病理組織切片裂隙補(bǔ)救方法的技術(shù)改良

戴煒力，王群姬

(1.浙江省腫瘤醫(yī)院 病理科，浙江 杭州 310022；2.溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院 病理科，浙江溫州 325000)

在常規(guī)石蠟切片過程中，我們常常會把大小不等的標(biāo)本進(jìn)行混合固定脫水處理，由此難免會出現(xiàn)標(biāo)本處理不均的現(xiàn)象：或大的組織處理不足，或小的組織處理過度，使得部分組織變脆、變硬。組織切片常常表現(xiàn)為有邊緣不齊的“龜殼狀”（見圖1）和“百葉窗樣”裂隙。究其原因往往與組織脆性增加有關(guān)，若將此蠟塊再行低溫冷凍后切片，此種裂隙則更為明顯和嚴(yán)重。為了補(bǔ)救這類問題蠟塊，我們通過與兄弟單位的技術(shù)交流及自身的實(shí)踐探索，發(fā)現(xiàn)適當(dāng)使用氨水能有效軟化組織，降低組織脆性，減少裂隙出現(xiàn)，且更有利于蠟塊切出完好的蠟片?，F(xiàn)報告如下。

1 材料、方法和結(jié)果

1.1 材料 選取我院2008年行常規(guī)石蠟制片中組織蠟片出現(xiàn)裂隙的蠟塊358只，其中包括淋巴結(jié)、脾臟、肝臟、腎臟、子宮、乳腺等手術(shù)切取標(biāo)本，同時含有內(nèi)鏡、穿刺活檢標(biāo)本。試劑：純氨水（上海三鷹化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)）500 mL。

1.2 方法 ①將此類容易產(chǎn)生裂隙的組織蠟塊放入冷水中（水溫0～5 ℃）約10 min。②將蠟塊放上切片機(jī)小心粗修至暴露整個組織切面，然后細(xì)切蠟片10余張（此蠟片棄之不用），再將粗切把手逆時針轉(zhuǎn)動1/4～1/2圈以退刀。③用脫脂棉球蘸取足量的純氨水，覆蓋在細(xì)切后的組織面上約10 s，再行細(xì)切，直至有組織蠟片順利切出，取前面3～5張展于裱片機(jī)內(nèi)。④待蠟片充分展平后迅速裱于載玻片上。⑤常規(guī)烤片，染色，封固。

1.3 結(jié)果 用此類方法處理組織，切片平整，結(jié)構(gòu)完好，除“龜殼狀”裂紋尚存外（但明顯縮?。┢溆嗔严毒?，組織染色無明顯差異（見圖2）。

圖1 標(biāo)本處理過度，組織變脆，變硬，切片呈“龜殼狀”裂紋

圖2 經(jīng)氨水處理再行切片，組織結(jié)構(gòu)完好，“龜殼狀”裂紋明顯縮小，切片染色艷麗

2 討論

常規(guī)制片中出現(xiàn)裂隙是我們常規(guī)技術(shù)工作中經(jīng)常碰到的問題，此類問題切片不僅影響切片質(zhì)量，有時還會導(dǎo)致病理診斷的困難，更有甚者連蠟片都很難切出。馬恒輝等[1]提出導(dǎo)致切片裂隙有諸多原因，在實(shí)際操作中，組織處理因素是首要因素，由于甲醛、乙醇、二甲苯三者對組織均有不同程度的硬化作用，其過度處理必然導(dǎo)致組織彈性降低，表現(xiàn)為各種間質(zhì)成分（特別是膠原、網(wǎng)狀纖維）張力下降，脆性增加，發(fā)生斷裂而呈“龜殼狀”裂紋；或者尚未發(fā)生斷裂，但組織過度冷凍后切片，切出的蠟片在室溫中迅速膨脹，而呈“百葉窗樣”裂隙。當(dāng)然諸如子宮、乳腺等組織纖維含量極為豐富，過硬的組織蠟塊接觸刀鋒產(chǎn)生震動，也會出現(xiàn)波紋裂隙。

鑒于此，傳統(tǒng)病理技術(shù)的做法是在蠟塊暴露面哈氣或擦少量溫水以求軟化組織或降低組織與室內(nèi)的溫差，結(jié)果往往是組織切片過厚或難以切出蠟片。馬恒輝等[3]用 5 mmol/L的鹽酸（HCl）浸泡來處理有裂隙的組織，此法雖能有效防止裂隙，但較費(fèi)時且組織膨脹較為明顯，核著色困難，切片紅染[2]。而本資料介紹的氨水分子式為NH4OH，能解離為NH3和H2O，使之達(dá)到一種動態(tài)平衡。用氨水處理與上述方法相比有以下優(yōu)點(diǎn)：①氨水是一種很好的軟化劑，此法源于工業(yè)上壓縮木質(zhì)技術(shù)用氨水來軟化木材[3]，可軟化組織間質(zhì)的各種纖維，增加彈性和張力。②氨水解離出的NH3分子量小于HCl，更具穿透力，所以用時極短，10 s左右就深達(dá)20～30μm。加之此法無需取下蠟塊，方便快捷。③氨水解離時將吸收周圍的熱能，在不降低蠟塊表面溫度的情況下，減少了蠟塊切面與周圍的溫差，在防止蠟塊膨脹的同時又能順利切出蠟片。④用氨水來處理蠟塊表面時，NH3穿透組織表面，為了達(dá)到氨水的平衡，也會帶進(jìn)一定量的H2O，使得原本處理過度的組織得到一定的恢復(fù)。⑤用氨水處理的蠟塊，對硬化的子宮和乳腺等組織也有明顯的軟化作用，故也能防止波紋裂隙的產(chǎn)生。

應(yīng)用氨水時，也應(yīng)注意以下幾項(xiàng)：①粗修蠟塊后，宜細(xì)切蠟片10余張并丟棄，以防后繼細(xì)切蠟片產(chǎn)生空洞。②因氨水處理后對蠟塊作用只有深達(dá)表面20～30μm，所以在此步驟之前必須退刀，細(xì)切出的蠟片也只能取前面3～5張。③蠟片置入裱片機(jī)內(nèi)，待充分展平后方可裱貼于載玻片，以防產(chǎn)生褶皺。④盡管此法用時極短，但蠟片仍存留少量氨水，因此染色前建議用流水先進(jìn)行沖洗。

[1]馬恒輝,章如松.組織切片裂隙產(chǎn)生的原因與對策[J].診斷病理學(xué)雜志,2007,14(6):474.

[2]馬恒輝,周曉軍.HE染色常見問題與對策[J].臨床與實(shí)踐病理學(xué)雜志,2008,24(4):478-481.

[3]方桂珍.木材功能性改良[M[.北京:化工工業(yè)出版社,2007:128-131.