黏附分子-1（SICAM-1）水平明顯高于正常，可推出脾虛時白細胞黏附作用減弱，提示脾虛證非特異性免疫功能處于低水平狀態(tài)。章梅等[11]還用酶標(biāo)免疫法測定了66例脾虛患者和健康者的血漿纖維結(jié)合蛋白含量及巨噬細胞吞噬功能，結(jié)果表明其血漿纖維結(jié)合蛋白（血漿Fn）和巨噬細胞吞噬功能下降，且二者呈高度正相關(guān)（r=0.936），并認為血漿Fn水平下降是脾虛非特異性免疫功能失調(diào)的重要方面。

3 脾虛證與特異性免疫

3.1 脾虛證與細胞免疫

以T淋巴細胞為主導(dǎo)的免疫統(tǒng)稱為細胞免疫，T細胞網(wǎng)絡(luò)對機體免疫應(yīng)答的調(diào)控和維持免疫穩(wěn)定具有重要作用。目前已證實脾虛患者的細胞免疫功能較正常明顯降低，主要表現(xiàn)為T細胞減少、淋巴轉(zhuǎn)化率、T淋巴細胞亞群、NK細胞的結(jié)合性及殺傷性降低等。朗笑梅等[12]檢測了38例脾虛泄瀉患者外周血的T淋巴細胞亞群，觀察到脾虛泄瀉組OKT1、OKT4、OKT8、OKT4/OKT8比值皆明顯低于健康對照組，且有極顯著性差異。王洪梅等[13]采用過度勞倦加飲食失節(jié)法建立大鼠脾虛模型并與對照組相比，發(fā)現(xiàn)模型大鼠血清IL-1β第1周明顯升高,第4周自然恢復(fù)期顯著降低；血清白細胞介素-2第3周時顯著降低（P<0.01），第4周自然恢復(fù)期有回升趨勢；血清TNF-α水平第1～4周各點均無顯著性差異。丁潔等[14]通過動物實驗證實，外周血T淋巴細胞的分化增殖能力下降，末梢血中T淋巴細胞總數(shù)、輔助性T細胞明顯減少，抑制性T細胞相對增多，輔助性T細胞與抑制性T細胞比值異常，說明脾虛患者細胞免疫功能降低，免疫調(diào)節(jié)機制紊亂。

另外，紅細胞免疫是通過其表面的C3b受體的黏附作用、結(jié)合形成抗原-抗體-免疫復(fù)合物，進而被清除來實現(xiàn)的免疫功能。田維毅等[15]就不同因素建立脾虛大鼠的紅細胞免疫功能進行初步探討，檢測發(fā)現(xiàn)除番瀉葉組紅細胞總數(shù)與對照組比較無顯著性差異外，其余模型組的各項檢測指標(biāo)均顯著低于對照組，提示脾虛大鼠的紅細胞免疫功能較對照組低下。劉健等[16]等觀察脾虛泄瀉患者C3b-RR與木糖吸收率、RBC、Hb、血漿總蛋白和清蛋白呈直線正相關(guān)，脾虛證患者紅細胞C3b受體數(shù)量減少、活性降低，直接影響到紅細胞免疫功能。陳永輝等[17]等研究表明，脾虛模型實驗小鼠紅細胞數(shù)量和血紅蛋白含量有相關(guān)性，RBC-C3b-RR、RBC-1c-R的含量直接關(guān)系到免疫功能的高低。余華等[18]觀察到脾虛證大鼠C3b受體花環(huán)率降低，免疫復(fù)合物花環(huán)率升高，與正常組有顯著性差異，推測脾虛免疫功能的變化可能表現(xiàn)在紅細胞免疫方面。

3.2 脾虛證與體液免疫

體液免疫是以B淋巴細胞為主導(dǎo)，在T細胞協(xié)助下參與的一類細胞免疫，目前體液免疫功能與脾虛證的關(guān)系尤以免疫球蛋白、補體等方面研究報道較多。李艷等[19]對ConA、LPS誘導(dǎo)T、B淋巴增殖反應(yīng)，可使大黃煎液建立的脾虛小鼠不同程度地提高其體液免疫功能，其機理可能與脾虛小鼠綿羊紅細胞抗體的生成，提高體液免疫能力有關(guān)。李冀等[20]通過實驗發(fā)現(xiàn)中藥各組均能增加脾虛泄瀉大鼠分泌型SIgA與IL-2，繼而誘導(dǎo)或促進多種細胞毒細胞活性，發(fā)揮免疫監(jiān)視作用。黎世堯等[21]發(fā)現(xiàn)脾虛泄瀉患者糞便中分泌性IgA增高，而靜脈血中免疫球蛋白IgG、IgA、IgD的水平均低于正常健康組且有顯著性差異，可能與機體消化吸收功能障礙，大量的食物殘渣殘留，以抗原形式刺激腸黏膜，使局部免疫反應(yīng)加速。孫理軍等[22]取脾虛大鼠唾液腺做切片觀察大鼠唾液腺分泌型免疫球蛋白和唾液溶菌酶的含量變化，發(fā)現(xiàn)大鼠脾虛證的白細胞介素6、唾液溶菌酶增高，分泌型免疫球蛋白A降低，大鼠脾虛證與唾液免疫具有一定的關(guān)系。

4 脾虛證與免疫遺傳

當(dāng)前脾虛證與免疫遺傳關(guān)系的研究主要集中在基因及細胞凋亡等方面，環(huán)核苷酸在調(diào)控基因表達等方面亦有重要作用，脾虛狀態(tài)會直接影響其環(huán)核苷酸含量，繼而影響其免疫功能與遺傳特性。徐焱琛等[23]研究發(fā)現(xiàn)大黃復(fù)制脾虛模型大鼠血漿cAMP含量及cAMP/cGMP比值均比正常對照組顯著升高，cGMP含量降低，但無顯著性差異；黃芪四君湯組cAMP含量及cAMP/cGMP比值降低，與脾虛模型組比較有非常顯著性差異。陳亮等[24]觀察脾虛型腸易激綜合征模型兔環(huán)核苷酸水平的變化，發(fā)現(xiàn)WHBE兔模型對照組血漿cAMP和cGMP水平均顯著升高。另外，還有人從P53基因著手研究脾虛證與遺傳基因關(guān)系，實質(zhì)上是從免疫遺傳學(xué)和疾病易感性的角度探討相關(guān)基因與脾虛證的關(guān)系。但從細胞凋亡角度對脾虛證的研究仍值得進一步探討，徐珊等[25]對氣陰兩虛型慢性胃炎胃黏膜中細胞凋亡調(diào)控基因蛋白的表達進行研究發(fā)現(xiàn)，促進細胞凋亡的基因調(diào)控蛋白Bax、Fax、P16的表達減弱,細胞凋亡受到抑制。

5 思考及展望

綜上所述，免疫功能的改變是脾虛證免疫學(xué)研究的主要內(nèi)容，近年來無論是研究的廣度和深度均有較大進步，眾多學(xué)者從多角度、多方法對脾虛證進行系統(tǒng)研究，從免疫器官臟器系數(shù)、細胞功能及分子水平已逐步深入到遺傳基因水平，這是脾虛證與近代前沿學(xué)科如免疫學(xué)、分子生物學(xué)密切結(jié)合的結(jié)果。但是，由于中醫(yī)藥理論體系的獨特性和復(fù)雜性，研究人員的認識水平和觀察研究切入點不同，研究方法和手段的差異性等，導(dǎo)致學(xué)界對脾虛證與免疫功能的認識及研究結(jié)果存在許多差異。

筆者經(jīng)綜合分析、思考，認為應(yīng)當(dāng)從以下幾點進行規(guī)范并加以深入研究：首先，因為“脾”是以消化系統(tǒng)為主體的旁系免疫、血液系統(tǒng)等的綜合臟器，應(yīng)當(dāng)始終堅持以中醫(yī)藥理論的整體觀念為指導(dǎo)，從整體上宏觀把握整個系統(tǒng)變化的全貌。一要從臟腑功能生克制化的角度著眼，把握好脾臟與肝、腎、心等臟器功能的相關(guān)性；二要從脾是以消化系統(tǒng)功能為主的綜合性功能器官著眼，把握好脾自身各個功能之間的相關(guān)性，如脾“為之衛(wèi)（免疫功能）”與“主運化（消化功能）”、“主統(tǒng)血（循環(huán)功能）”等之間的關(guān)系性。研究時注重系統(tǒng)之間的整合效應(yīng)以及因局部改變影響到的整體效應(yīng)，方可概括出整個系統(tǒng)變化的全貌，避免犯以偏概全或一葉障目的錯誤。其次，脾虛證是多種“病”的發(fā)展變化過程中某一階段的病理概括，研究中應(yīng)強調(diào)對脾虛證證型及其免疫功能變化的動態(tài)對照研究，畢竟不同病理階段脾的免疫本質(zhì)也存在很大不同，尤其是在脾氣虛、脾陽虛、脾陰虛以及脾虛與腎虛的證候轉(zhuǎn)化階段，更應(yīng)當(dāng)注意對其免疫功能變化進行綜合、動態(tài)的對照研究。再次，針對脾虛證候病因的復(fù)雜性與動物模型復(fù)制方法的多樣性，應(yīng)加強開展系統(tǒng)的比較醫(yī)學(xué)研究。如饑飽失常、勞倦過度、苦寒瀉下、破氣耗氣等方法所復(fù)制動物模型的免疫功能也必然存在一定的差異性，本著異中求同、同中求異的基本研究原則，對以上不同脾虛證“亞型”進行免疫學(xué)機制的比較研究。最后，針對當(dāng)前客觀存在的研究結(jié)果不一甚至完全相左的報道，我們應(yīng)當(dāng)客觀看待，及早制定出規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化研究模式和評價標(biāo)準(zhǔn)，并加以推廣運用。另外，因為脾虛證本身的復(fù)雜性和特殊性也決定了研究方法和手段的特殊性與多樣性，只有采取更為豐富、先進、科學(xué)的多學(xué)科綜合研究手段，進一步加強對脾虛證免疫功能、免疫調(diào)節(jié)及免疫機制方面的研究，才能有望取得更大的突破。

[1]黃秀深,沈濤,劉偉,等.平胃散對濕困脾胃證模型大鼠部分免疫功能的影響[J].中醫(yī)雜志,2007,48(8):730-732.

[2]陳芝喜,徐志偉,劉小斌,等.強肌健力口服液對脾虛小鼠RNA的影響[J].中國臨床康復(fù),2006,10(43):129-131.

[3]雷娓娓,黃真炎,鄭高飛,等.腎虛、脾虛造型動物免疫超微結(jié)構(gòu)的比較研究[J].深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志,1999,9(2):14-15.

[4]陳國志,謝國良,王廣義,等.加味四君子湯對脾虛大鼠臟器的組織學(xué)及超微結(jié)構(gòu)的影響[J].中藥藥理與臨床,1995,11(1):1-5.

[5]王運平,李波清,邱世翠.脾虛小鼠免疫功能的探討[J].中國中西醫(yī)結(jié)合脾胃雜志,1998,6(1):34-36.

[6]許長照,張瑜瑤.祁白術(shù)治療脾虛小鼠對消化器官組化和超微結(jié)構(gòu)的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志,2001,9(5):268.

[7]王文波,夏天.脾虛證免疫功能變化研究進展[J].湖南中醫(yī)雜志,1995,11(3):51-53.

[8]王運平,邱世翠,李波清,等.補中益氣湯對脾虛小鼠非特異性免疫和體液免疫的影響[J].濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1998,21(1):9-11.

[9]陳勇,吳敏毓.防己黃芪湯對脾虛小鼠Mψ、T細胞功能的影響[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2000,19(1):48-50.

[10]章梅,張仲海,夏天,等.四君子湯對脾虛患者血清可溶性細胞粘附分子-1水平和單核細胞功能的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,1999,19(5):270.

[11]章梅,夏天,南耘,等.脾虛患者血漿纖維連接蛋白和巨噬細胞功能的變化[J].浙江中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1999,23(5):36.

[12]朗笑梅,王再謨.脾虛泄瀉患者T細胞亞群的測定[J].中醫(yī)藥研究,1998,14(1):47-48.

[13]王洪海,謝鳴.復(fù)合病因造模法致脾虛證大鼠模型在免疫系統(tǒng)方面的變化[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2006,12(12):41-45.

[14]丁潔,吳咸中.脾虛患者部分細胞和局部免疫功能指標(biāo)的判定[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,1992,2(2):77-79.

[15]田維毅,周愛麗,劉燕.“脾虛證”大鼠模型紅細胞免疫功能的探討[J].貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1999,21(2):61.

[16]劉健,孫弼剛.脾虛泄瀉患者紅細胞免疫功能的臨床研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,1994,14(9):531-533.

[17]陳永輝,朱珊,楊守峰.健脾止瀉顆粒對脾虛模型小鼠紅細胞免疫功能的影響[J].中國中醫(yī)藥科技,2001,8(1):27.

[18]余華,黃迪君,王再謨.灸法對脾虛大鼠血清D-木糖含量及紅細胞免疫功能的影響[J].上海針灸雜志,1999,18(2):34-35.

[19]李艷,路西明,王淑英,等.參歸軟肝膠囊對脾虛小鼠免疫功能的影響[J].時珍國醫(yī)國藥,2009,20(2):294-295.

[20]李冀,鄒大威,杜雅薇,等.二神丸與四神丸對脾虛泄瀉大鼠分泌型IgA白介素-2含量影響的配伍比較研究 [J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2007,25(12):2437-2439.

[21]黎世堯,王再漠,周邦靖.脾虛泄瀉患者糞便分泌性IgA的研究[J].中國實驗臨床免疫學(xué)雜志,1991,3(1):37-38.

[22]孫理軍,張登本,李懷東,等.大鼠脾虛模型的唾液免疫學(xué)研究[J].陜西中醫(yī),2004,25(7):665.

[23]徐焱琛,藍森麟,陳津巖,等.黃芪四君湯對脾虛證大鼠甲狀腺素及環(huán)核苷酸水平的影響[J].中藥新藥與臨床藥理,2007,18(4):291-292.

[24]陳亮,陳民利,徐劍欽.脾虛證IBS模型WHBE兔血漿環(huán)核苷酸水平的變化[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志,2009,19(8):44-47.

[25]徐珊,石君杰,朱曙東,等.細胞凋亡調(diào)控基因蛋白在慢性胃炎氣陰兩虛證胃黏膜中的表達[J].中國醫(yī)藥學(xué)報,2002,17(6):338-340.

R256.3

A

1674-4721（2010）12（a）-002-03

福建省自然科學(xué)基金資助項目（2007J0099）。

陳學(xué)習(xí)（1974-），男，山東濟寧人，副教授，醫(yī)學(xué)博士，碩士生導(dǎo)師，從事中醫(yī)病證動物模型與方劑配伍規(guī)律研究。

2010-11-10）