Ca（NO3）2對(duì)馬鈴薯脫毒試管苗生長(zhǎng)的影響

呂金鳳，辛建華

（石河子大學(xué)農(nóng)學(xué)院園藝系，新疆石河子，832000）

馬鈴薯（Solanum tuberosumL.）是重要的糧菜兼用農(nóng)作物，富含淀粉、蛋白質(zhì)和少量脂肪，還含有維生素 B、C 和 N、P、K、Ca、Mg、Fe等多種礦質(zhì)元素，是一種營(yíng)養(yǎng)保健食品。它具有生長(zhǎng)期短、產(chǎn)量高、適應(yīng)性強(qiáng)，產(chǎn)量高的特點(diǎn)而被廣泛種植[1]。采用莖尖組織培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)脫毒種薯是防治馬鈴薯病毒病最經(jīng)濟(jì)有效的方法，目前已經(jīng)在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用并走向工業(yè)化，取得了巨大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。馬鈴薯試管苗培養(yǎng)是進(jìn)行試管薯誘導(dǎo)和脫毒試管苗技術(shù)的基礎(chǔ)，但由于培養(yǎng)過(guò)程中需進(jìn)行反復(fù)繼代培養(yǎng)，人工控制的生長(zhǎng)條件波動(dòng)性比較大，因此馬鈴薯脫毒試管苗常常出現(xiàn)生長(zhǎng)過(guò)旺現(xiàn)象，具體表現(xiàn)為徒長(zhǎng)、根細(xì)長(zhǎng)、苗細(xì)弱、節(jié)間距長(zhǎng)、節(jié)數(shù)少、葉柄較長(zhǎng)、葉片小且薄、數(shù)量少、葉色淡，這種試管苗不僅影響到下一代擴(kuò)繁，而且嚴(yán)重影響移栽成活率和結(jié)薯率[2]。為此脫毒試管苗的生產(chǎn)擴(kuò)繁是馬鈴薯繁育體系中極其關(guān)鍵的環(huán)節(jié)之一，但目前的研究主要局限于單因素，如固定物、激素、碳源及水分等對(duì)試管苗生長(zhǎng)的影響。鈣是作物生長(zhǎng)發(fā)育必需的營(yíng)養(yǎng)元素，鈣在維持細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和細(xì)胞膜的完整性方面具有重要的作用。另外，鈣也是重要的信號(hào)分子，是植物生長(zhǎng)發(fā)育的重要調(diào)節(jié)因子[3～4]，又是作物代謝的重要調(diào)控者。鈣對(duì)蛋白質(zhì)的合成、對(duì)碳水化合物的輸送，以及對(duì)蔬菜體內(nèi)有機(jī)酸的中和等都起著很大的作用[5]，在馬鈴薯生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中補(bǔ)鈣[6]，不僅可減少地下莖的發(fā)生數(shù)量，促進(jìn)主莖增粗，減少塊莖形成的數(shù)量，增加商品產(chǎn)量，而且可以增加塊莖內(nèi)鈣的含量，延長(zhǎng)塊莖的貯藏期[7～8]。本試驗(yàn)通過(guò)研究在MS培養(yǎng)基中添加不同濃度的Ca（NO3）2對(duì)試管苗生長(zhǎng)的影響，為探索高產(chǎn)量、高品質(zhì)、高效率和低成本的馬鈴薯脫毒試管苗調(diào)控生產(chǎn)技術(shù)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料為脫毒馬鈴薯品種尤金，脫毒試管苗由石河子大學(xué)園藝系組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 試驗(yàn)方法

培養(yǎng)基為 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L+瓊脂 0.6%+蔗糖 3%+不同濃度的 Ca（NO3）2處理（pH值5.8），Ca（NO3）2濃度為：處理 1：0 mmol/L；處理 2：5 mmol/L；處理 3：10 mmol/L；處理 4：15 mmol/L；處理5：20 mmol/L。各處理培養(yǎng)基用無(wú)離子水配制，分裝入50 mL三角瓶中，每個(gè)處理15瓶，經(jīng)高壓滅菌20 min，取出放到無(wú)菌室冷卻備用。選繼代培養(yǎng)30 d的帶6～8片葉的脫毒苗在無(wú)菌條件下剪成帶1片腋芽的莖段植入培養(yǎng)基中，每瓶5株。接種后7，14，21，28 d分別從每處理中隨機(jī)抽取3瓶測(cè)量，并記錄試管苗有效莖節(jié)數(shù)、株高、莖粗、鮮質(zhì)量、干質(zhì)量、根數(shù)、葉片數(shù)，使用SPSS 16.0分析軟件，用新復(fù)極差法進(jìn)行方差分析。

1.3 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)光強(qiáng) 4 000 lx，光照 12 h/d，溫度（26±2）℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 Ca（NO3）2對(duì)試管苗有效莖節(jié)數(shù)的影響

由表1可以看出，隨鈣濃度的增加，各處理試管苗的有效莖節(jié)數(shù)也隨之增加，處理2，3，4，5與處理1（即CK）相比在7 d時(shí)分別提高了25%，36%，52%，41%； 在 14 d 時(shí)分別提高了 12.3%，19.6%，95.4%，92.7%；在 21 d 時(shí)分別提高了 8.6%，39.1%，169%，128%；在 28 d 時(shí)分別提高了 13.5%，21.7%，90.7%，90.4%。

結(jié)果表明，各處理對(duì)試管苗的有效莖節(jié)數(shù)均有促進(jìn)作用， 在 0～15 mmol/L 的 Ca （NO3）2濃度范圍內(nèi)，試管苗的有效莖節(jié)數(shù)隨Ca（NO3）2濃度增加而增加，在 15～20 mmol/L 的 Ca（NO3）2濃度范圍內(nèi)有效莖節(jié)數(shù)有所下降，但仍要優(yōu)于10 mmol/L，所以15 mmol/L的Ca（NO3）2濃度是對(duì)馬鈴薯品種尤金脫毒試管苗有效莖節(jié)數(shù)最有利的，其次是20 mmol/L和10 mmol/L，CK的表現(xiàn)最差。在7 d時(shí)各處理的有效莖節(jié)數(shù)差異不明顯，在 14 ，21，28 d時(shí)，處理 4，5的有效莖節(jié)數(shù)較處理1（CK）差異顯著，分別達(dá)到了95.4%，169%和 90.7%，并且 21 d 較 14 d 時(shí)增長(zhǎng)較快 （1.4～2.7 節(jié)），28 d 較 21 d 增長(zhǎng)變慢 （0.5～1.0節(jié)），說(shuō)明在試管苗的有效莖節(jié)數(shù)方面，21 d時(shí)達(dá)到生長(zhǎng)高峰。

2.2 Ca（NO3）2對(duì)試管苗株高的影響

由表2可以看出，隨鈣濃度的增加，各處理的試管苗株高也隨之增加，處理 2、3、4、5比處理 1（即CK）在 7 d 時(shí)分別提高了 10.7%，26.7%，36%，32%；在 14 d 分別提高了 46.7%，55.3%，143.3%，104%；在 21 d 時(shí) 分 別 提 高 了 16.4% ，51.4% ，183.2% ，153.6% ； 在 28 d 分 別 提 高 了 1.97% ，3.93% ，154.51%，142.42%。

表1 不同濃度的Ca（NO3）2對(duì)試管苗有效莖節(jié)數(shù)、株高、莖粗的影響

結(jié)果表明，不同濃度的 Ca（NO3）2處理對(duì)脫毒試管苗株高生長(zhǎng)均有一定的促進(jìn)作用，在0～15 mmol/L 的 Ca（NO3）2濃度范圍內(nèi)，試管苗的株高隨Ca （NO3）2濃度增加而增加， 在 15～20 mmol/L 的Ca（NO3）2濃度范圍內(nèi)有所下降，但仍要優(yōu)于10 mmol/L，所以 15 mmol/L 的 Ca（NO3）2濃度是對(duì)馬鈴薯尤金脫毒試管苗株高生長(zhǎng)最有利的，其次是20 mmol/L和10 mmol/L，CK的表現(xiàn)最差。各處理在7 d時(shí)差異均不明顯，從14 d開(kāi)始，各處理的株高出現(xiàn)差異。 在14 d，21 d，28 d，處理 1，2，3 與處理 4，5 差異較顯著；處理4的表現(xiàn)要優(yōu)于處理5；7，14 d時(shí)生長(zhǎng)較慢，21 d時(shí)生長(zhǎng)較快，28 d時(shí)生長(zhǎng)變慢，即15 mmol/L的Ca（NO3）2濃度對(duì)馬鈴薯品種尤金脫毒試管苗的株高生長(zhǎng)最有利，21 d時(shí)試管苗的株高生長(zhǎng)達(dá)到高峰。

表2 不同濃度的Ca（NO3）2對(duì)試管苗鮮質(zhì)量、干質(zhì)量的影響

表3 不同濃度的Ca（NO3）2對(duì)試管苗根數(shù)、葉片數(shù)的影響

2.3 Ca（NO3）2對(duì)試管苗莖粗的影響

由表1可以看出，隨鈣濃度的增加，各處理試管苗莖粗也隨之增加，在7 d時(shí)處理2，3，4，5比處理1（即 CK）分別提高了 26.7%，26.7%，21.7%，8.3%；在14 d時(shí)分別提高了33.3%，34.8%，18.2%，10.6%；在21 d時(shí)分別提高了 8.6%，20%，50%，45.7%；在 28 d時(shí)分別提高了 10.8%，21.6%，51.4%，41.9%。

結(jié)果表明，不同濃度的Ca（NO3）2處理對(duì)試管苗的莖粗也有一定的影響，在生長(zhǎng)的初期即7 d和14 d時(shí)，各處理差異不顯著；21 d時(shí)各處理開(kāi)始出現(xiàn)顯著差異，處理 4、5要顯著優(yōu)于處理 1（即CK）；28 d時(shí)各處理的平均莖粗值為處理4＞處理5＞處理2＞處理 3＞處理 1，說(shuō)明 15 mmol/L 的 Ca（NO3）2濃度對(duì)馬鈴薯品種尤金脫毒試管苗的莖粗有利，其次為20 mmol/L。但28 d時(shí)各處理較21 d時(shí)各處理增長(zhǎng)減緩。

2.4 Ca（NO3）2對(duì)試管苗干鮮質(zhì)量的影響

由表2可以看出，隨鈣濃度的增加，各處理試管苗鮮質(zhì)量也隨之增加，在7 d時(shí)處理2，3，4，5比處理 1（即 CK）分別提高了 12.3%，20.5%，26.7%，15.1%；在14 d分別提高了11.9%，15.6%，109.4%，107.2%；在21 d分別提高了10.5%，15.6%，79.7%，79.7%；在28 d時(shí)分別提高了 2.2%，58.4%，365.4%，172.4%。各處理試管苗的干質(zhì)量與鮮質(zhì)量表現(xiàn)類似，隨鈣濃度的增加也呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)，在7 d時(shí)處理2，3，4，5 比處理 1（即 CK）分別提高了5.9%，23.5%，29.4%，11.8%；在 14 d分別提高了 50%，95.8%，104.2%，120.8%；在 21 d分別提高了 26.2%，71.4%，80.9%，69.0%；在 28 d分別提高了4.8%，22.2%，46.0%，36.5%。

結(jié)果表明，不同濃度的Ca（NO3）2處理對(duì)試管苗的干質(zhì)量和鮮質(zhì)量也有一定的促進(jìn)作用。在7 d時(shí)各處理差異不大，在14 d和21 d時(shí)，試管苗的鮮質(zhì)量和干質(zhì)量均表現(xiàn)為處理4、5顯著大于處理 1、2、3；28 d 時(shí)鮮質(zhì)量除處理1與處理2差異不顯著外，其余處理間差異均顯著；干質(zhì)量處理4，5顯著大于處理1，2，3；其余處理間差異不顯著。說(shuō)明15 mmol/L的Ca（NO3）2濃度對(duì)馬鈴薯品種尤金脫毒試管苗的干鮮質(zhì)量的影響是有利的，其次為20 mmol/L。

2.5 Ca（NO3）2對(duì)試管苗根數(shù)的影響

由表3可以看出，隨鈣濃度的增加，各處理試管苗根數(shù)也呈現(xiàn)增多的趨勢(shì)，在7 d時(shí)處理2，3，4，5 比處理 1（即 CK）分別提高了 0，0，57.6%，42.4%；在14 d分別提高了0，103%，406%，606%；在 21 d時(shí)分別提高了 54.7%，94.2%，365.1%，327.9%；在 28 d時(shí)分別提高了 25.6%，50.4%，225.6%，199.2%。

結(jié)果表明，不同濃度的Ca（NO3）2處理對(duì)試管苗的根數(shù)有一定的影響。各處理在7 d時(shí)差異不顯著，14 d時(shí)處理4，5與處理1，2差異顯著，處理3與處理1，2，4差異不顯著，與處理5差異顯著；21 d時(shí)平均根數(shù)除處理4與5、處理2與3差異不顯著外，其余處理間差異顯著；28 d時(shí)處理1、2、3與4、5差異顯著。處理4、5在21 d和28 d時(shí)根數(shù)均顯著多于處理1；28 d與21 d各處理相比根數(shù)增長(zhǎng)不大。 說(shuō)明 15，20 mmol/L 的 Ca（NO3）2濃度對(duì)馬鈴薯品種尤金脫毒試管苗的根數(shù)有利，15 mmol/L要優(yōu)于20 mmol/L。

2.6 對(duì)試管苗葉片數(shù)的影響

由表3可以看出，隨鈣濃度的增加，各處理試管苗葉片數(shù)也呈現(xiàn)增多的趨勢(shì)，在7 d時(shí)處理2，3，4，5 比處理 1 （即 CK） 分別提高了 14.6%，28.8%，28.8%，14.6%；在 14 d 時(shí)分別提高了 7.9%，7.9% ，130.9% ，84.8% ； 在 21 d 時(shí) 分 別 提 高 了17.6%，46.9%，194%，162.6%；在 28 d 時(shí)分別提高了 11.6%，58.7%，119.8%，111.6%。

結(jié)果表明，培養(yǎng)基中加入不同濃度的Ca（NO3）2處理對(duì)試管苗的葉片數(shù)產(chǎn)生一定的影響。在7 d時(shí)各處理的葉片數(shù)差異不明顯，在14 d、21 d、28 d三個(gè)時(shí)期處理4、5的葉片數(shù)要顯著多于處理1、2、3，處理4（即15 mmol/L）的葉片數(shù)在這三個(gè)時(shí)期均優(yōu)于處理5，但與處理5差異不顯著。

3 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，培養(yǎng)基中添加不同Ca（NO3）2處理后，處理4、5有效莖節(jié)數(shù)、株高、干鮮質(zhì)量、根數(shù)、葉片數(shù) 6個(gè)指標(biāo)均與處理 1、2、3在 14 d、21 d、28 d時(shí)有顯著差異，而莖粗在21 d和28 d時(shí)處理4、5與處理1、2、3有顯著差異。說(shuō)明適當(dāng)提高培養(yǎng)基中的鈣離子濃度有利于試管苗的生長(zhǎng)，這與前人的研究結(jié)果[9～10]相似，但由于馬鈴薯的種間差異，適宜的鈣離子濃度也會(huì)有差異。雖然處理4與處理5各指標(biāo)差異不明顯，但各個(gè)指標(biāo)的均值處理4均要大于處理5， 即15 mmol/L的 Ca（NO3）2處理要優(yōu)于20 mmol/L的處理。因此，在培養(yǎng)基中添加15 mmol/L的Ca（NO3）2對(duì)馬鈴薯尤金試管苗的增殖壯苗有重要作用。

各處理在7 d時(shí)差異均不明顯，到14 d時(shí)開(kāi)始表現(xiàn)差異，并在14～21 d這段時(shí)間迅速生長(zhǎng)，21～28 d生長(zhǎng)減緩，表現(xiàn)試管苗的生長(zhǎng)趨勢(shì)為慢-快-慢。因此，在21 d左右時(shí)即可進(jìn)行擴(kuò)繁，縮短繼代周期。

綜上所述，培養(yǎng)基中加入15 mmol/L的Ca（NO3）2對(duì)馬鈴薯試管苗的生長(zhǎng)具有顯著的促進(jìn)作用，因此，在培養(yǎng)基中加入鈣來(lái)促進(jìn)馬鈴薯脫毒試管苗生長(zhǎng)是完全可行的。方法簡(jiǎn)便易行，只需在配制培養(yǎng)基時(shí)加入即可。但由于馬鈴薯的品種、產(chǎn)地不同，其有效的鈣種類和濃度也可能不同，所以，該試驗(yàn)結(jié)果和方法僅供參考，具體使用時(shí)，為避免以上原因帶來(lái)的差異，最好針對(duì)特定馬鈴薯品種研究相應(yīng)濃度配方，做預(yù)備試驗(yàn)加以檢驗(yàn)。

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