乙肝表面抗原弱陽性及少見模式的臨床標本在2種檢測法下的對比分析

張立軍 劉艾琴

518020 暨南大學第二臨床學院深圳市人民醫(yī)院檢驗科(張立軍 劉艾琴)

乙肝五項Els法(酶聯(lián)免疫吸附試驗)檢測是各大醫(yī)療機構(gòu)進行乙肝診斷常用的檢測方法，簡單快捷，靈敏度和重復性好，而且價格便宜，適宜大批標本檢測，但它也有不足。本文從我院31200份檢測中篩出242份標本結(jié)合羅氏電化學發(fā)光定量法進行分析如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源

從我院2007年4月1日～2008年3月31日檢測的門診和住院以及體檢標本中，篩出弱陽性結(jié)果和少見模式結(jié)果共計242例進行分析。其中弱陽性110例，少見模式132例。

1.2 儀器

多功能自動酶標洗板機PW-960；Elx800酶標儀 37℃溫箱；離心機；羅氏電化學發(fā)光儀E170。

1.3 試劑

科華公司立可讀乙肝檢測試劑盒 ；羅氏電化學發(fā)光乙肝檢測試劑盒。

1.4 方法與檢測 242例標本來源于我院日常檢測工作。每天由具有檢驗技術(shù)資質(zhì)人員，嚴格按實驗的操作規(guī)程，認真完成。檢驗結(jié)果須由另外檢驗技術(shù)人員檢查并簽發(fā)報告。對有疑問結(jié)果，認真記錄并留取標本與隔天進行定量檢測并分析。

2 結(jié)果

2.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(Els法)

HBsAg、HBsAb、HBeAg采用雙抗體夾心法測定，嚴格按實驗的操作規(guī)程，使用Elx800酶標儀讀板。結(jié)果判斷：樣品OD值/陰性對照平均OD值≥2.1判斷為陽性，否則為陰性。陰性對照OD值低于0.05以0.05計算，高于0.05按實際OD值計算。HBeAb、HBcAb采用競爭法測定，嚴格按實驗的操作規(guī)程，Elx800酶標儀讀板。結(jié)果判斷：Cutoff Value計算，COV=(陰性對照平均OD值+陽性對照平均OD值)/2。樣本OD值≥COV為陰性，樣本OD值 ≤COV為陽性。

羅氏電化學發(fā)光法：HBsAg陽性≥0.9COI、HBsAb陽性≥10IU/L、HBeAg陽性≥1COI、HBeAb、HBcAb陽性≤1COI。

2.2 31200例標本中共分離出弱陽性110例(Els法)

HBsAg的OD值在0.115～0.315之間。用羅氏電化學發(fā)光法定量檢測，HBsAg陽性90例，符合率為81.8%。110例HBsAg弱陽性結(jié)果(Els法)中，以HBsAg、HBeAb、HBcAb陽性和HBsAg、HBcAb陽性標本占大多數(shù)，共83例。與羅氏電化學發(fā)光法定量檢測的符合率分別為94.0%和81.2%。110例HBsAg弱陽性結(jié)果(Els法)中，單獨測得HBsAg陽性的標本有25例，與羅氏電化學發(fā)光法定量檢測的符合率為48.0%。另外有2例Els法測得HBsAg陰性而羅氏電化學發(fā)光法定量檢測陽性的標本(見表1)。

2.3 31200例標本中共分離出少見模式共篩出132例HBsAg和HBsAb同時陽性有95例，其中最多例數(shù)的是HBsAg、HBsAb、HBcAb陽性標本和HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBcAb陽性，分別為32例和29例。與羅氏電化學發(fā)光法定量檢測的符合率分別為21.9%和13.8%。HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBcAb陽性標本和HBsAg、HBsAb陽性，分別為17例。HBeAg與HBeAb共同陽性9例。另外有1例HBsAb與HBeAg共同陽性，羅氏電化學發(fā)光法再檢測也為陽性。后查實為新生兒免疫球蛋白治療患兒。其它少見模式未見相符。總符合率為10.6%(見表2)。

表1 110例HBsAg弱陽性標本Els法和電化學發(fā)光法檢測對比

表2 132例少見模式的標本Els法和電化學發(fā)光法檢測對比

3 討論

在乙肝檢測中HBsAg的檢測是重點，也是一個容易引發(fā)病人投訴的項目。由于價格成本和儀器設(shè)備等的原因，我國檢測乙肝多用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Els法)，這就導致檢驗中經(jīng)常出現(xiàn)多種不好與病人和醫(yī)生解釋的結(jié)果。

HBsAg主要以22nm的小球形顆粒形式存在，小球形顆粒由100個HBsAg單體組成[1]。每個單體由226個氨基酸殘基構(gòu)成，99～160位氨基酸構(gòu)成了HBsAg主要親水區(qū)(Major hydrophilic region， MHR)。由124～147位氨基酸構(gòu)成特定空間構(gòu)型的“a”決定族，是HBsAg刺激B細胞產(chǎn)生抗體與之結(jié)合的表位。所有血清型HBsAg 都有共同“a”決定族[2]。“a”決定族此區(qū)高度保守，目前人們公認“a”決定族是與HBsAb結(jié)合的關(guān)鍵性位點。此處個別氨基酸的變異足以改變其抗原性和免疫應(yīng)答，導致HBsAg和HBsAb共存的少見模式出現(xiàn)。

對HBsAg的定性檢測我國已有多個廠家試劑，檢測靈敏度多為0.5ng/ml。有資料顯示目前國內(nèi)主要8種試劑盒檢測變異的HBsAg能力各不相同(18種變異)，總體漏檢率為16.7%～44.4%[3]。HBV突變導致常規(guī)試劑檢測A值降低[4]，是造成檢測能力下降原因。我院110例弱陽性結(jié)果(Els法)再用羅氏電化學發(fā)光法定量檢測，結(jié)果一致為90例,符合率為81.8%，羅氏電化學發(fā)光法定量試劑檢測靈敏度為0.05ng/ml。得到81.8%的數(shù)據(jù),與彭靜等[5]的41份弱陽性標本用雅培試劑定量檢測得到的79.59%數(shù)據(jù)相近。因此用定性試劑(Els法)檢測HBsAg，出假陽性結(jié)果幾率大于定量試劑(羅氏電化學發(fā)光法)。這與試劑本身質(zhì)量和檢驗操作流程有關(guān)。

大多數(shù)HBV感染血清中HBsAg含量在5ng/ml～600μg/ml之間，100μg/ml以上常同時檢測出HBeAg。我院110例HBsAg弱陽性結(jié)果(Els法)中，以HBsAg、HBeAb、HBcAb陽性和HBsAg、HBcAb陽性標本占大多數(shù)，共83例。與羅氏電化學發(fā)光法定量檢測的符合率分別為94.0%和81.2%。110例HBsAg弱陽性結(jié)果(Els法)中，單獨測得HBsAg陽性的標本有25例，與羅氏電化學發(fā)光法定量檢測的符合率為48.0%。從數(shù)據(jù)可看出單獨測得HBsAg陽性的標本(Els法)中有一半是假陽性。因此在目前的醫(yī)療環(huán)境下為病人單測一項HBsAg是非常不可取的。病人感染后，臨床癥狀出現(xiàn)前6～8周可檢測出HBsAg，癥狀初期HBsAg濃度最高。如果無并發(fā)癥出現(xiàn)，HBV感染后3～4月將檢測不到HBsAg。如果6個月后HBsAg仍為陽性(占感染患者的5%～10%)，表明感染已轉(zhuǎn)為慢性。相對于成人來講，90%的嬰幼兒會發(fā)展為慢性感染。所以嬰幼兒早期接種乙肝疫苗是非常重要的。

乙肝檢測中HBsAb是感染后產(chǎn)生的保護性抗體。根據(jù)Robett koch協(xié)會疫苗標準委員會制定的標準，如HBsAb小于100IU/L，需要再次接種疫苗并需檢測。我們檢測到的132例(Els法)少見模式的標本中有95例HBsAg和HBsAb共同陽性標本，再用電化學發(fā)光法檢測HBsAg和HBsAb，結(jié)果一致的有13例，符合率僅為13.6%，可以看出而HBsAg和HBsAb同時陽性的結(jié)果很少見。同時陽性可能的原因有：①人在乙肝病毒感染的恢復期。②HBsAg的攜帶者。③病人感染了兩個不同亞型的乙肝病毒。

在95例(Els法)HBsAg和HBsAb共同陽性標本中，例數(shù)最多的是HBsAg、HBsAb、HBcAb陽性標本和HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBcAb陽性，分別為32例和29例。與羅氏電化學發(fā)光法定量檢測的符合率分別為21.9%和13.8%。132例(Els法)少見模式的標本中其他模式標本與羅氏電化學發(fā)光法定量檢測的符合率都非常低或未見相符。因此在酶聯(lián)免疫吸附試驗(Els法)檢測乙肝五項的實驗結(jié)果中，少見模式的陽性報告多為假陽性。為數(shù)不多的真陽性報告也以上面的2種模式多見。

HBeAg是HBV復制的重要血清學指標之一，傳統(tǒng)認為HBV感染者血清中HBeAg與HBeAb的血清學轉(zhuǎn)換，提示HBV復制明顯下降。但臨床上10%～20%的HBeAg陰性患者仍然伴有高水平的乙肝病毒復制[6]。HBeAg是乙肝病毒復制及血清有強感染性的一個重要指標。在我們?nèi)粘z測工作中由于對HBeAg和HBeAb有異議引起的患者投訴非常少，反而是臨床醫(yī)生多一些。這可能是在治療過程中乙肝病毒發(fā)生前C區(qū)變異或C區(qū)變異，表達異?！癏BeAg”，正常的HBeAg檢測不到，表現(xiàn)為HBeAg陰性，HBV-DNA陽性。臨床上稱之為HBeAg陰性慢性乙型肝炎(e-CHB),而實際上病毒仍在復制，這種變異的病毒促使機體產(chǎn)生相應(yīng)抗體，導致肝細胞損傷，病情進展[7]。HBsAg也處與高水平變動。定性檢測表現(xiàn)為“小三陽”和忽高忽低ALT值及HBV-DNA始終陽性。

在檢測過程中(Els法)要時刻注意由于抗原抗體過量而引起的假陰性，即免疫學中的“勾帶效應(yīng)”。患者血清中如存在大量的大分免疫球蛋白如RF因子,也可引起假陽性結(jié)果。檢測中HBeAg與HBsAg抗原量是一致的。得到正確的結(jié)果，需要操作者認真判讀。HBeAg和HBeAb同時陽性未得到定量證實，如果在急性乙肝恢復期和慢性肝炎的病人血液中形成了免疫復合物，理論上是有可能測到的。HBcAg是非常強的免疫原，可持續(xù)存在數(shù)十年，故在我們檢測時HBcAb的陽性率是很高的。對于HBcAb單獨陽性結(jié)果，可能是HBV感染的窗口期或其它抗原抗體太少測不出，抗原抗體非特異結(jié)合也是常見的。

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