復(fù)方甘草酸苷片的質(zhì)量標(biāo)準研究

陳傳瑩 單 亮 李 強

復(fù)方甘草酸苷片（商品名：美能）是由甘草酸單銨鹽、甘氨酸、DL-蛋氨酸組成的復(fù)方制劑，于1948年在日本上市，現(xiàn)主要用于治療慢性肝病，改善肝功能異常[1]，療效確切，臨床應(yīng)用多年。從傳統(tǒng)中藥材甘草中可提取得到甘草酸，再經(jīng)成鹽可制備得甘草酸單銨鹽，長期以來被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品和化妝品等領(lǐng)域，對其臨床以及其他用途的安全性檢驗已獲得FDA的認可[2]，國家標(biāo)準中規(guī)定甘草酸單銨鹽的含量為73.0%。為保證本制劑批間質(zhì)量的一致性和安全性，進行質(zhì)量標(biāo)準考察實驗。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津（泵LC-10AT；檢測器SPD-10A）HPLC，浙大N-2000色譜工作站；色譜柱：Kromasil 100A C18柱，規(guī)格250mm×4.6mm（Dikma公司生產(chǎn)）；ZRS-8G智能溶出試驗議（天津大學(xué)無線電廠）。

1.2 供試樣品

復(fù)方甘草酸苷片（規(guī)格：甘草酸單銨25mg、甘氨酸25mg、蛋氨酸25mg；批號：20041215、20041219、20041223）。

1.3 對照品

甘草酸單銨（批號：20040811，由甘草酸單銨原料精制而成，含量為99.05%，有關(guān)物質(zhì)為0.57%）。

1.4 復(fù)方甘草酸苷片上市樣品

復(fù)方甘草酸苷片（規(guī)格：甘草酸單銨25mg、甘氨酸25mg、蛋氨酸25mg；進口藥品注冊證號：H20030184；生產(chǎn)批號：2004018；生產(chǎn)單位：日本美能發(fā)源制藥公司（Minophagen Pharmaceutical Co.，Ltd）。

2 含量測定

2.1 甘草酸苷

2.1.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil 100A C18柱，規(guī)格250mm×4.6mm（Dikma公司生產(chǎn)）；以2%的醋酸-乙腈=65∶35為流動相；檢測波長為254nm；流速：1.0mL/min；進樣量20μL[3,4]。

2.1.2 測定方法

取本品20片，研細，精密稱取適量(約相當(dāng)于甘草酸苷25mg)，置50mL量瓶中，加水溶解后并稀釋至刻度，搖勻，放置30min后，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取經(jīng)105℃干燥至恒重的甘草酸單銨對照品（以甘草酸苷計）適量，精密稱定，同法制成每1mL中約含500μg的溶液作為對照品溶液，精密量取上述兩種溶液各20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積，按外標(biāo)法以峰面積計算即得，色譜圖見圖1。

2.1.3 標(biāo)準曲線

取甘草酸單銨對照品以甘草酸苷計適量，用水制成每1mL中各含80、160、320、480、800μg的溶液，分別量取20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以進樣濃度（C）為橫坐標(biāo)，甘草酸單銨峰峰面積（S）為縱坐標(biāo)，計算直線回歸方程，繪制標(biāo)準曲線。結(jié)果表明，在76.8～796.2μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系符合要求。

2.1.4 溶液穩(wěn)定性試驗

照含量測定項下方法配制供試品溶液，于室溫下自然放置，分別于0、2、4、8、12h進樣，測定甘草酸苷峰面積，計算日內(nèi)溶液的穩(wěn)定性。RSD為0.9%，供試品溶液在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.1.5 重現(xiàn)性試驗

取同一批號樣品，分別稱取適量（約相當(dāng)于甘草酸苷25mg）5份，精密稱定，置50mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液，照含量測定項下的方法測定。RSD為2.30%，本法的重現(xiàn)性符合要求。

2.1.6 加樣回收率

按處方量的80%、100%、120%稱取甘草酸單銨（以甘草酸苷計）對照品各兩份，精密稱定，分置100mL量瓶中，并同時稱取處方量的空白輔料分置量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品。另精密稱取甘草酸單銨對照品（以甘草酸苷計）適量，同法溶解并稀釋成每1mL中約含500μg的溶液作為對照品溶液。照含量測定方法測定，按外標(biāo)法以峰面積計算回收率[5]。結(jié)果平均回收率為98.74%，RSD為0.9%，符合要求。

2.1.7 三批樣品及上市樣品含量測定

取本品及上市樣品各20片，除去包衣后，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當(dāng)于甘草酸苷25mg），置100mL量瓶中，加水適量，振搖使溶解，并加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取經(jīng)105℃干燥至恒重的甘草酸單銨對照品（以甘草酸苷計）適量，精密稱定，同法制成每1mL中約含500μg的溶液作為對照品溶液，分別量取供試品溶液與對照品溶液各20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算，即得[6]。本品3批復(fù)方甘草酸苷片及市售復(fù)方甘草酸苷片的含量測定，結(jié)果見表1。

表1 含量測定結(jié)果

參照以上結(jié)果，將復(fù)方甘草酸苷片的含量限度訂為”本品含甘草酸苷（C42H62O16）應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%～110.0%”。

2.2 蛋氨酸

2.2.1 測定法

取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當(dāng)于蛋氨酸25mg），置250mL碘瓶中，加水25mL使溶解，再加碘化鉀4g，磷酸鹽緩沖液（磷酸氫二鉀61g，磷酸二氫鉀20.4g，加水溶解并稀釋至500mL，pH=7.0）5mL，精密加入碘滴定液（0.1mol/L）5mL，密塞，搖勻，在暗處放置30min，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍色消失，并將滴定液的結(jié)果用空白試驗校正。每1mL的硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于7.461mg的C5H11NO2S 。

2.2.2 重現(xiàn)性試驗

精密稱取本品適量（約相當(dāng)于蛋氨酸25mg）6份，分別置100mL量瓶中，照含量測定方法測定含量。RSD為0.50%，重現(xiàn)性符合要求。

2.2.3 回收率

取蛋氨酸約20、25、30mg各兩份，精密稱定，同時稱取處方量除蛋氨酸外其他成分，分置100mL量瓶中，照含量測定方法測定，計算回收率。平均回收率為99.78%，RSD為0.75%，回收率符合要求。

2.2.4 三批樣品及上市樣品的含量測定

取樣品及上市樣品，照含量測定方法測定含量，結(jié)果見表2。

表2 含量測定結(jié)果

參照以上結(jié)果，將本品的蛋氨酸含量限度訂為：“含蛋氨酸（C5H11NO2S）應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%～110.0%?！?/p>

2.3 甘氨酸

2.3.1 測定方法

精密稱取本品適量（約相當(dāng)于甘氨酸25mg），置100mL量瓶中，加入1mol/L鹽酸溶液5mL，放置15min，加水至刻度，搖勻，濾過，精密量取10mL，加甲基紅指示液1滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定至黃色，再加中性甲醛溶液（對酚酞指示液顯中性）10mL，振搖，放置10分鐘，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，近終點，加酚酞指示液1mL，繼續(xù)滴定至溶液呈橘紅色，并將滴定液的結(jié)果用空白試驗校正。每1mL的氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于7.507mg的C2H5NO2。

2.3.2 重現(xiàn)性試驗

精密稱取本品適量（約相當(dāng)于甘氨酸25mg）6份，分別置100mL量瓶中，照含量測定方法測定含量，RSD為0.39%，重現(xiàn)性符合要求。

2.3.3 回收率

取甘氨酸約20、25、30mg各兩份，精密稱定，同時稱取處方量除甘氨酸外其他成分分置100mL量瓶中，照含量測定方法測定，計算回收率為99.64%，RSD為0.29，符合要求。

2.3.4 三批樣品的含量測定

取樣品及市售復(fù)方甘草酸苷片，照含量測定方法測定含量，結(jié)果見表3。

表3 含量測定結(jié)果

參照以上結(jié)果，將本品的甘氨酸含量限度訂為：“含甘氨酸（C2H5NO2） 應(yīng)為標(biāo)示量的 90.0%～110.0%。

3 討 論

本試驗提供了一個可行的測定及評價復(fù)方甘草酸苷片質(zhì)量標(biāo)準的方法，建立了在同一系統(tǒng)使用性條件下對復(fù)方甘草酸苷片中3種主成分進行含量測定，操作簡便、準確、重復(fù)性好，各組分分離完全，可有效控制復(fù)方甘草酸苷片的質(zhì)量。三組分含量測定結(jié)果表明：實驗藥品的處方合理，工藝穩(wěn)定，含量符合《中國藥典》2005版的要求。

[1]He GX.Clinical therapeutic observation of Kushenin Plus compound Glycyrrhizin in the treatment of chronic type B hepatitis China[J].J Chin Mater Med,2008,33(4):443-444.

[2]Qu ZT,Xiang ZB.Advances in pharmacological action of glycyrrhizin[J]. Lishizhen Med Mater Med Res,2007,18(10):2568.

[3]Tian L,Gao XL. Study on the dissolution of compound Glycyrrhizin tablets[J]. Chin JMAP,2009,26(6):471-474.

[4]Fu YH.Determination of ammonium glycyrrhizinate in compound glycyrrhizin injection by HPLC[J]. Chin Tradit Patent Med,2006,28(6):913-914.

[5]Li YF,Li ZH,Zhu ZH.HPLC determination of glycyrrhizic acid in Chenxianglubailu tablets[J].Chin J Pharm Anal,2008,28(2):304-305.

[6]Chen CY,Shan L,Li Q. Determination of dissolution of compound Glycyrrhizin tablets by HPLC[J].Chin JMAP,2009,26(7):598-601.