北沙參乙醇提取物對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)急性肝損傷的保護(hù)作用

金香男，鄭明昱*（.龍井中醫(yī)醫(yī)院內(nèi)科病房，吉林龍井33400；.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)部中醫(yī)學(xué)院，吉林延吉33000）

北沙參乙醇提取物對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)急性肝損傷的保護(hù)作用

金香男1，鄭明昱2*
（1.龍井中醫(yī)醫(yī)院內(nèi)科病房，吉林龍井133400；2.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)部中醫(yī)學(xué)院，吉林延吉133000）

目的觀察北沙參乙醇提取物（EEAR）對(duì)CCl4誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷的影響。方法將SD大鼠分為5組：正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組及藥物大、小劑量組。分別用生理鹽水、EEAR和Silibinin灌胃7 d，最后1 d腹腔注射CCl4，檢測(cè)血清中ALT、AST、ALP；HE染色觀察病變程度；黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法分別檢測(cè)肝勻漿SOD、CAT和MDA。結(jié)果與對(duì)照組比較，CCl4組血清中ALT、AST、ALP的含量顯著增加（P＜0.05），HE染色肝組織變性壞死累及全小葉。與CCl4組比較，EEAR+CCl4組血清中ALT、AST、ALP的含量顯著下降（P＜0.05）；HE染色病變程度較輕；胞漿中SOD和CAT活性提高、MDA水平降低（P＜0.05）。結(jié)論EEAR對(duì)CCl4所致的大鼠急性肝損傷具有一定的保護(hù)作用。

北沙參；大鼠；四氯化碳；肝損傷

北沙參（Radix Glehnic）味甘微苦，性微寒，歸肺胃經(jīng)，能清肺熱、補(bǔ)肺陰。臨床用于陰虛肺熱燥咳痰黏，熱病傷津的治療?，F(xiàn)代研究認(rèn)為，沙參有祛痰、強(qiáng)心、抗真菌作用，而在免疫藥理方面國(guó)內(nèi)外研究較少［1-2］。故本實(shí)驗(yàn)通過觀察EEAR作用于CCl4肝損傷的急性動(dòng)物模型，探討EEAR對(duì)CCl4急性肝損傷的影響。

1 材料與方法

1.1 試劑儀器SD大鼠，四氯化碳，乙醚、HE染液，SOD、CAT、MDA測(cè)定試劑盒，考馬斯亮臟蛋白測(cè)定試劑盒，多聚甲醛，酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀，Microfuge 22R臺(tái)式冷凍離心機(jī)，自動(dòng)生化分析儀。

1.2 北沙參乙醇提取物的制備取干燥的北沙參500 g加3 000 mL 70%乙醇，用萃取機(jī)萃取3 h，將取得的萃取液用濾紙過濾，然后使用回轉(zhuǎn)真空濃縮機(jī)，上清液在45℃減壓濃縮，經(jīng)冷凍干燥得粉末。

1.3 動(dòng)物分組及給藥SD大鼠50只，清潔級(jí)，雄性，體質(zhì)量（200±30）g，隨機(jī)分成5組，每組10只。對(duì)照組、CCl4組、150mg／kg EEAR+CCl4組、300mg／kg EEAR+CCl4組和50 mg／kg Silibinin+CCl4組。灌胃7 d，1次／d，0.5 mL／次，最后1 d，對(duì)照組腹腔注射生理鹽水，其余各組腹腔注射CCl41 mL／kg［3］。16 h后乙醚麻醉打開胸腔取血，取肝臟。

1.4 血清ALT、AST、ALP測(cè)定大鼠打開胸腔后，從左心室直接抽5mL，37℃溫浴10min，3 000 r／min離心10min，取上血清1 000μL，參照試劑盒的說明書測(cè)定ALT、AST、ALP。

1.5 肝勻漿SOD、CAT與MDA檢測(cè)4℃生理鹽水沖洗肝表面，稱取0.5 g肝組織，加入9mL生理鹽水，煎碎，研磨，制備5%的肝勻漿，2 000 r／min離心10 min，取上清1mL，4℃10 000 r／min離心15min，上清為胞漿待測(cè)。沉淀加入1 mL生理鹽水，利用細(xì)胞超聲破碎儀，制備成10%的線粒體勻漿待測(cè)。按SOD、MDA試劑盒操作說明，檢測(cè)胞漿和線粒體中的SOD、CAT活性和MDA含量。

1.6 肝組織病理學(xué)觀察肝組織學(xué)觀察在同一部位切取1塊肝組織，以10%甲醛固定后制備石蠟切片，HE染色，在光鏡下觀察肝組織變化。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±s）表示，SPSS 11.0軟件進(jìn)行完全隨機(jī)方差分析（Oneway ANOVA），組間比較采用LSD法。

2 結(jié)果

2.1 北沙參對(duì)血清中ALT、AST、ALP活性的影響見表1。

2.2 北沙參對(duì)肝勻漿SOD、CAT與MDA含量的影響見表2。

表1 北沙參對(duì)CCl4所致肝損傷小鼠血清中ALT、AST及ALP活性的影響±s，n＝10）

表1 北沙參對(duì)CCl4所致肝損傷小鼠血清中ALT、AST及ALP活性的影響±s，n＝10）

注：與模型組比較，＃P＜0.05。

組別ALT／（U／L）AST／（U／L）ALP／（U／L）正常組41.7±3.6 66.50±5.3 96.50±5.3模型組156.4±10.2 210.40±13.7 301.60±14.6 EEAR 300／（mg·kg）130.1±7.3 150.40±11.6 220.30±12.5＃EEAR 300／（mg·kg）86.4±8.9 110.38±7.4＃160.42±13.3＃Silibinin 50／（mg·kg）71.6±6.4 91.90±7.2＃130.30±14.3＃

表2 北沙參對(duì)CCl4誘導(dǎo)大鼠肝組織中SOD、CAT及MDA含量的影響±s，n＝10）

表2 北沙參對(duì)CCl4誘導(dǎo)大鼠肝組織中SOD、CAT及MDA含量的影響±s，n＝10）

注：與模型組比較，＃P＜0.05。

組別SOD／（U／mL）CA／（U／mL）MDA／（mmol／mL）正常組101 2.3±15.3 92.30±18.3 7.5±1.1模型組69.8±10.7 62.56±11.3 11.7±1.6 EEAR 300／（mg·kg）88.4±12.8 68.50±12.6 9.3±1.2 EEAR 300／（mg·kg）96.8±14.4＃80.80±14.3＃8.3±1.4＃Silibinin 50／（mg·kg）106.2±13.6＃85.00±14.5＃8.0±1.4＃

結(jié)果與CCl4組比較，EEAR+CC4組胞漿中SOD、CAT的活性顯著增加（P＜0.05），MDA的含量顯著降低（P＜0.05），線粒體中的CCl4活性增加，MDA含量降低無顯著差異；EEAR+CCl4組胞漿和線粒體中SOD、CAT活性均顯著增加（P＜0.05），MDA含量降低無顯著差異。

2.3 北沙參對(duì)肝組織變性壞死的影響光鏡下可見正常對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝索結(jié)構(gòu)清晰可辨，未見肝細(xì)胞變性、壞死等病理變化。模型對(duì)照組改變明顯，肝小葉失去正常結(jié)構(gòu)，肝細(xì)胞不同程度的壞死伴炎細(xì)胞浸潤(rùn)（中性粒細(xì)胞為主），嗜酸性增強(qiáng)，部分可見濁腫，體積增大，呈現(xiàn)氣球樣病變。陽(yáng)性對(duì)照組、大劑量給藥組與模型對(duì)照組比較上述改變有一定減輕。大劑量給藥組炎性肝細(xì)胞明顯減少，肝細(xì)胞脂肪變性明顯好轉(zhuǎn)，正常肝細(xì)胞數(shù)目增多。小劑量給藥組效果較差。

3 討論

CCl4在肝微粒體細(xì)胞色素P-450酶激活下產(chǎn)生活性自由基CCl3－，可進(jìn)一步與氧反應(yīng)，形成具有更強(qiáng)反應(yīng)活性的CCl3O－，這些自由基與肝細(xì)胞內(nèi)大分子發(fā)生共價(jià)結(jié)合，也可攻擊肝細(xì)胞包膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化，損傷肝細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能，使膜通透性升高，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹壞死，肝損傷是由多種病因引起并且可以有多種因素參與的復(fù)雜過程。CCl4長(zhǎng)期作用后可導(dǎo)致膠原纖維沉積，可能是CCl4誘發(fā)肝纖維的機(jī)制之一。CCl4注射后可以發(fā)生部分肝被膜的破壞，被膜下組織出血，并可導(dǎo)致血纖維蛋白析出、以嗜酸性白細(xì)胞為主的炎性細(xì)潤(rùn)，還可以導(dǎo)致肝細(xì)胞發(fā)生空泡變性，并發(fā)生肝細(xì)胞壞死。本研究HE染色病理切片證實(shí)了北沙參乙醇提取物較CCl4組顯著改善肝小葉變性、壞死的范圍和程度。SOD和CAT是機(jī)體內(nèi)清除自由基的特異酶類，其活性的降低表明機(jī)體內(nèi)自由基產(chǎn)生的增加，其中CAT起著重要的作用。它們?cè)隗w內(nèi)具有清除有害過氧化物，減輕和阻斷脂質(zhì)過氧化鏈鎖反應(yīng)等作用。當(dāng)自由基增加到一定程度時(shí)，清除自由基的特異酶類如SOD、CAT等的活性就降低，機(jī)體清除自由基的能力下降，造成自由基在體內(nèi)堆積，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物如MDA等增加，最終導(dǎo)致機(jī)體的脂質(zhì)過氧化而致?lián)p傷。因此，北沙參乙醇提取物的保肝效應(yīng)可能與提前預(yù)防給藥增加了肝臟抗氧化的儲(chǔ)備有關(guān)。

［1］中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：66.

［2］原忠，簟眾，朱靜娟，等.HPLC測(cè)定北沙參中腺苷的含量［J］.中國(guó)中藥雜志，2005，30（17）：1391-1392.

［3］Ha KT，Yoon SJ，Choi DY.Protective effect of LyciuMchinense fruit on carbon tetrachloride－induced hepatotoxicity［J］.Journal of Ethnopharmacology，2005，96：529-535.

R285.5

A

1007－4813（2010）06－0828－02

2010－10－11）

金香男，女，大學(xué)本科。研究方向：肝病研究。

*通信作者：鄭明昱，碩士，講師。Tel：0433-2436025。