豆粕抗?fàn)I養(yǎng)因子及其生物改性的研究

內(nèi)蒙古工業(yè)大學(xué)化工學(xué)院 高美云 張 通

農(nóng)業(yè)部飼料生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所基因室 劉 賓 滕 達(dá) 田子罡 王建華＊

與棉籽粕、菜籽粕、花生粕相比，豆粕不僅蛋白質(zhì)含量高（約44%），還具有氨基酸平衡（賴氨酸含量高達(dá)2%以上）、適口性好、消化率高（85%）等特點(diǎn)；與魚粉、肉骨粉、血漿蛋白粉等動物源性蛋白質(zhì)相比，豆粕具有供應(yīng)充足、不易被病原菌污染或氧化腐敗，安全系數(shù)高等特點(diǎn)。但是，豆粕中存在許多抗?fàn)I養(yǎng)因子（如胰蛋白酶抑制劑、脲酶、抗原蛋白、皂甙等），這些抗?fàn)I養(yǎng)因子對幼齡動物腸道結(jié)構(gòu)具有較大的破壞作用，會引起腹瀉等疾病。因此，利用物理、化學(xué)、生物學(xué)方法去除豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，有利于提高其營養(yǎng)價值。

1 豆粕抗?fàn)I養(yǎng)因子

1.1 抗原蛋白 截至2009年5月19日國際免疫學(xué)聯(lián)合會（IUIS）認(rèn)定的大豆過敏原共34種，其中32種來自栽培大豆，2種來自野生型大豆（http://www.allergenoline.org/）。這些抗原蛋白的分子量范圍為7.0～71 ku。在動物營養(yǎng)研究中，根據(jù)含量和致敏度，認(rèn)為7S球蛋白組分中的Gly m Bd 60K、Gly m Bd 30K、Gly m Bd 28K、11S 球蛋白是豆粕中主要致敏蛋白，這4種蛋白質(zhì)都是大豆種子儲藏蛋白（Ogawa等，2000）。

1.1.1 抗原蛋白特征 Gly m Bd 60K是β-伴球蛋白（β-conglycinin）的 α-亞基，能被 25%過敏患者血清識別（方旭前等，2006）。β-伴球蛋白占大豆蛋白質(zhì)的30%，是高豐度蛋白質(zhì)，也是最重要的豆粕致敏原。β-伴球蛋白的α亞基與α′亞基、α亞基與β亞基、α′亞基與β亞基間不變氨基酸殘基的比例分別為90.4%、76.2%和75.5%，但識別60K的IgE抗體同β-伴球蛋白中的另兩個亞基 α′和 β 并無交叉反應(yīng)（Ogawa等，2000）。

Gly m Bd 30K蛋白幾乎存在于所有大豆品種，尚未發(fā)現(xiàn)自然缺失該蛋白的品種（Yaklich等，1999）。Gly m Bd 30K在大豆中是一種低含量蛋白質(zhì)組分，其含量小于大豆蛋白質(zhì)總含量的1%（Eliot等，2003），但能引起65%大豆過敏患者發(fā)生過敏反應(yīng)（Helm 等，2000；1998），是大豆中致敏性最強(qiáng)的儲藏蛋白。Gly m Bd 30K與大豆種子34K種子空泡蛋白P34相同，故名P34，其功能尚不清楚，也未見關(guān)于Gly m Bd 30K的酶活性相關(guān)報(bào)道。30K至少有14個抗原表位。

Gly m Bd 28K是豆粕中存在的另一重要過敏原，含量低于30K蛋白，為低豐度蛋白。通過用大豆致敏患者血清作的免疫檢測發(fā)現(xiàn)，Gly m Bd 28K與其C端23KD片段都具免疫原性（Ping等，2004）。Gly m Bd 28K是否被加工成兩條單獨(dú)肽鏈，以及這兩條肽鏈?zhǔn)欠裣翊蠖骨虻鞍滓粯咏?jīng)疏水作用而結(jié)合仍不清楚（Mills等，2002）。根據(jù)都可與IgE抗體結(jié)合的特點(diǎn)，推測這兩種肽鏈在體內(nèi)會是結(jié)合的。

1.1.2 抗原蛋白的作用機(jī)制 幼齡動物腸道發(fā)育不成熟，采食含大豆日糧后，大部分抗原蛋白被降解為肽和氨基酸，小部分抗原蛋白會穿過小腸上皮細(xì)胞間隙或上皮細(xì)胞內(nèi)的空隙完整地進(jìn)入血液和淋巴，刺激腸道免疫組織，產(chǎn)生包括特異性抗原抗體反應(yīng)和T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)性過敏反應(yīng)，前者刺激肥大細(xì)胞釋放組胺，引起上皮細(xì)胞通透性增加和黏膜水腫，后者主要引起腸道形態(tài)變化。過敏反應(yīng)將使幼齡動物血清中大豆抗原特異性抗體滴度升高，小腸絨毛萎縮，隱窩細(xì)胞增生（Li等，1990），同時導(dǎo)致消化吸收障礙、生長受阻以及過敏性腹瀉。

1.2 胰蛋白酶抑制劑 大豆中胰蛋白酶抑制劑（TI）含量約為2%，是大豆主要抗?fàn)I養(yǎng)因子之一，按其結(jié)構(gòu)可分為2種，即Kunitz胰蛋白酶抑制劑（簡稱KTI）和Bouman-Birk胰蛋白酶抑制劑（簡稱BBI）。KTI含量約1.4%，主要抑制動物體內(nèi)分泌的胰蛋白酶活性；BBI含量約0.6%，可同時抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶活性。當(dāng)動物采食含胰蛋白酶抑制劑的大豆飼料后，腸道中蛋白酶作用被抑制，阻礙動物對飼料蛋白質(zhì)的消化吸收，還造成胰腺本身的補(bǔ)償性反應(yīng)，分泌過多胰腺酶，導(dǎo)致必需氨基酸的內(nèi)源性損失；另外，還可引起腸胃中毒、胰腺腫大，消化吸收功能失調(diào)，抑制生長，尤其對幼齡動物影響大（Perez-Maldonado，2003）。

1.3 大豆凝血素 大豆凝血素是一種高親和性的糖蛋白，在大豆中含量約3%，其在動物腸道中不易被蛋白酶水解，它通過與小腸壁上皮細(xì)胞表面特異性受體相結(jié)合，損壞小腸壁刷狀緣黏膜結(jié)構(gòu)，干擾消化酶分泌，抑制腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，降低蛋白質(zhì)利用率，使動物生長受阻甚至停滯（Liener，2000）。 另外，凝血素還對腸壁、腸道細(xì)菌及免疫機(jī)能產(chǎn)生一定影響，引起腸腔糜爛，微絨毛變短萎縮，腸細(xì)胞退化，病變周圍組織水腫和杯狀細(xì)胞肥大增生等。Palacios等（2004）用除去凝集素和胰蛋白酶抑制因子的熟大豆飼喂雛雞和幼豬，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這兩種抗?fàn)I養(yǎng)因子對幼豬的影響大于雛雞，因此大豆凝集素對動物生產(chǎn)性能的影響隨動物年齡、物種等因素而異。

1.4 低聚糖 大豆中低聚糖含量為5%～6%，主要包括棉籽糖、水蘇糖等，它具有營養(yǎng)和抗?fàn)I養(yǎng)雙重作用，一方面低聚糖又稱為胃腸脹氣因子，由于人或動物缺乏α-半乳糖苷酶不能水解棉籽糖與水蘇糖，攝入的α-半乳糖苷不能被消化吸收，當(dāng)它們進(jìn)入大腸后，經(jīng)細(xì)菌發(fā)酵，會產(chǎn)生CO2、H2及少量CH4，引起消化不良、腹脹、腸鳴、腹瀉等現(xiàn)象，同時也降低了含α-半乳糖苷飼料的消化能值。另一方面它又是益生素，能被雙歧桿菌等有益微生物特異性利用，促進(jìn)有益菌增殖，有益菌的增殖產(chǎn)生代謝產(chǎn)物乳酸和短鏈脂肪酸，降低腸道pH值，從而抑制了病原菌生長，增強(qiáng)了動物的抗病性能（張樹清等，2007；徐超斗等，2005）。

1.5 植酸 大豆中80%的磷以植酸態(tài)存在。植酸能和飼料中的礦物質(zhì)元素，如鐵、鋅、錳等結(jié)合形成穩(wěn)定的化合物，降低這些成分的消化利用率。植酸能與蛋白質(zhì)結(jié)合，降低其溶解性，影響蛋白質(zhì)的營養(yǎng)功能。植酸還可與淀粉酶、胰酶和胃蛋白酶結(jié)合，抑制其活性并可造成磷污染。Veum等（2002）總結(jié)了用低植酸豆粕和大麥的混合物飼喂豬，結(jié)果表明，磷和鈣的吸收率分別可達(dá)到52.56%和78.59%。

1.6 其他 由于大豆蛋白酶抑制因子、凝集素、寡糖、植酸和抗原蛋白等對動物生長性能和生理健康影響較大，因此一直以來對上述幾種大豆抗?fàn)I養(yǎng)因子的研究較多。其他一些抗?fàn)I養(yǎng)因子，如脂肪氧化酶、致甲狀腺腫素、皂甙和脲酶等也有報(bào)道，但對其研究的深度還有待進(jìn)一步加強(qiáng)。

2 消除豆粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子的方法

2.1 微生物發(fā)酵法 微生物發(fā)酵法是利用微生物產(chǎn)生的酶來降解豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，并累積有益的代謝產(chǎn)物。從工藝看，發(fā)酵可以從固態(tài)發(fā)酵和液態(tài)發(fā)酵，單菌種發(fā)酵和混合菌種發(fā)酵，以及一步發(fā)酵和多步發(fā)酵三方面分類。發(fā)酵工藝通常要考慮的因素有接種量、氮源、碳源、料水比、發(fā)酵時間、通氣量等。如果選擇合適的菌株，配合適當(dāng)?shù)陌l(fā)酵條件，可達(dá)到降解抗?fàn)I養(yǎng)因子和大分子蛋白的目的。表1列出了不同菌株和發(fā)酵工藝對豆粕抗?fàn)I養(yǎng)因子的影響。

表1 發(fā)酵對豆粕抗?fàn)I養(yǎng)因子的影響

從營養(yǎng)和安全角度來看，發(fā)酵能夠提高大豆食品的抗氧化功能。Rebeca等（2007）分別采用米曲霉、稻根霉菌和枯草芽孢桿菌發(fā)酵大豆48 h，維生素E的含量分別增加31%、30%和89%；總酚（TPC）含量分別增加19%、15%和31.9%。豆粕中異黃酮主要以異黃酮糖苷形式存在，即葡萄糖通過β-葡萄糖苷鍵與異黃酮苷元結(jié)合形成異黃酮苷，而只有游離的異黃酮苷元才具有生物學(xué)功能。大豆異黃酮苷元還具有弱雌激素活性、抗氧化活性、抗溶血活性等性質(zhì)。發(fā)酵豆粕異黃酮含量和抗菌性增強(qiáng)，發(fā)酵豆粕中提取、精制的異黃酮對細(xì)菌最低抑制濃度（MIC）為0.24%，而豆粕中提取精制的異黃酮對細(xì)菌最低抑制濃度為0.48%（楊國峰和周建新，2005）。Kuo等（2006）采用枯草芽孢桿菌發(fā)酵水解大豆異黃酮糖苷12 h，β-葡萄糖苷酶達(dá)到最大值3.3 U/mL，同時大豆苷元從 28.5 μmol/L 上升到 97.4 μmol/L， 染料木苷元從 54.0 μmol/L 上升到 120.3 μmol/L（表 2）。

混合菌種發(fā)酵處理生豆粕也有報(bào)道，莫重文和黃岡（2007）用米曲霉（A3.042）和啤酒酵母混合菌株固態(tài)發(fā)酵法生產(chǎn)發(fā)酵豆粕，利用霉菌生長時分泌的酶系降解豆粕中的多糖和蛋白質(zhì)，使其變成利于消化的低分子糖類、肽類及氨基酸，再通過酵母菌的生長繁殖使這些物質(zhì)變成菌體蛋白，不僅改善適口性，提高消化吸收率，還可提高發(fā)酵豆粕蛋白質(zhì)含量。Lee等（2007）采用乳酸桿菌、枯草芽孢桿菌和米曲霉進(jìn)行分步發(fā)酵54 h，中性蛋白酶活可達(dá)到636 U/g，分別是米曲霉和枯草芽孢桿菌單菌發(fā)酵的1.7倍和2.2倍；氨基酸總含量分別是米曲霉和枯草芽孢桿菌單菌發(fā)酵的3.0倍和18.6倍。

表2 發(fā)酵對豆粕營養(yǎng)成分的影響

2.2 酶制劑處理法 酶解法是通過特定的酶來水解抗?fàn)I養(yǎng)因子的一種新方法。Caine等（1998）用0.2 mg蛋白酶處理豆粕16 h即可將胰蛋白酶抑制因子的含量從10 mg/g降為0 mg/g；Mulimani等（1997）在豆粕中添加α-糖苷酶在50℃培育4 h，可使豆粕中的棉籽糖和水蘇糖分別下降90.4%和91.9%。賈振寶（2002）采用Alcalase水解豆粕，當(dāng)水解度達(dá)到25%時，β-伴球蛋白被徹底分解。酶解法具有產(chǎn)品安全性高、生產(chǎn)條件溫和、水解易控制、可定位生產(chǎn)特定的大豆肽等優(yōu)點(diǎn)，但其缺點(diǎn)是大豆蛋白質(zhì)利用率不高（Kocher等，2002），僅限于少數(shù)幾種微生物蛋白酶、動物蛋白酶和植物蛋白酶，酶解產(chǎn)肽率較低，且成本高。

2.3 化學(xué)處理法 化學(xué)鈍化方法是近年來針對胰蛋白酶抑制劑廣泛嘗試的方法，其原理為通過改變TI分子結(jié)構(gòu)，破壞二硫鍵，達(dá)到鈍化TI活性的目的。張建云等（1999）用5%尿素+20%水處理生豆餅30 d，使胰蛋白酶抑制因子的失活率達(dá)78.55%。另外，通過化學(xué)處理在抗原蛋白Gly m Bd 30K上共軛一個多糖可以降低抗原免疫原性，共軛了一個多糖后的Gly m Bd 30K對人過敏血清及Gly m Bd 30K單克隆抗體的反應(yīng)性完全消失（Arita等，2001）。該處理最可能的原理就是通過共軛反應(yīng)掩蓋了原有的一些抗原表位，并且共軛多糖后形成的高分子蛋白質(zhì)性物質(zhì)可在一定程度上提高蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性、乳化性和抗菌性。這對于制藥、食品及飼料加工等均有重要的潛在價值?；瘜W(xué)鈍化應(yīng)用的最大阻礙是化學(xué)物質(zhì)殘留，處理費(fèi)用高和大量處理困難 （周春暉和黃惠華，2001）。

2.4 熱處理法 熱處理法對那些熱不穩(wěn)定抗?fàn)I養(yǎng)因子，如蛋白酶抑制劑、大豆凝血素、致甲狀腺腫素等有較好的抑制效果。Fasina等 （2003）在90～110℃膨化處理大豆20 min，脲酶失活73.9%～99.5%；胰蛋白酶抑制因子含量降為4.86～1.32 mg/g，失活89.6% ～97.2%；凝集素降為0.06～0.00 mg/g，失活95.6% ～100%。但大豆主要抗原蛋白具較高熱穩(wěn)定性，傳統(tǒng)的加熱處理不能使其有效滅活，因而廣泛存在于大豆制品中（Li等，1991）。熱處理過度還會破壞飼料氨基酸和維生素，導(dǎo)致蛋白質(zhì)消化率下降，降低營養(yǎng)價值。另外，熱處理在破壞大豆抗原蛋白天然分子表面抗原表位的同時，也會暴露出新的抗原表位。熱處理法效率高、簡單易行，無殘留問題，成本也較低，但僅適用于對熱不穩(wěn)定的抗?fàn)I養(yǎng)因子，且耗能大，控制不當(dāng)還會破壞豆粕必需營養(yǎng)成分。

2.5 育種法 通過植物育種途徑可培育低或無抗?fàn)I養(yǎng)因子的植物品種，從根本上去除抗?fàn)I養(yǎng)因子。韓粉霞等（2005）采用雜交技術(shù)和生化分子標(biāo)記法篩選出無脂肪氧化酶和胰蛋白酶抑制劑這兩種抗?fàn)I養(yǎng)因子基因的功能性大豆。但抗?fàn)I養(yǎng)因子多是植物防御類物質(zhì)（Clarke和Wiseman，2000），降低其含量可能對植物抗病等不利，如增產(chǎn)、抗病能力降低，而且育種周期較長、成功率低，成本也高。并且，在不影響大豆種子結(jié)構(gòu)和生理發(fā)育的情況下，完全去除所有抗原是不可能的。該方法是否會帶來一些營養(yǎng)和功能上的負(fù)面影響，或者是否會表達(dá)出新的抗原成分也需進(jìn)一步考證。

綜上所述，微生物發(fā)酵法可有效分解和破壞豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高豆粕的營養(yǎng)價值。與目前普遍采用的物理、化學(xué)脫敏方法相比，微生物發(fā)酵技術(shù)是一種更為有效、經(jīng)濟(jì)的改善豆粕營養(yǎng)價值的手段，更符合健康養(yǎng)殖的要求。

3 小結(jié)

植物蛋白質(zhì)原料中普遍存在植物過敏源和抗?fàn)I養(yǎng)因子，使植物蛋白質(zhì)的消化率和生物學(xué)效價遠(yuǎn)不及魚粉等動物源性蛋白質(zhì)；同時動物試驗(yàn)已證實(shí)植物過敏物質(zhì)是造成幼齡動物（如斷乳仔豬）腹瀉、生長遲緩等營養(yǎng)性疾病的主要原因。近年來，隨著市場需求增大和相關(guān)資源逐步枯竭，優(yōu)質(zhì)動物源性蛋白質(zhì)不斷漲價，已嚴(yán)重影響我國養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟(jì)效益。因此去除植物蛋白質(zhì)中抗?fàn)I養(yǎng)因子，改善植物蛋白質(zhì)品質(zhì)，將其用于替代動物源性蛋白具有現(xiàn)實(shí)意義。

[1]陳京華.微生物發(fā)酵、外源酶制劑和促攝食物質(zhì)對牙鲆利用豆粕蛋白的影響：[博士學(xué)位論文][D].青島：中國海洋大學(xué)，2006.

[2]方旭前，朱友林，丘麗娟.大豆過敏原與低過敏原種質(zhì)創(chuàng)新[J].遺傳，2006，28（8）：1043 ～ 1050.

[3]韓粉霞，丁安林，孫君明，等.大豆脂肪氧化酶及Kunitz胰蛋白酶抑制劑缺失種質(zhì)的創(chuàng)新[J].遺傳學(xué)報(bào)，2005，32（4）：417 ～ 423.

[4]賈振寶.利用外源蛋白酶失活大豆中抗原蛋白的研究：[碩士學(xué)位論文][D].哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2002.

[5]莫重文，黃岡.固態(tài)發(fā)酵法生產(chǎn)發(fā)酵豆粕的研究[J].中國油脂，2007，32（7）：38 ～ 40.

[6]徐超斗，梁愛君，祝業(yè)，等.大豆低聚糖對免疫功能的促進(jìn)作用[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2005，21（1）：37 ～ 39.

[7]楊國峰，周建新.發(fā)酵豆粕中異黃酮的抗氧化和抗菌活性的研究[J].食品科學(xué)，2005，5（26）：47 ～ 50.

[8]張建云，閆貴龍，劉立文，等.生豆餅化學(xué)鈍化劑的研究[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，1999，30（1）：28 ～ 32.

[9]張樹清，李小成，孫玉華.大豆低聚糖對小鼠體液免疫功能的影響的試驗(yàn)研究[J].微生物學(xué)雜志，2007，2（27）：97 ～ 99.

[10]周春暉，黃惠華.大豆胰蛋白酶抑制因子失活方法的研究進(jìn)展[J].食品科學(xué)，2001，22（5）：81 ～ 87.

[11]Arita K，Babiker E E，Azakami H，et al.Effect of chemical and genetic attachment of polysaccharides to proteins on the production of IgG and IgE[J].J Agric Food Chem，2001，49（4）：20302 ～ 20361.

[12]Caine W R，Verstegen M W A，Sauer W C，et al.Short communication：Effect of protease treatment of soybean meal on content of total soluble matter and crude protein and level of soybean trypsin inhibitors[J].Anim Feed Sci Tech，1998，71：177 ～ 283.

[13]Clarke E J，Wiseman J.Developments in plant breeding for improved nutritional quality of soya beans I.Protein and amino content[J].J Agri Science，2000，134：125 ～ 136.

[14]Egounlety M，Awuorh O C.Effect of soaking，dehulling，cooking and fermentation with Rhizopus oligosporus on the oligosaccharides，trypsin inhibitor，phytic acid and tannins of soybean （Glycine max Merr.），cowpea（Ygnaunguiculata L.Walp）and groundbean （Macrotyloma geocarpa Harms）[J].J Food Eng，2003，56：249 ～ 254.

[15]Eliot M H，Ricki M H，Rudolf J，et al.Genetic modification removes an immunodomiant allergen from soybean[J].Plant Physiol，2003，132：36 ～ 43.

[16]Fasina Y O，Classen H L，Garlich J D，et al.Investigating the possibility of monitoring lectin levers in commercial soybean meals instead for poultry feed-ing using steam-heated soybean mean as a model[J].Poult Sci，2003，82（4）：648～656.

[17]Helm R M，Cockrell G，Herman E m，et al.Cellular and molecular characterization of a major soybean allergen [J].Int Arch Allergy Immunol，1998，117：29 ～ 37.

[18]Helm R M，Cockrell G，West C M，et al.Mutational analysis of the IgE-binding epitopes of P34/Gly m1[J].J Allergy Clin Immun，2000，105：378 ～ 384.

[19]Hirabayashi M T，Yano H.Fermentation of soybean meal with Aspergillus tusamii reduces phosphorus excretion in chicks[J].Poult Sci，1998，77：552 ～ 556.

[20]Hong K J，Lee C H，Kim S W.Aspergillus oryzae GB-107 fermentation improves nutritional quality of food soybeans and feed soybean meals[J].J Med Food，2004，7：430 ～ 435.

[21]Jane Hubert，Monique Berger，F(xiàn)rancoise Nepveu，et al.Effects of fermentation on the phytochemical composition and antioxidant properties of soy germ[J].Food Chemistry，2008，109：709～721.

[22]Kocher A，Choct M，Porter M D，et al.Effects of feed enzymes on nutritive value of soybean meal fed to broilers[J].Brit Poultry Sci，2002，43：54 ～63.

[23]Kuo L C，Cheng W Y，Wu R Y，et al.Hydrolysis of black soybean isoflavone glycosides by Bacillus subtilis natto[J].Appl Biochem Biotechnol，2006，73：314 ～ 320.

[24]Lee J O.New Fermentation Technique for complete digestion of soybean protein[J].Microbiol Biotechnol，2007，17（11）：1904～1907.

[25]Li D F，Nelssen J L，Reddy P G，et al.Measuring suitability of soybean products for early-weaned pigs with immunological criteria[J].J Anim Sci，1991，69：3299 ～ 3307.

[26]Li D F，Nelssen J L，Reddy P G，et al.Transient hypersensitivity to soybean meal in the early-weaned pig[J].J Anim Sci，1990，68：1790 ～ 1799.

[27]Liener I E.Non-nutritive factors and bioactive compounds in soy[A].In：Soy in animal nutrition （Edited by Drackley，J.K.）[C].USA：FASS，Savoy，Illinois，2000.13 ～ 45.

[28]Mills E N，Jenkins J，Marigheto N，et al.Allergens of the cupin superfamily[J].Biochem Soc T，2002，30：925 ～ 929.

[29]Mulimani V H，Thippeswamy S，Ramalingam.Enzymatic degradation of oligosaccharides in soybean flours[J].Food Chem，1997，59：279 ～ 282.

[30]Nora Narkie Terlabie，Esther Sakyi-Dawson，Wisdom Kofi Amoa-Awua.The comparative ability of four isolates of Bacillus subtilis to ferment soybean into dawadawa[J].International J Food Microbiol，2006,106：145～152.

[31]Ogawa T，Samoto M，Takahashi K.Soybean allergens and hypoallergenic soybean products[J].J Nutr Sci Vitaminol，2000，46：271 ～ 279.

[32]Palacios M F，Easter R A，Soltwedel K T，et al.Effect of soybean variety and processing on growth performance of young chicks and pigs[J].J Anim Sci，2004，82（4）：1108 ～ 1114.

[33]Perez-Maldonado R A，Mannion P F，F(xiàn)arrell D J.Effects of heat treatment on the nutritional value of raw trypsin inhibitor activity[J].Brit Poultry Sci，2003，44（2）：299 ～ 308.

[34]Ping Xiang，Eric J Haas，Michael G Zeece.C-Terminal 23 KD polypeptide of soybean Gly m Bd 28k is a potential allergen[J].Planta，2004，220：56～63.

[35]Rebeca F O，Juana F，Rosario M，et al.Fermentation as a bio-process to obtain functional soybean flours[J].J Agric Food Chem，2007，55：8972 ～ 8979.

[36]Song Y S，F(xiàn)rias J，Martinez-Villaluenga C，et al.Immunoreactivity reduction of soybean meal by fermentation，effect on amino acid composition and antigenicity of commercial soy products[J].Food Chem，2008，108：571 ～ 581.

[37]Stale R，Stefan S，Erland B，et al.Lactic acid fermentation eliminates indigestible carbohydrates and antinutritional factors in soybean meal for Atlantic salmon（Salmo Salar）[J].Aquaculture，2005，246：331 ～ 345.

[38]Veum T L，Ledoux D R，Bollingqer D W，et al.Low-phytic acid barley improves calcium and phosphorus utilization and growth performance in growing pigs[J].JAS，2002，80（10）：2663 ～ 2670.

[39]Yaklich R，Helm R，Herman E.Analysis of the distribution of the major soybean allergen in a core collection of Glycine max accessions[J].Crop Sci，1999，39：1444 ～ 1447.