單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復位后對側(cè)睪丸組織CGRP和LDH的測定

包小周，秦樂，陳肖鳴

(溫州醫(yī)學院附屬育英兒童醫(yī)院 小兒外科，浙江 溫州 325035)

單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)好發(fā)于青春前期男性，除引起同側(cè)睪丸受損外，也可累及對側(cè)睪丸[1]。降鈣基因相關肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）是目前已知的生物體內(nèi)最強大的舒血管活性肽[2]，近幾年來，被廣泛應用于腦、心、肝、腎等組織器官的缺血再灌注損傷研究；但其在睪丸組織中的作用罕見報道。本研究擬通過動物實驗觀察單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復位后CGRP及乳酸脫氫酶（lactate dehydrojgenase，LDH）在對側(cè)睪丸組織中濃度變化，了解CGRP在對側(cè)睪丸中的作用。

1 材料和方法

1.1 動物分組 選取處于青春發(fā)育前期28～30 d的健康雄性SD大鼠30只，體重150～200 g，隨機分為假手術組、扭轉(zhuǎn)復位組和扭轉(zhuǎn)切除組，每組10只。

1.2 動物模型建立 所有大鼠均在術前以25%烏拉坦行腹腔注射全麻。假手術組將左側(cè)陰囊打開，分離暴露左側(cè)睪丸后即予固定縫合。扭轉(zhuǎn)復位組和扭轉(zhuǎn)切除組先依Turner法[3]建立左側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)模型：左下腹小切口，游離左側(cè)睪丸，切斷睪丸引帶，分離周圍組織至附睪頭，睪丸順時針扭轉(zhuǎn)720 °，固定扭轉(zhuǎn)側(cè)睪丸防止自然復位，維持4 h后原切口打開，扭轉(zhuǎn)復位組復位扭轉(zhuǎn)睪丸并固定后關閉切口；扭轉(zhuǎn)切除組不予復位，直接切除扭轉(zhuǎn)的睪丸及附睪，結(jié)扎精索末端后縫合切口。

1.3 標本制備 各組大鼠分別于術后4 h和24 h時以快速脫頸法處死5只，采集未扭轉(zhuǎn)側(cè)睪丸標本用于制備組織勻漿。

1.4 檢測方法 按試劑盒要求制備組織勻漿；以ELISA法測定CGPP、LDH濃度。均嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.5 統(tǒng)計學處理方法 多組比較用單因素方差分析，組間兩兩比較方差齊性用LSD檢驗，方差不齊性用Dunnett T3檢驗。

2 結(jié)果

2.1 相對于假手術組與扭轉(zhuǎn)切除組，扭轉(zhuǎn)復位組的對側(cè)睪丸CGRP、LDH濃度（見表1）均在術后4 h起有明顯升高（P<0.05），而假手術組與扭轉(zhuǎn)切除組的同類指標比較差異無顯著性。

表1 大鼠CGRP及LDH濃度值

2.2 Tuner法是較為成熟的睪丸扭轉(zhuǎn)模型制作方法，經(jīng)不斷改良，現(xiàn)有操作有創(chuàng)口小、出血較少的優(yōu)點，故本實驗中無大鼠死亡；扭轉(zhuǎn)復位組大鼠煩躁不安明顯，其余2組未見此現(xiàn)象。麻醉蘇醒后各組大鼠飲食情況良好，按統(tǒng)一條件飼養(yǎng)，未使用其他藥物，但扭轉(zhuǎn)復位組大鼠煩躁不安感明顯，其余2組未見此現(xiàn)象。

2.3 術后4 h及24 h時取材時見扭轉(zhuǎn)側(cè)睪丸呈黑紫色，淤血腫脹明顯（見圖1）；各組對側(cè)睪丸肉眼可見改變不甚明顯（見圖2）；既往曾行類似實驗并行病理檢查，示扭轉(zhuǎn)側(cè)睪丸出現(xiàn)大面積凝固性壞死，而對側(cè)睪丸亦有不同程度受損[4]。

圖1 扭轉(zhuǎn)側(cè)睪丸

圖2 對側(cè)睪丸

3 討論

組織低氧時可導致乳酸堆積，從而引起LDH濃度上升，因此LDH水平可以反映組織的低氧程度。本實驗中，相比于扭轉(zhuǎn)切除組與假手術組，扭轉(zhuǎn)復位組LDH的濃度4 h時即見明顯升高，示對側(cè)睪丸組織存在低氧情況。我們此前的類似實驗也已證實對側(cè)睪丸存在一定程度的缺血再灌注損傷[4，6]，與本實驗結(jié)果相符。

而CGRP作為目前已知的生物體內(nèi)最強大的舒血管活性肽，在周圍神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛分布，具有傳遞傷害性感覺信息、參與痛覺信息傳入的調(diào)制、擴張組織血管等作用[2]。本實驗中，相比于扭轉(zhuǎn)切除組與假手術組，對側(cè)睪丸組織中的CGRP 4 h時即開始升高，間接說明對側(cè)睪丸存在明顯的血管擴張現(xiàn)象。國內(nèi)陳林等[5]應用B超觀察單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復位后對側(cè)睪丸血流情況，發(fā)現(xiàn)直至復位后72 h，對側(cè)睪丸的血供仍遠高于對照的假手術組，與本實驗結(jié)果相符。

據(jù)本實驗中對側(cè)睪丸CGRP、LDH的濃度增高，以及既往實驗中發(fā)現(xiàn)的對側(cè)睪丸存在缺血再灌注損傷的情況，我們推測由于單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復位后對側(cè)睪丸存在一定程度的缺血、低氧，引起局部包括自由基、一氧化氮、乳酸等在內(nèi)的大量有毒物質(zhì)積聚[6]，進而通過刺激廣泛分布于對側(cè)睪丸的周圍神經(jīng)而導致局部CGRP大量釋放，引起對側(cè)睪丸血管擴張，血供增加；就血管擴張本身而言，我們推測可能為一種拮抗組織缺血低氧的反應性保護機制，具體尚待進一步實驗證實。

值得指出的是，CGRP與LDH兩項指標在假手術組與扭轉(zhuǎn)切除組對側(cè)睪丸的比較中差異均無顯著性，提示扭轉(zhuǎn)切除組中大鼠的對側(cè)睪丸未受明顯影響。我們在既往的類似研究中也已證實扭轉(zhuǎn)切除組的對側(cè)睪丸無明顯受損[6]。因此，我們認為在證實單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)并出現(xiàn)嚴重壞死的情況下，不予復位而行睪丸切除可能對另側(cè)睪丸組織有保護作用。

[1] 林濤,李旭良. 單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)后對另側(cè)睪丸影響的研究進展[J].臨床小兒外科雜志,2003,2(6):442-443.

[2] 謝樂斯,鄭林豐,曾志成,等. 大鼠脊神經(jīng)后根切斷后脊髓和背根神經(jīng)節(jié)CGRP的表達變化 [J].神經(jīng)解剖學雜志,2007,23(2):209-213.

[3] Turner TT, Bang HJ, Lysiak JL, et al.The molecular pathology of experimental testicular torsion suggests adjunct therapy to surgical repair [J].J Urol,2004,172(6):2574-2578.

[4] 王浩,秦樂,陳肖鳴,等. 大鼠一側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)后切除對另側(cè)睪丸組織的保護作用 [J].溫州醫(yī)學院學報,2009,39(3):209-211.

[5] 陳林,詹維偉,呂琛,等. 單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)后對側(cè)睪丸損傷的超聲造影實驗研究 [J].中華超聲影像學雜志,2008,17(11):998-1001.

[6] 秦樂,林孝坤,陳肖鳴,等. 一氧化氮在大鼠單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復位后對側(cè)睪丸早期損傷中的作用 [J].溫州醫(yī)學院學報,2008,38(3):197-199.