酵母硒對(duì)圍產(chǎn)前期奶牛全血硒含量和血液抗氧化能力的影響

東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 雒國(guó)彬 趙洪波 文奇男 王志博 張永根＊

奶牛在圍產(chǎn)期（產(chǎn)前21 d至產(chǎn)后21 d）由于生理狀態(tài)、組織代謝的變化以及泌乳開始對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)需求的急劇增加，都會(huì)使其神經(jīng)內(nèi)分泌和免疫狀態(tài)發(fā)生很大的變化（Goff和Horst，1997）。 圍產(chǎn)期對(duì)奶牛健康是非常關(guān)鍵的階段。奶牛在圍產(chǎn)期可能經(jīng)歷氧化應(yīng)激，氧化應(yīng)激可以引起圍產(chǎn)期奶牛機(jī)能紊亂，從而導(dǎo)致相關(guān)的代謝疾?。≧onchi等，2000）。硒作為谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的組成成分具有抗氧化作用。酵母硒作為有機(jī)硒，具有毒性低、對(duì)環(huán)境污染小、生物利用率高等優(yōu)點(diǎn)（鐘榮珍等，2005）。本試驗(yàn)研究了不同水平酵母硒對(duì)圍產(chǎn)前期（產(chǎn)前21 d至分娩）奶牛全血硒含量和血液抗氧化能力的影響，以便為酵母硒在奶牛養(yǎng)殖業(yè)的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 選取20頭處于干奶期 （產(chǎn)前4周），體況評(píng)分相近（3.25 ～ 3.75），胎次相近（3 ～ 4胎），預(yù)產(chǎn)期相近的中國(guó)荷斯坦奶牛。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)采用完全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，隨機(jī)分為4組（A、B、C和D組），每組5頭奶牛。A組（對(duì)照組）：飼喂基礎(chǔ)日糧（硒含量0.29 mg/kg DM）；B組：飼喂基礎(chǔ)日糧+酵母硒 2.4 g/d（硒含量0.49 mg/kg DM）；C組：飼喂基礎(chǔ)日糧+酵母硒4.8 g/d（硒含量 0.69 mg/kg DM）；D 組：飼喂基礎(chǔ)日糧+酵母硒7.2 g/d（硒含量0.89 mg/kg DM）。所用的酵母硒（商品名：賽樂硒，英文名稱：SELPLEX）成分：酵母硒、干啤酒酵母，硒1000 mg/kg（由北京奧特奇生物制品有限公司提供）。試驗(yàn)期為3周，預(yù)試期1周，從預(yù)產(chǎn)前4周（產(chǎn)前28 d）開始，持續(xù)到分娩當(dāng)天。

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)牛按牛場(chǎng)常規(guī)飼養(yǎng)管理程序進(jìn)行。試驗(yàn)組和對(duì)照組飼喂配制相同的基礎(chǔ)日糧，日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。每天分早 （06∶00）、中（13∶00）、晚（20∶00）3 次給料，牛只全天自由采食。試驗(yàn)各組根據(jù)施加的處理不同，飼喂不同水平的酵母硒。每日酵母硒平均成3份，分3次飼喂，酵母硒與適量基礎(chǔ)日糧混合進(jìn)行飼喂，以保證準(zhǔn)確采食。同時(shí)每頭牛補(bǔ)充維生素E 800 mg/d，以滿足奶牛的需要。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.4 樣品收集與分析 分別在產(chǎn)前14、7 d和分娩當(dāng)天，尾靜脈采集血液20 mL，其中取10 mL用一次性真空采血管（規(guī)格：肝素管）收集，用于測(cè)定全血硒含量，采用熒光法測(cè)定參照GB/T 5009.93-2003《食品中硒的測(cè)定》；另取10 mL用一次性真空采血管 （規(guī)格：無添加劑管）收集，3000 r/min離心15 min，分離制得血清，-20℃冷凍保存。使用南京建成生物工程研究所提供試劑盒測(cè)定血清中谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、總抗氧化能力 （T-AOC）、總超氧化物歧化酶 （TSOD）的活力和丙二醛（MDA）的含量，按試劑盒說明進(jìn)行操作。

1.5 數(shù)據(jù)處理 應(yīng)用SAS 9.1統(tǒng)計(jì)分析軟件的ANOVA過程進(jìn)行方差分析，采用Duncan’s方法進(jìn)行多重比較，數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示。

2 結(jié)果

2.1 酵母硒對(duì)圍產(chǎn)前期奶牛全血硒含量的影響見表2。由表2可以看出，在產(chǎn)前14 d，B、C、D組分別比對(duì)照組提高了16.67%、25%和16.67%（P<0.05）；在產(chǎn)前 7 d，飼喂酵母硒各組與對(duì)照組相比差異不顯著（P<0.05）；在分娩當(dāng)天，D組比對(duì)照組提高20%（P<0.05），B組和C組都提高了6.67%，差異不顯著（P＞0.05）。

表2 酵母硒對(duì)奶牛全血硒含量的影響μg/mL

2.2 酵母硒對(duì)圍產(chǎn)前期奶牛血清抗氧化能力的影響

2.2.1 酵母硒對(duì)GSH-Px活力的影響 見表3。通過表3可以看出，在產(chǎn)前14 d，D組奶牛血清中GSH-Px活力比對(duì)照組提高11.81%（P<0.05）；在產(chǎn)前7 d，B組比對(duì)照組提高38.33%，C組和D組與對(duì)照組相比無顯著差異（P＞0.05）；在分娩當(dāng)天，C組比對(duì)照組提高20.69%（P<0.05），D組比對(duì)照組提高46.67%（P<0.01）。

表3 酵母硒對(duì)奶牛血清GSH-Px活力的影響U/mL

2.2.2 酵母硒對(duì)血清T-AOC的影響 見表4。通過表4可以看出，在產(chǎn)前14 d，各飼喂酵母硒組血清中T-AOC與對(duì)照組相比都有提高，但差異不顯著（P＞0.05）；在產(chǎn)前7 d，B組比對(duì)照組提高36.46%（P<0.01）；在分娩當(dāng)天，B組比對(duì)照組提高 31.47%（P<0.05）。

2.2.3 酵母硒對(duì)血清T-SOD活力的影響 見表5。通過表5可以看出，在產(chǎn)前14 d，C組奶牛血清中T-SOD活力比對(duì)照組提高9.67%（P<0.01），在產(chǎn)前7 d，C組和D組比對(duì)照組分別提高7.51%和5.26%（P<0.05）；在分娩當(dāng)天，各飼喂酵母硒組都比對(duì)照組有提高，但差異不顯著（P＞0.05）。

表4 酵母硒對(duì)奶牛血清T-AOC的影響U/mL

表5 酵母硒對(duì)奶牛血清T-SOD活力的影響U/mL

2.2.4 酵母硒對(duì)血清MDA的影響 見表6。通過表6可以看出，在產(chǎn)前14 d，各組之間差異不顯著（P ＞ 0.05）；產(chǎn)前 7 d，B、C 組和 D 組分別比對(duì)照組降低 45.60%、38.38%和 32.17%（P<0.05），飼喂酵母硒各組之間差異不顯著 （P＞0.05）；在分娩當(dāng)天，B組比對(duì)照組降低56.77%（P＜ 0.01），C 組比對(duì)照組降低 23.35%（P ＜ 0.05），D組與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05）。

表6 酵母硒對(duì)奶牛血清MDA的影響nmol/mL

3 討論

與無機(jī)來源硒相比，給反芻動(dòng)物飼喂有機(jī)來源的硒（包括酵母硒和富硒飼料）通常能提高血液和組織中的硒濃度和提高GSH-Px的活性 （許宗運(yùn)等，2007）在本次研究中，產(chǎn)前14 d和分娩當(dāng)天得到的結(jié)果證明這一點(diǎn)，而在產(chǎn)前7 d飼喂酵母硒各組與對(duì)照組沒有顯著差異（P＞0.05），這可能是因?yàn)樗x擇的試驗(yàn)?zāi)膛５纳a(chǎn)階段不同造成的，此階段奶?？赡軇?dòng)員內(nèi)源硒使血硒濃度提高，機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

本研究中奶牛血清中GSH-Px活力在產(chǎn)前7 d，T-SOD活力在產(chǎn)前14 d和7 d的變化表明：適宜水平的酵母硒提高了GSH-Px活力和T-SOD活力，隨著酵母硒水平的提高，都呈下降的趨勢(shì)，這與許宗運(yùn)等（2007）和劉強(qiáng)（2008）報(bào)道相同。硒在低濃度范圍內(nèi)可清除活性氧自由基（ROS），且清除效果隨硒濃度增大而增強(qiáng)，使ROS含量不斷減少。此時(shí)，硒的生物效應(yīng)表現(xiàn)為營(yíng)養(yǎng)作用。當(dāng)硒處于高濃度范圍內(nèi)時(shí)，硒催化產(chǎn)生ROS，且隨硒濃度增大，ROS產(chǎn)生量增多，硒的生物效應(yīng)表現(xiàn)為毒性作用（徐輝碧，2001）。這說明高濃度的硒催化產(chǎn)生了ROS，機(jī)體清除過多的ROS，導(dǎo)致GSH-Px活力和T-SOD活力的降低。丙二醛（MDA）含量在產(chǎn)前7 d和分娩當(dāng)天隨著酵母硒水平的提高，呈上升的趨勢(shì)，說明高濃度的硒催化產(chǎn)生過多ROS，使機(jī)體脂質(zhì)過氧化速度加快，產(chǎn)生過氧化物增多，導(dǎo)致過氧化物代謝終產(chǎn)物MDA的含量升高。適宜的酵母硒水平提高血清中T-AOC，隨著酵母硒添加水平提高，T-AOC降低，這與許宗運(yùn)等（2007）報(bào)道相同，這表明適宜的酵母硒添加水平提高了血清的總抗氧化能力，而酵母硒添加水平過高會(huì)降低血清的抗氧化能力。

4 結(jié)論

從本研究可以得出，圍產(chǎn)前期奶牛添加酵母硒2.4 g/d能夠提高全血硒含量和抗氧化能力。

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