千佛菌對(duì)衰老模型小鼠SDH和MDA影響的實(shí)驗(yàn)研究

孫瑜,席孝賢 ,賀新懷

(陜西中醫(yī)學(xué)院,陜西咸陽(yáng)712046)

千佛菌(Grirola frondosa)是一種名貴的藥食兩用高等真菌類(lèi)中藥,含有多種活性組分。本研究旨在從D-半乳糖所致衰老模型小鼠出發(fā),探討千佛菌的抗衰老作用,為開(kāi)發(fā)中藥新制品、延緩衰老及防治老年病提供實(shí)驗(yàn)與理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物制備 千佛菌干品浸泡煮沸30 min過(guò)濾,重復(fù)2次;將2次所得濾液混合,濃縮制成100%(W/V)濃度;50%濃度生理鹽水稀釋。D-半乳糖注射粉針劑制成5 mg/mL D-半乳糖生理鹽水溶液。

1.2 試劑與儀器 SDH、MDA測(cè)定試劑盒,購(gòu)自南京建成生物工程研究所。723型分光光度計(jì);KDC-40低速離心機(jī)。

1.3 動(dòng)物分組 昆明種小鼠40只,雌雄各半,體重(20±2)g,按體重隨機(jī)分為4組：正常對(duì)照、衰老模型、千佛菌大(100%濃度)、小劑量組(50%濃度),每組10只,雌雄各半。

1.4 造模及用藥 參照文獻(xiàn)[1]除正常對(duì)照組,其余各組小鼠每日腹腔注射D-半乳糖溶液0.4 mL/只,連續(xù)6周。自21 d起,千佛菌大、小劑量組分別灌胃100%和50%濃度藥液0.4 mL/只,每日1次,連續(xù)3周。

1.5 腦組織SDH、MDA活性的測(cè)定 末次給藥12 h后,取腦組織按 1∶9比例勻漿,3 000 r/min離心15 min,制成10%的腦組織勻漿液,并參照試劑盒測(cè)定腦組織SDH及MDA。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 對(duì)小鼠腦SDH活性的影響 見(jiàn)表1。

2.2 對(duì)小鼠腦MDA活性的影響 見(jiàn)表2。

表1 實(shí)驗(yàn)各組對(duì)小鼠腦SDH活性的影響(±s)

表1 實(shí)驗(yàn)各組對(duì)小鼠腦SDH活性的影響(±s)

注：與正常對(duì)照組比較,▲▲P＜0.01;與模型組比較,#P＜0.05,##P＜0.01。

組 別 n SDH/(U/mgprot)正 常 對(duì) 照 組 10 9.1±1.7模 型 對(duì) 照 組 10 5.8±1.2▲▲千佛菌小劑量組 10 7.3±1.9#千佛菌大劑量組 10 8.6±2.1##

表2 實(shí)驗(yàn)各組對(duì)小鼠腦MDA活性的影響(±s)

表2 實(shí)驗(yàn)各組對(duì)小鼠腦MDA活性的影響(±s)

注：與正常對(duì)照組比較,▲▲P＜0.01;與模型組比較,#P＜0.05,##P＜0.01。

組 別 n MDA/(mmol/mg)正 常 對(duì) 照 組 10 11.34±2.12模 型 對(duì) 照 組 10 16.91±3.19▲▲千佛菌小劑量組 10 15.52±3.17#千佛菌大劑量組 10 12.35±2.74##

3 討論

琥珀酸脫氫酶(SDH)存在于有氧呼吸細(xì)胞線(xiàn)粒體內(nèi)膜,不需輔酶,自身有黃素蛋白作為輔基,常用來(lái)反映三羧酸循環(huán)情況,是線(xiàn)粒體標(biāo)志酶之一。衰老時(shí)線(xiàn)粒體發(fā)生腫脹、變性、空洞化、數(shù)量減少等一系列退行性改變[2],SDH活性的衰退與線(xiàn)粒體損傷同時(shí)出現(xiàn)且與線(xiàn)粒體數(shù)目呈正相關(guān)。所以SDH活性可反應(yīng)線(xiàn)粒體能量代謝狀況。丙二醛(MDA)介導(dǎo)自由基損傷,有很強(qiáng)的生物反應(yīng)活性,能攻擊所有的生物大分子,導(dǎo)致結(jié)構(gòu)改變和功能喪失,最終引起細(xì)胞功能減退及細(xì)胞外環(huán)境發(fā)生與衰老相關(guān)改變,是生物膜磷酯中多不飽和脂肪酸受自由基攻擊的終產(chǎn)物之一。多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道,MDA水平在60歲以上老年組顯著升高,而60歲以下人群相對(duì)穩(wěn)定[3]。MDA可反映細(xì)胞損傷情況及機(jī)體衰老程度。

本實(shí)驗(yàn)SDH檢測(cè)表明千佛菌可提高衰老模型小鼠SDH活性,同時(shí)降低MDA含量,且大、小劑量組間存在一定劑量依賴(lài)性,大劑量較小劑量有更顯著的治療效果。證明千佛菌可以提高機(jī)體抗氧化衰老能力,維持機(jī)體正常生理平衡。

[1]余資江,應(yīng)大君,董世武,等.半乳糖急性致衰老動(dòng)物模型劑量的探討[J].解剖學(xué)雜志,2005,28(4)：424.

[2]Susan M,Tanhauser,PhilipJ,Laipis.Multiple deletions are perectable in mitochondrial DNA of aqine mice.J.Biol.Chem.,1995,270：24769-24775.

[3]Inal ME.Kanbak G,Sund E.Antioxidant enzyme activities and malondialdehyde levels related to aging[J].Clin Cheim Acta,2001,305：75.