大白菜黑腐病鑒定的濕度試驗(yàn)及其苗期與成株期抗病性的相關(guān)分析

翟文慧 張濤濤 胡 俊 張鳳蘭 嚴(yán) 紅*

（1內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特 010018；2北京市農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)與環(huán)境保護(hù)研究所，北京 100097；3北京市農(nóng)林科學(xué)院蔬菜研究中心，北京 100097）

大白菜黑腐病是由野油菜黃單胞桿菌野油菜致病變種〔Xanthomonas campestrispv. campestris（Pam.）Dowson〕（Williams et al.，1972）引起的。1973年美國各地大規(guī)模發(fā)生該病，在生產(chǎn)上造成了嚴(yán)重?fù)p失（Williams，1980）。我國20世紀(jì)70年代就對此病有過報(bào)道（李明遠(yuǎn)，2004），近年來，黑腐病在大白菜上的為害日益嚴(yán)重，在全國范圍內(nèi)均有不同程度的發(fā)生。該病在大白菜苗期和成株期均可侵染發(fā)生。在黑腐病的防治中，選用抗病品種是一個(gè)經(jīng)濟(jì)安全的方法。在抗病育種過程中，對所選材料進(jìn)行抗病性鑒定是必不可少的，鑒于苗期鑒定主要在室內(nèi)進(jìn)行，需要的空間面積小，溫濕條件較易控制，且周期短、速度快，可節(jié)省大量人力物力（丁萬霞 等，2000；龔靜等，2001）。室內(nèi)苗期人工接種鑒定大白菜黑腐病抗性目前已被廣泛采用（解永梅 等，2007；蘆燕和張魯剛，2008）。但是由于大白菜黑腐病菌可在大白菜任何生長期進(jìn)行侵染，造成大白菜發(fā)病，而苗期和成株期對黑腐病的抗性是否一致，目前未見相關(guān)的報(bào)道。Bandyopadhyay和Chattopadhyay（1985）認(rèn)為，黑腐病抗性作用點(diǎn)可能在水孔區(qū)域，說明濕度對大白菜黑腐病的發(fā)生有很大的影響。本試驗(yàn)在苗期人工接種采用7種不同的保濕方法，從中選出使大白菜對黑腐病的抗性表現(xiàn)最為充分的保濕條件，并對不同抗病性的大白菜品種進(jìn)行苗期和成株期病情指數(shù)間的相關(guān)性分析，以確立苗期人工接種黑腐病進(jìn)行品種抗病性鑒定的可靠性，為大白菜抗病育種和生產(chǎn)上篩選抗病品種提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試大白菜品種為北京大牛心（中熟，合抱二牛心類型）、北京新1號（晚熟，大青葉類型）、北京新4號（晚熟，大青葉類型）、京翠70號（中熟，青麻葉類型）、京翠60號（早熟，青麻葉類型）和京秋 65號（中熟，疊抱平頭類型），均由北京市農(nóng)林科學(xué)院蔬菜研究中心提供。北京新 1號為抗病對照，北京大牛心為感病對照。播種前將供試材料的種子在 50 ℃熱水中浸泡10 min消毒（李樹德，1995）。

黑腐病病原采自北京市農(nóng)林科學(xué)院蔬菜研究中心自然發(fā)病的大白菜上，經(jīng)北京市農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)與環(huán)境保護(hù)研究所植物病害綜合研究室鑒定為Xanthomonas campestrispv. campestris。

1.2 方法

1.2.1 苗期抗病性鑒定

1.2.1.1 接種及保濕方法 苗期人工接種方法參考嚴(yán)紅等（2001）的方法，在4～5片真葉時(shí)，用噴霧法接種，接菌濃度為1.0×108pfu·m L-1，均勻噴灑到葉片上，以葉片布滿菌液但無水滴滴落為度。接種材料有北京大牛心、北京新4號和北京新1號，接種保濕采用7種不同處理方法。處理1，不保濕，不接種；處理2，接種前保濕12 h，接種后保濕24 h；處理3，接種前保濕12 h，接種后保濕48 h；處理4，接種前不保濕，接種后保濕24 h；處理5，接種前不保濕，接種后保濕48 h；處理6，接種前保濕12 h，接種后不保濕；處理7，接種前不保濕，接種后也不保濕。每處理15株，3次重復(fù)，室內(nèi)相對濕度40.33 %，保濕罩內(nèi)相對濕度92 %～100 %，接種后14 d進(jìn)行調(diào)查。

1.2.1.2 苗期抗病性鑒定 苗期人工接種鑒定方法參考1.2.1.1，保濕方法采用處理4（接種前不保濕，接種后保濕24 h），大白菜品種為北京大牛心、北京新1號、北京新4號、京翠70號、京翠60號和京秋65號。

1.2.2 成株期抗病性鑒定 將6個(gè)大白菜品種在溫室育苗，14 d后種植于網(wǎng)室內(nèi)，每個(gè)品種10株，4次重復(fù)。結(jié)球期人工接種黑腐病菌，接種方法同1.2.1.1，接種后保濕24 h，14 d后進(jìn)行調(diào)查。

1.3 病害調(diào)查分級及抗性歸類標(biāo)準(zhǔn)

依據(jù)《國家“九五”科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目專題驗(yàn)收報(bào)告》中總結(jié)制定的標(biāo)準(zhǔn)并加以改良進(jìn)行病情分級和抗病性歸類。

苗期病情分級標(biāo)準(zhǔn)：0級，無病癥；1級，水孔處有黑色枯死點(diǎn)，無擴(kuò)展；3級，病斑從水孔向外擴(kuò)展，占葉面積5.0 %以下；5級，病斑從水孔向外擴(kuò)展，占葉面積5.1 %～25.0 %；7級，病斑從水孔向外擴(kuò)展，占葉面積25.1 %～50.0 %；9級，病斑從水孔向外擴(kuò)展，占葉面積50.1 %以上。

成株期病情分級標(biāo)準(zhǔn)：0級，無病癥；1級，1～3片外葉有1～2個(gè)病斑；3級，1～3片外葉有多個(gè)病斑；5級，50 %的外葉有病斑；7級，50 %以上的外葉有病斑，并且病斑沿葉脈擴(kuò)展至莖部；9級，病斑擴(kuò)展至根莖部，整個(gè)植株死亡。

抗病性歸類標(biāo)準(zhǔn)：免疫（I），病情指數(shù)0；高抗（HR），病情指數(shù)0.01～11.11；抗?。≧），病情指數(shù)11.12～33.33；耐?。═），病情指數(shù)33.34～55.55；感病（S），病情指數(shù)55.56～77.77；高感（HS），病情指數(shù)77.78～100.00。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用DPS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理、回歸分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 苗期人工接種處理中保濕對大白菜抗病性的影響

大白菜苗期人工接種黑腐病菌時(shí)不同保濕處理的病情指數(shù)、抗性分類及其方差分析見表1。

表1 苗期病情指數(shù)、方差分析及抗性分類

由表1可知，北京新1號、北京大牛心和北京新4號在處理3下發(fā)病最嚴(yán)重，極顯著高于其他處理；處理4和處理5差異不顯著。不同品種間對大白菜黑腐病的抗性程度差異明顯，北京新1號最抗病，病情指數(shù)為3.46～31.29，在高抗和抗病之間；北京大牛心和北京新4號都較感病，病情指數(shù)為12.98～66.91，在感病和抗病之間。

由圖 1、2可知，接種前后不同保濕處理下，大白菜苗期抗病性差異顯著，其中接種前保濕時(shí)間對大白菜的黑腐病抗性影響不大；接種后保濕24 h與保濕48 h對大白菜發(fā)病情況影響不大；接種后是否保濕對病情的發(fā)展影響最大，是保證抗病性鑒定結(jié)果準(zhǔn)確可靠的關(guān)鍵因素。

圖1 接種前不保濕，接種后不同保濕時(shí)間對大白菜發(fā)病的影響

圖2 接種前保濕12 h，接種后不同保濕時(shí)間 對大白菜發(fā)病的影響

2.2 苗期與成株期抗病性的相關(guān)性

北京大牛心、北京新1號、北京新4號、京翠70號、京翠60號和京秋65號成株期和苗期（接種前不保濕，接種后保濕24 h）的病情指數(shù)見表2。

表2 6個(gè)大白菜品種苗期和成株期的病情指數(shù)

表3 6個(gè)大白菜品種苗期和成株期病情指數(shù)的方差分析

回歸方程：Y=2.781 4+0.888 3X；相關(guān)系數(shù)R=0.961；t測驗(yàn)：t=6.95＞t0.01,5=4.032；F測驗(yàn)：F=48.234 8＞F0.01。

依據(jù)t測驗(yàn)和F測驗(yàn)得出苗期人工接種的病情指數(shù)和成株期的病情指數(shù)有真實(shí)直線回歸關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.961，說明利用苗期人工接種方法來鑒定大白菜品種的黑腐病抗性是準(zhǔn)確可靠的。

3 結(jié)論與討論

北京大牛心、北京新1號、北京新4號、京翠70號、京翠60號和京秋65號均為栽培品種，追蹤多年來在生產(chǎn)中對黑腐病的抗感表現(xiàn)，與本試驗(yàn)苗期和成株期人工接種鑒定的抗感類型一致，北京新1號、京翠70號、京翠60號和京秋65號表現(xiàn)為抗病，而北京大牛心和北京新4號在秋季降雨次數(shù)多的年份表現(xiàn)為感病。

大白菜黑腐病苗期人工接種鑒定保濕方法試驗(yàn)表明，大白菜品種間對黑腐病的抗性存在顯著差異，無論怎樣調(diào)整保濕時(shí)間，北京新1號的抗病性始終保持在高抗和抗病之間，為抗病品種，而北京大牛心和北京新4號的抗病性會(huì)因保濕時(shí)間的長短在感病和抗病之間變化，只要接種后保濕即表現(xiàn)為感病或耐病，雖然幾種處理按病情指數(shù)被劃分為不同的等級，但方差分析結(jié)果顯示差異并不顯著，因此認(rèn)為這兩個(gè)品種均為對黑腐病感病的品種。

本試驗(yàn)還表明濕度對大白菜黑腐病抗性有很大的影響，接種后是否保濕對病情的發(fā)展影響最明顯，是保證抗病性鑒定結(jié)果準(zhǔn)確可靠的關(guān)鍵因素。這一結(jié)果與Bandyopadhyay和Chattopadhyay（1985）認(rèn)為黑腐病抗性作用點(diǎn)可能在水孔區(qū)域的論點(diǎn)相吻合，也與肖崇剛（1994）在研究甘藍(lán)黑腐病苗期鑒定方法時(shí)，得出噴霧接種后發(fā)病程度與保濕有關(guān)的報(bào)道一致，但肖崇剛的方法在噴霧后只保濕了12 h，而本試驗(yàn)保濕時(shí)間為24 h及48 h，至于12 h的保濕時(shí)間是否能使不同抗性的大白菜品種充分發(fā)病，則有待進(jìn)一步研究。

對苗期和成株期人工接種大白菜黑腐病菌后的病情指數(shù)進(jìn)行回歸分析，結(jié)果表明苗期和成株期人工接種鑒定的病情指數(shù)間有真實(shí)直線回歸關(guān)系（R=0.961），說明利用苗期人工接種的方法來鑒定大白菜對黑腐病的抗性是可靠的，而采用苗期人工接種鑒定的方法周期短、速度快，可節(jié)省大量人力物力，在大白菜抗病性育種中可簡化選育程序、縮短育種年限，對加快抗病育種進(jìn)程有重要意義。

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