珠光香青對α-葡萄糖苷酶的抑制活性研究

閆紅月 劉世峰 孫利偉

珠光香青(Anaphalis marguuritacea Benth.Et Hook)為菊科香青屬植物，具有清熱解毒、祛風活絡(luò)等作用。其含黃酮類甾體和三萜類。國內(nèi)外對它的藥理研究報告很少，本文對其α-葡萄糖苷酶的抑制活性進行了研究。

1 儀器與材料

Multiskan MK3酶標儀(美國 Thermo Electron公司);DELTA 320型PH計(美國Mettler-Toledo公司)。α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase，EC 3.2.1.20)購自美國Sigma公司。

珠光香青于2008年7月采集于河南商城，經(jīng)河南大學天然藥物研究所袁王俊博士鑒定為菊科香青屬植物珠光香青 Anaphalis marguuritacea Benth.Et Hook，標本存于河南大學天然藥物研究所。

2 實驗部分

將珠光香青粉碎，放入桶內(nèi)，分別用石油醚、乙酸乙酯、甲醇冷浸提取3次，1次/7 d，然后將各個部分的提取液合并，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收溶劑，即可得到石油醚、乙酸乙酯、甲醇部分提取物。

2.1 α-葡萄糖苷酶劣力的測定 112 μL磷酸鉀緩沖液(pH 6.8)，加入0.2 U/ml的 α-葡萄糖苷酶20 μL，DMSO 8 μL，37℃恒溫15 min后加入2.5 mmol/L PNPG 20 μL，37℃恒溫反應(yīng)15 min。再加入0.2 mol/L的Na2CO3溶液 80 μL，于405 nm波長下測OD值。

2.2 標準曲線制作 根據(jù)采用的反應(yīng)體系，用磷酸緩沖液(pH 6.8)配置 1000 μmol/L PNPG，稀釋成 400、300、200、150、100、50、25、5 和 0 μmol/L。分別取 7 種不同濃度的PNPG 溶液各 160 μl，加入 0.2 mol/L Na2CO3溶液 80 μl，混勻，在405 nm下測定OD值，測三組取平均值。以O(shè)D值為縱坐標，對硝基苯酚濃度為橫坐標，做出標準曲線。

2.3 α-糖苷酶抑制活性的檢測 以張麗［3］等建立的96微孔板篩選方法，405 nm處檢測其OD值。并用Origin軟件求出相應(yīng)IC50值。

3 結(jié)果與討論

珠光香青三個部分的提取物在相同濃度下(1.5 mg/ml)測定其α-葡萄糖苷酶的抑制活性。乙酸乙酯部分和甲醇部分在濃度為1.5 mg/ml時對α-葡萄糖苷酶的抑制活性均較高。

為進一步研究抑制活性，對珠光香青三個部分的提取物的初篩終濃度依次對半稀釋進行IC50值計算。得出各提取物的IC50值大小為:石油醚部分的IC50為173.3μg/ml;甲醇部分的IC50為669.1 μg/ml;它們都遠低于陽性對照Acarbose(1081.27 μg/ml)，只有乙酸乙酯部分的 IC50為 1125.2μg/ml，高于陽性對照 Acarbose(1081.27 μg/ml)。

珠光香青不同部位提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性均呈劑量依賴性，而且，當抑制率達到一定程度時，再增加提取物質(zhì)量濃度，抑制活性不會提高［3］。其中，石油醚部分提取物在1 mg/ml時，就達到了它的最大抑制率，說明石油醚部分提取物具有良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性。

［1］張麗，李曉梅，李彩芳，等.加拿大蓬α-葡萄糖苷酶抑制作用研究.河南大學學報(醫(yī)學版)，2008，27(4):39-41.