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    15N標(biāo)記法研究不同精粗比底物對山羊瘤胃內(nèi)原蟲與細(xì)菌間蛋白質(zhì)微循環(huán)的影響

    2010-06-29 10:26:40揚州大學(xué)動物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院張紅偉董淑紅王洪榮
    中國飼料 2010年16期
    關(guān)鍵詞:原蟲底物瘤胃

    揚州大學(xué)動物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 劉 翔 張紅偉 董淑紅 王洪榮* 熊 浩

    反芻動物瘤胃內(nèi)的微生物既能降解代謝粗飼料資源供宿主動物利用,又是宿主動物的優(yōu)質(zhì)微生物蛋白飼料源,他們對緩解資源緊缺、節(jié)約蛋白質(zhì)飼料、保持畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展有重要的意義。反芻動物對氮源的利用效率較低 (0%~35%)(Lobley,1992),而瘤胃內(nèi)原蟲對細(xì)菌的吞噬是造成瘤胃內(nèi)微生物蛋白(MCP)再循環(huán)、氮利用效率低下的主要因素之一。反芻動物日糧的組成不同,會通過影響瘤胃發(fā)酵而影響原蟲群體。如飼喂大量精料后瘤胃pH值可能降至6.0以下,原蟲將全部消失(Brown 等,2006;Franzolin 等,1996);不同結(jié)構(gòu)日糧顯著影響瘤胃內(nèi)原蟲種群結(jié)構(gòu) (王夢芝等,2007)。而這些由于日糧帶來的原蟲的變化除了直接影響MCP產(chǎn)量外;還將不可避免地影響原蟲對細(xì)菌的吞噬,即通過影響瘤胃微生態(tài)的微生物循環(huán)而間接影響MCP量、氨基酸組成和氮利用效率,這也是利用反芻動物營養(yǎng)生理特點,通過調(diào)節(jié)飼料類型以達(dá)到調(diào)控消化道氮素營養(yǎng)的契機之一。

    近些年來,隨著同位素示蹤技術(shù)在動物營養(yǎng)上的不斷發(fā)展和應(yīng)用,尤其是利用穩(wěn)定性同位素15N研究含氮物質(zhì)在動物機體內(nèi)的吸收、利用和循環(huán),已成為一個研究的熱點。本試驗擬以不同精粗比底物條件下瘤胃原蟲與細(xì)菌間蛋白的周轉(zhuǎn)規(guī)律為研究目標(biāo),以瘤胃原蟲對細(xì)菌的吞噬速率及吞噬量為研究重點,采用穩(wěn)定性同位素標(biāo)記示蹤技術(shù),測定不同精粗比底物條件下山羊瘤胃原蟲對細(xì)菌的吞噬速率,探討底物精粗比對微生物蛋白微循環(huán)量和細(xì)菌周轉(zhuǎn)率的影響規(guī)律,為通過日糧類型調(diào)控微生物蛋白,進而提高反芻動物生產(chǎn)性能和蛋白質(zhì)飼料利用效率提供試驗依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗動物 4頭體重為 (25±3)kg的健康徐淮山羊,安裝永久性瘤胃瘺管,用以采集混合瘤胃液。單圈飼養(yǎng),自由清潔飲水。粗飼料為鍘短的(3 cm)羊草,精料為玉米、豆粕、NaCl 0.5%、添加劑1%,參照NRC(1981)的山羊營養(yǎng)需要推薦量,試驗羊每日代謝能供給量為推薦量的1.2倍,每日08∶00 和 18∶00 等量飼喂。

    1.2 體外發(fā)酵裝置 發(fā)酵裝置由恒溫振蕩水浴鍋和250 mL三孔(進氣孔、出氣孔及采樣通道)的橡皮塞的錐形瓶組成。錐形瓶用橡皮塞塞好后,通二氧化碳并調(diào)節(jié)氣體流量,使其在39℃條件下培養(yǎng)。

    1.3 人工唾液 按照Menke和Steingass(1988)的方法配制。

    1.4 試驗設(shè)計 試驗采用單因子四水平試驗設(shè)計。

    1.5 吞噬試驗

    1.5.1 試驗分組 試驗分為細(xì)菌組(180 mL培養(yǎng)體系)和原蟲組(150 mL培養(yǎng)體系)。培養(yǎng)底物為精料(玉米:豆粕=65∶35)和粗飼料(羊草),其中細(xì)菌組1.8 g/瓶,原蟲組1.5 g/瓶。處理仍按精粗比不同分為 A(1∶9)、B(3∶7)、C(5∶5)、D(7∶3)四個組,每組 3個重復(fù)。 標(biāo)記物為15N-(NH4)2SO4(由上海化工研究院購買,豐度為99.14 atom%),添加量為 350 mg/L(細(xì)菌組)。

    1.5.2 試驗步驟 (1)采集混合瘤胃液,四層紗布過濾,與人工唾液鹽(事先通CO2至飽和,于39℃水浴30 min)2∶1的比例放入裝有培養(yǎng)底物(細(xì)菌組1.8 g/瓶;原蟲組1.5 g/瓶)的錐形瓶,細(xì)菌組共180 mL,原蟲組共150 mL,塞好橡皮塞,通過進氣通道通入二氧化碳?xì)怏w,進氣口于瓶底,調(diào)節(jié)氣體流速,39℃恒溫水浴振蕩 (125 r/min)培養(yǎng)6 h;(2)培養(yǎng)到6 h時,將細(xì)菌組培養(yǎng)液300目濾布過濾,200 g離心15 min,上清液轉(zhuǎn)入裝有相同培養(yǎng)底物并加有15N標(biāo)記物的培養(yǎng)瓶內(nèi)繼續(xù)在原來的條件和環(huán)境下培養(yǎng)(標(biāo)記細(xì)菌);(3)標(biāo)記1.5 h時從細(xì)菌組各取30 mL樣待測標(biāo)記率 (劉翔等,2010)及計數(shù)細(xì)菌。同時將原蟲組200 g離心15 min,沉淀轉(zhuǎn)移至對應(yīng)的細(xì)菌組,進行吞噬試驗。(4)分別于 0、15、30、45、60 min 和 75 min 取 20 mL,立即加等量的甲醛溶液。之后200 g離心15 min無損失的轉(zhuǎn)移至10 mL離心管中,200 g離心15 min,棄上清,沉淀真空冷凍干燥 24 h;(5)將干燥后的沉淀準(zhǔn)確稱重,記錄結(jié)果即為原蟲產(chǎn)量,之后無損失的轉(zhuǎn)至凱氏消化管內(nèi),消化2 h后全微量法凱氏定氮;(6)吸收液中加入0.1 mol/L的鹽酸幾滴,75℃下水浴濃縮至1~3 mL,上質(zhì)譜儀測定樣品中15N豐度。(7)吞噬末取樣1 mL,并與1 mL MFS混合,用于計數(shù)原蟲。

    1.6 瘤胃微生物的計數(shù)

    1.6.1 原蟲 以MFS染液(NaCl 8 g,甲基綠0.6 g,福爾馬林溶液100 mL,定容至1000 mL)染色,用血球計數(shù)板在光鏡下計數(shù)(100×,400×)。

    式中N為計數(shù)的四個中方格的總數(shù);D為稀釋倍數(shù)。

    1.6.2 細(xì)菌 以結(jié)晶紫溶液染色和做倍比稀釋,用計數(shù)板在油鏡下計數(shù)(×1000)。

    式中N為計數(shù)方格的總數(shù);S為計數(shù)方格數(shù);D為稀釋倍數(shù)。

    1.7 計算公式

    式中△V為滴定時所用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積,mL;C為鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液摩爾濃度,mol/L;0.014為氮的毫摩爾質(zhì)量。

    15N 富 集 量=(微 生 物 產(chǎn) 量 ,mg)×(N%)×(15N%);

    細(xì)菌對 (NH4)2SO4利用率=細(xì)菌中15N量/添加硫酸銨中15N量×100%;

    細(xì)菌蛋白循環(huán)率=原蟲吞噬細(xì)菌N量/細(xì)菌總N量×100%。

    1.8 統(tǒng)計方法 試驗數(shù)據(jù)采用Excel軟件進行整理,運用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,差異顯著性采用LSD法進行多重比較。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同精粗比底物條件對瘤胃細(xì)菌15N標(biāo)記率的影響 見表1。

    由表1可以看出:細(xì)菌產(chǎn)量以D組最高,B組與D組間差異不顯著,B、D兩組極顯著高于A、C組,而A組與C組間差異不顯著;A組和C組的細(xì)菌含氮量極顯著高于B、D組,而A組與C組間、B組與D組間差異均不顯著,其中以A組的細(xì)菌含氮量最高,達(dá)到9.32%,而B組僅為5.69%;細(xì)菌的15N豐度為B組與C組極顯著高于A組和D組,且B組與C組間、A組與D組間差異均不顯著,B組的15N豐度為四組中最高,15N豐度最小的是A組,為5 atom%;細(xì)菌15N富集量以B組最高,達(dá)到258.79 μg/30 mL,B組與D組間差異不顯著,而極顯著高于A、C兩組,D組與C組間差異不顯著,而極顯著高于A組,且A組與C組間差異不顯著;細(xì)菌對硫酸銨利用率以B組最高,達(dá)到11.72%,B組與D組間差異不顯著,而極顯著高于A、C兩組,D組與C組間差異不顯著,而極顯著高于A組,且A組與C組間差異不顯著,其中A組細(xì)菌對硫酸銨利用率最低,僅為4.91%;細(xì)菌15N標(biāo)記率以A組最高,其次為C組,D組的標(biāo)記率為四組中最低,僅達(dá)到53.86%。

    表1 不同精粗比對瘤胃細(xì)菌15N標(biāo)記的影響

    2.2 不同精粗比底物對瘤胃原蟲吞噬細(xì)菌的吞噬量與吞噬N速率的影響 吞噬量與吞噬時間的線性關(guān)系是吞噬速率的計算的基礎(chǔ),確定攝食試驗的時間對保證試驗結(jié)果的可靠性尤為重要。由于原蟲的攝食特性受內(nèi)外因素影響較大,而目前對其攝食規(guī)律了解并不深入,因此每一次試驗應(yīng)該以攝食預(yù)試驗的結(jié)果為參考。據(jù)本次試驗預(yù)試驗結(jié)果分析,綜合考慮后將原蟲的吞噬速率計算時間定到75 min。如圖1所示,在75 min內(nèi)吞噬量線性上升,未達(dá)到平臺與下滑期;進一步對75 min內(nèi)吞噬量與時間線性回歸分析,各組擬合方程的R值都在0.939之上,也反映了吞噬量與吞噬時間的良好線性關(guān)系,說明在該時間段之內(nèi)吞噬試驗結(jié)果的可靠性較高。因此針對本研究的具體情況攝食試驗時間確定為75 min較為客觀可靠。

    對原蟲的吞噬量與時間進行75 min內(nèi)線性回歸分析,回歸方程為:

    式中:Y為原蟲吞噬細(xì)菌N量(pg/cell),X為吞噬時間(min)。

    圖1 不同精粗比底物下原蟲吞噬量隨時間的變化

    由回歸方程可以計算原蟲的吞噬N速率,A、B、C、D 組分別為 25.27、29.69、23.17 pg/(cell·h)、和 35.11 pg/(cell·h)。

    2.3 不同精粗比底物對瘤胃微生態(tài)的影響 見表2。

    由表2可見,瘤胃原蟲的密度以C組(5∶5)最高,極顯著高于其他三組,D組極顯著高于A、B兩組,而A組與B組差異不顯著,B組(1∶9)為四組中最低,僅為7.13×104cells/mL;在本試驗設(shè)置的日糧條件下,原蟲密度有隨著精粗比上升而上升的趨勢,但在精粗比最高的D組(7∶3)又有所下降。瘤胃細(xì)菌密度以 B 組(3∶7)最高,達(dá) 2.02×1010cells/mL,極顯著高于A、C兩組,而與D組差異不顯著,A 組(1∶9)細(xì)菌密度最低。

    表2 飼料精粗比對瘤胃微生態(tài)的影響

    A、B、C、D 四組吞噬 N 速率(見表 2)分別為:25.27、29.69、23.17 pg/(cell·h)和 35.11 pg/(cell·h)。四組間差異明顯,以D組最高,C組最低。

    根據(jù)原蟲的密度計算原蟲對細(xì)菌的吞噬N量結(jié)果(表2)表明:以D組最高,為30.34×105pg/(mL·h), 以下依次為 B 組 21.16×105pg/(mL·h),C 組 20.95×105pg/(mL·h),A 組最低,為 18.11×105pg/(mL·h),這與原蟲吞噬 N的速率高低順序有所不同,造成的原因是由于作為吞噬者的原蟲細(xì)胞密度不同所致。結(jié)合細(xì)菌的密度再計算由于原蟲吞噬造成的細(xì)菌蛋白循環(huán)的周轉(zhuǎn)時間和周轉(zhuǎn)率,結(jié)果表明:以 B 組(3∶7)周轉(zhuǎn)率最低,為 1.94%(即每小時約有1.94%的細(xì)菌被原蟲吞噬),周轉(zhuǎn)時間最長為51.52 h(即因為原蟲吞噬經(jīng)過51.52 h細(xì)菌可周轉(zhuǎn)更新一輪);以 C 組(5∶5)周轉(zhuǎn)率最高為2.79%,周轉(zhuǎn)時間最短為35.80 h;另外A組(1∶9)擁有較高的周轉(zhuǎn)率(2.52%)和較短的周轉(zhuǎn)時間(39.75 h),與細(xì)菌吞噬量最高的 D 組(7∶3)基本接近。

    2.4 不同精粗比底物對瘤胃內(nèi)MCP微循環(huán)的影響 據(jù)所測定的各組的細(xì)胞密度,以4 L來估計山羊瘤胃內(nèi)容物(馮仰廉,2004),估測 A、B、C 和D各組每天每頭山羊因原蟲吞噬導(dǎo)致的細(xì)菌N循環(huán)量分別為:173.88、203.11、201.14、291.25 mg。以系數(shù)6.25轉(zhuǎn)換成各組菌體蛋白循環(huán)量也列于表2,其中D(7∶3)組每天每頭山羊MCP循環(huán)量最大,達(dá)到 1.82 g,接下來是 B 組(1.27 g)和 C 組(1.26 g),A 組(1∶9)最低,僅為 1.09 g。

    3 討論

    3.1 不同精粗比底物對15N標(biāo)記瘤胃細(xì)菌的影響 底物不同精粗比對細(xì)菌產(chǎn)量、細(xì)菌含氮量、瘤胃細(xì)菌15N富集量以及對硫酸銨的利用率均有顯著影響,從而造成15N標(biāo)記細(xì)菌的標(biāo)記率方面存在一定差異(劉翔等,2010)。本試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),細(xì)菌產(chǎn)量以B組和D組較高,極顯著高于A、C兩組,這與表3中所體現(xiàn)的細(xì)菌密度具有一致性,由于在精粗比為3∶7和7∶3時細(xì)菌密度較高,所以在此處理下細(xì)菌的產(chǎn)量較大。這也是造成B組和D組瘤胃細(xì)菌15N富集量高于其他兩組的原因。而B組雖然具有最高的15N富集量和最高的硫酸銨利用率,但細(xì)菌標(biāo)記率卻只有67.49%,這是因為瘤胃細(xì)菌中可以利用硫酸銨的種類相對固定,雖然在精粗比為3∶7時細(xì)菌對硫酸銨的利用率很高,也使得15N在瘤胃細(xì)菌中的絕對含量達(dá)到最高,但由于B組細(xì)菌數(shù)量為四處理中最高,因此其相對比例并不高,即在精粗比為3∶7的條件下瘤胃細(xì)菌標(biāo)記率較低的原因。

    3.2 不同精粗比底物對瘤胃微生物細(xì)胞密度的影響 原蟲以吞噬和降解淀粉與多糖為主,但日糧中一定范圍比例的粗飼料有利于原蟲的生長,粗飼料的比例在40%~50%時原蟲的密度最大,其種類也最豐富;精料比例過高會導(dǎo)致瘤胃pH劇降,而使原蟲群體減少甚至消失。本研究中原蟲的密度以5∶5組最高,并有隨精粗比上升而上升的趨勢,與以上觀點有一定的一致性。但在精粗比最高的7∶3組原蟲的密度又下降,這可能是由于精粗比進一步上升導(dǎo)致了pH迅速下降,在一定程度上限制了原蟲生長所致。

    精粗比不合理是影響MCP合成效率及動物生產(chǎn)的重要因素之一。楊紅建和馮仰廉(2003)研究表明RSI發(fā)酵罐中72 h時微生物N的產(chǎn)量以培養(yǎng)底物的纖維素與淀粉比率最高時最小,回歸分析認(rèn)為在可利用N相同條件下,MCP合成效率取決于底物中結(jié)構(gòu)性和非結(jié)構(gòu)性碳水化合物比率。Firkins(1996)認(rèn)為,為了實現(xiàn)MCP的最大合成,反芻家畜日糧中應(yīng)含有適宜的谷物和脂肪比例。本試驗結(jié)果也印證了日糧的組成是影響MCP合成的這一觀點;結(jié)果同時表明精粗比為1∶9組原蟲和細(xì)菌的密度都較低,提示粗飼條件下不利于MCP合成。

    微生態(tài)系統(tǒng)中的原蟲與細(xì)菌之間在既定條件下是相互影響的。原蟲對細(xì)菌的捕食可能導(dǎo)致細(xì)菌群體減少;而細(xì)菌的密度、生態(tài)位也反過來影響原蟲對其的捕食,有些細(xì)菌甚至對原蟲的捕食有抵御能力。因此,瘤胃微生態(tài)中細(xì)菌群體的減少可能是由于原蟲對細(xì)菌的捕食而導(dǎo)致。Nhan等(2007)研究20 d試驗期內(nèi)牛瘤胃微生物的動態(tài)變化,結(jié)果表明,細(xì)菌密度有伴隨著原蟲密度下降而提高的趨勢,并指出瘤胃原蟲與細(xì)菌之間的互作關(guān)系基本上是已經(jīng)定論。本試驗中細(xì)菌的密度C組小于B組,除了日糧的影響外,還可能與原蟲密度從B組到C組變大,而導(dǎo)致對細(xì)菌的捕食增加有一定的關(guān)系。

    3.3 不同精粗比底物對瘤胃原蟲吞噬速率的影響 本試驗中,徐淮山羊瘤胃原蟲吞噬細(xì)菌N的速率為 23 ~ 30 pg/(cell·h),且通過計算得出的蛋白微循環(huán)量也與Coleman等(1979)估算的原蟲每日可吞噬2.5~4.5 g細(xì)菌干物質(zhì)相近,表明本研究的可靠性。但原蟲生長環(huán)境的理化狀況(pH、NH3等)、原蟲本身(種屬、生長期、繁殖周期和細(xì)胞密度)、食物精粗比、細(xì)菌密度等諸多因素均影響原蟲吞噬細(xì)菌速率(洪華生等,2001)。食物的影響則表現(xiàn)在當(dāng)細(xì)菌濃度低時,攝食速率與食物濃度成正比;當(dāng)食物濃度到了一定程度后食物濃度再提高攝食速率也不再增加。如當(dāng)細(xì)菌的濃度達(dá)到80~100 mg/L后,原蟲的攝食速率不再增加;食物濃度繼續(xù)提高將導(dǎo)致其攝食、繁殖速率的下降(梁鵬等,2003)。本試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),隨著精料添加量的增加,培養(yǎng)體系的pH值不斷下降,D組(7∶3)原蟲密度極顯著低于C組(5∶5),原蟲數(shù)目的減少說明原蟲的活性受到了抑制作用,進而對原蟲的種類及其攝食活動產(chǎn)生了影響。

    前面也已經(jīng)提到,底物結(jié)構(gòu)的改變將通過影響瘤胃的理化狀況、原蟲的種屬結(jié)構(gòu)而影響原蟲對細(xì)菌的吞噬速率。在一定范圍內(nèi)增加多糖與淀粉的比例能提高原蟲的活力和促進原蟲的生長。本試驗也發(fā)現(xiàn),在一定的精粗比范圍內(nèi),瘤胃原蟲數(shù)量有隨精料比例上升而上升的趨勢,且原蟲吞噬細(xì)菌速率的結(jié)果也表現(xiàn)出比較大的差異,其中以 D 組(7∶3)最高,而 C 組(5∶5)為四處理中最低。其從 A 組(1∶9)到 B 組(3∶7)吞噬速率的上升可能是由于上述原因,即細(xì)菌濃度低時,攝食速率與食物濃度成正比所致;而由C組到D組原蟲吞噬率升高的原因也與細(xì)菌密度有直接的關(guān)系,或者也可能因為特定的日糧選擇了特定的原蟲種屬,而不同種屬原蟲其吞噬速率有所不同 (Simek等,1995)所致。由于瘤胃微生態(tài)系統(tǒng)十分復(fù)雜,影響原蟲吞噬速率的因素又較多,加之此領(lǐng)域研究中目前還沒有很多的文獻(xiàn)可以參考,因此以上研究結(jié)果或推斷需在進一步的試驗中加以驗證。

    3.4 不同精粗比底物對瘤胃微生態(tài)和微生物蛋白微循環(huán)的影響 若以通常報道的瘤胃原蟲吞噬細(xì)菌的速率102~104cells/mL、 原蟲105~106cells/mL、細(xì)菌109~1011cells/mL計,則由于原蟲的吞噬約12 h可使得細(xì)菌更替一次。研究同時表明原蟲不存在時細(xì)菌的更替率為0.3%~2.7%,而原蟲存在時更替率增加為2.4%~3.7%。反芻動物瘤胃內(nèi)的原蟲無法利用氨合成自身蛋白,必須利用飼料和微生物中的蛋白質(zhì)作為其主要的氮源。盡管原蟲具有部分降解蛋白質(zhì)的能力,但其降解速度很慢,細(xì)菌還是瘤胃中降解蛋白質(zhì)的主要微生物。細(xì)菌先將可溶性蛋白吸附在細(xì)胞表面或是吸附到不溶性蛋白質(zhì)上,再由其胞聯(lián)酶發(fā)揮降解作用。瘤胃細(xì)菌所分泌的蛋白分解酶為混合型,不同種類細(xì)菌在蛋白降解中有互補特異性的協(xié)同效應(yīng),而利于飼料蛋白質(zhì)的降解。

    由于原蟲對細(xì)菌和真菌的吞噬作用,會導(dǎo)致MCP的產(chǎn)量下降,增加宿主動物對蛋白質(zhì)的維持需求,同時由于原蟲在瘤胃內(nèi)的滯留時間較長,且在反芻過程中與氧氣接觸的機會多,大部分原蟲會因為自溶而死亡,因此原蟲氮很少能夠進入真胃和十二指腸為宿主所利用。反芻動物日糧組成不同,導(dǎo)致發(fā)酵后瘤胃pH值變化不同,因此日糧結(jié)構(gòu)被認(rèn)為是影響瘤胃原蟲數(shù)量和種屬變化的主要因素。通常情況下,采食全粗飼料的奶牛瘤胃內(nèi)含 4×105~6×105個/mL內(nèi)容物,隨著日糧中精料的增加,日糧能量也隨之提高,動物瘤胃內(nèi)的原蟲數(shù)量也將隨之提高(Dehority等,1997)。當(dāng)日糧中粗飼料含量占到40%~50%時,瘤胃內(nèi)原蟲數(shù)量最大,種類也最豐富。

    本試驗中D組具有較高的原蟲密度和最高的吞噬速率,因此其蛋白循環(huán)量最高,為1.82 g/(d·頭)。C組吞噬速率最低,但由于原蟲密度最高而細(xì)菌密度很低,所以具有最高的循環(huán)率和最短的周轉(zhuǎn)時間。B組雖然吞噬速率相對較高,但由于原蟲密度最小,而細(xì)菌密度最高,所以循環(huán)率最低,為1.94%,被更新一次的時間最長,需51.52 h,計算得出,該組菌體蛋白循環(huán)量為1.27 g/(d·頭),僅為D組的69.78%,提示該底物組合能夠較好的減少微生物蛋白的循環(huán)量。值得注意的是A組,雖然吞噬量最低,菌體蛋白循環(huán)量也僅為1.09 g/(d·頭),但由于其細(xì)菌密度為四組中最小,所以細(xì)菌的循環(huán)率依然較高,為2.52%,并可在39.75 h內(nèi)被周轉(zhuǎn)更新一次。這提示:在粗飼條件下原蟲的吞噬更容易影響微生物蛋白產(chǎn)量和宿主蛋白質(zhì)營養(yǎng),而且研究也表明,在缺乏外源蛋白情況下原蟲會迅速降解瘤胃內(nèi)源蛋白,并攝入和消化細(xì)菌蛋白(Wallace等,1997)。

    4 結(jié)論

    4.1 日糧精粗比顯著影響瘤胃微生物細(xì)胞的密度。原蟲密度以C組(5∶5)最高,而細(xì)菌密度則以B 組(3∶7)最高,A 組(1∶9)原蟲和細(xì)菌的密度均較低。

    4.2 日糧精粗比顯著影響瘤胃原蟲吞噬細(xì)菌N的速率及吞噬量。各組吞噬N量分別為:18.11×105、21.16 ×105、20.95 ×105、30.34 ×105pg/(mL·h),以A組最低。

    4.3 日糧精粗比顯著影響山羊瘤胃內(nèi)菌體蛋白的微循環(huán)。每天每頭山羊因原蟲的吞噬而帶來的菌體蛋白內(nèi)循環(huán)量各組分別為:1.09、1.27、1.26、

    1.82 g,其中以 C 組(5∶5)循環(huán)率最大(2.79%),D組(7∶3)蛋白循環(huán)量最高,而 B 組(3∶7)循環(huán)率最低(1.94%),且蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)量僅為 D 組(7∶3)的69.78%,可有效減少菌體蛋白循環(huán)量。

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