三七總皂苷對(duì)羅非魚(yú)體成分及非特異免疫的影響

楊志剛 忻 晨 闕有清 鄭劍偉

羅非魚(yú)具有生長(zhǎng)快、食性雜、抗病力強(qiáng)、肉質(zhì)好、適應(yīng)性強(qiáng)、產(chǎn)量高和繁殖力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，己發(fā)展成為世界主要養(yǎng)殖魚(yú)類之一，也是我國(guó)南方各省主要養(yǎng)殖的淡水魚(yú)之一。但隨著養(yǎng)殖集約化程度不斷提高，在羅非魚(yú)養(yǎng)殖過(guò)程中，寄生蟲(chóng)疾病和細(xì)菌性等疾病給羅非魚(yú)養(yǎng)殖帶來(lái)嚴(yán)重的危害。因此，研究和推廣健康養(yǎng)殖模式，開(kāi)發(fā)綠色環(huán)保型飼料添加劑，提高水產(chǎn)動(dòng)物自身免疫力已成為急待解決的問(wèn)題。經(jīng)驗(yàn)表明，在養(yǎng)殖飼料中添加適宜的功能性添加劑可增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物的免疫性能，避免或降低高密度養(yǎng)殖帶來(lái)的負(fù)面效應(yīng)。皂苷(saponins)是一類較復(fù)雜的苷類化合物，廣泛存在于開(kāi)花植物中，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗氧化、抗菌、抗病毒、抗炎及抗誘變等生理功能。本試驗(yàn)以羅非魚(yú)為對(duì)象，在飼料中添加不同水平的三七總皂苷，研究其對(duì)羅非魚(yú)肌肉成分和血清及肝胰臟非特異免疫功能的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥品

三七總皂苷(Panax notoginseng Saponins，PNS)由浙江大學(xué)天然藥物研究室提供，純度99%。

1.2 試驗(yàn)日糧

根據(jù)羅非魚(yú)的營(yíng)養(yǎng)需要設(shè)計(jì)基礎(chǔ)飼料配方（見(jiàn)表1），以基礎(chǔ)飼料作為對(duì)照組，在基礎(chǔ)飼料中分別添加50、100、200、400、800 mg/kg的三七總皂苷作為試驗(yàn)組。

表1 基礎(chǔ)飼料配方及營(yíng)養(yǎng)水平（%）

1.3 試驗(yàn)魚(yú)和飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)用羅非魚(yú)購(gòu)自廈門鷺業(yè)水產(chǎn)有限公司，平均體質(zhì)量為(1.0±0.5)g，運(yùn)輸?shù)缴虾：Ｑ蟠髮W(xué)南匯特種水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)后，暫養(yǎng)20 d，期間投喂基礎(chǔ)飼料進(jìn)行馴養(yǎng)。馴養(yǎng)結(jié)束后，魚(yú)都能主動(dòng)過(guò)來(lái)?yè)屖?。試?yàn)開(kāi)始時(shí)，選擇體重相近的魚(yú)苗，隨機(jī)分為6組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)70尾，進(jìn)行60 d的養(yǎng)殖試驗(yàn)。每天投喂3次(08：00、13：00 和 18:00)，投喂量為魚(yú)體重 2%～5%，并根據(jù)每天攝食情況調(diào)整日投喂量，不間斷充氧；水溫26～29℃。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，每重復(fù)隨機(jī)取魚(yú)10尾，分離背部肌肉和肝胰臟，另取魚(yú)10尾，尾靜脈處采血，3000 r/min離心15 min，取血清冷凍備用。血清溶菌酶活性、血清和肝胰臟中酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性、肌肉中丙二醛含量和膽固醇含量、肝胰臟中超氧化物歧化酶活力測(cè)定均采用南京建成生物公司提供的檢測(cè)試劑盒，相應(yīng)操作參照說(shuō)明書進(jìn)行。飼料和魚(yú)肌肉中的水分、灰分、粗蛋白、粗脂肪含量均按國(guó)標(biāo)有關(guān)方法進(jìn)行測(cè)定。水分測(cè)定采用105℃烘干法；粗蛋白含量測(cè)定采用凱氏定氮法；粗脂肪含量測(cè)定采用索氏抽提法。

1.5 試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理與分析

試驗(yàn)所獲得的數(shù)據(jù)用SPSS13.0作單因素的方差分析，用Duncan's法作多重比較。

2 結(jié)果

2.1 三七總皂苷對(duì)羅非魚(yú)肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的影響（見(jiàn)表2）

從表2可以看出，飼料中添加不同水平的三七總皂苷對(duì)羅非魚(yú)肌肉中粗蛋白、粗脂肪、水分和灰分含量無(wú)顯著影響(P>0.05)。

表2 三七總皂苷水平對(duì)羅非魚(yú)肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的影響（%）

2.2 三七總皂苷對(duì)羅非魚(yú)肌肉丙二醛含量和膽固醇含量的影響

表3 三七總皂苷水平對(duì)羅非魚(yú)肌肉丙二醛含量和膽固醇含量的影響（mmol/mg）

從表3可以看出，隨著三七總皂苷添加量的增加，肌肉中丙二醛含量呈下降趨勢(shì)。其中2組和3組與對(duì)照組相比，差異不顯著(P>0.05)。其他3組與對(duì)照組相比，差異顯著（P＜0.05），但 4、5、6 組之間差異不顯著（P＞0.05）。肌肉中膽固醇含量也隨三七總皂苷添加量的增加呈下降趨勢(shì)，其中，5組肌肉中膽固醇含量最低，比對(duì)照組降低了20%（P＜0.05）。

2.3 三七總皂苷對(duì)羅非魚(yú)血清非特異免疫指標(biāo)的影響（見(jiàn)表4）

表4 三七總皂苷水平對(duì)羅非魚(yú)血清非特異免疫指標(biāo)的影響

從表4可以看出，飼料中添加三七總皂苷可以顯著提高羅非魚(yú)血清中溶菌酶的活性，其中添加量為400 mg/kg試驗(yàn)5組溶菌酶活性最高，比對(duì)照組高出38.20%（P＜0.05），且試驗(yàn) 3、4、5 組血清中溶菌酶活性顯著高于其他兩個(gè)添加組和對(duì)照組（P＜0.05），試驗(yàn)2組和對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05）。飼料中添加三七總皂苷，血清中酸性磷酸酶（ACP）活性呈增高趨勢(shì)，試驗(yàn)4、5組血清中ACP活性顯著高于其他三個(gè)添加組和對(duì)照組。添加量為800 mg/kg試驗(yàn)組血清中堿性磷酸酶（ALP）活性顯著高于其他添加組和對(duì)照組，其他各添加組和對(duì)照組之間差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 三七總皂苷對(duì)羅非魚(yú)肝胰臟非特異免疫指標(biāo)的影響（見(jiàn)表5）

表5 三七總皂苷水平對(duì)羅非魚(yú)肝胰臟非特異免疫指標(biāo)的影響

從表5可以看出，三七總皂苷添加組肝胰臟中超氧化物歧化酶(SOD)活性均高于對(duì)照組，但與對(duì)照組相比差異都不顯著（P>0.05）。試驗(yàn)4組肝胰臟中ACP活性最高，顯著高于對(duì)照組 26.78%（P＜0.05），試驗(yàn) 4、5組之間 ACP活性差異不顯著（P＞0.05），試驗(yàn)2、3、6組肝胰臟中ACP活性與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05）。隨著三七總皂苷含量的增加，肝胰臟中ALP活性呈遞增趨勢(shì)，其中試驗(yàn)5組肝胰臟中ALP活性最高。

3 討論

皂苷廣泛存在于自然界，是人參、三七、甘草、柴胡等許多中藥的主要活性成分之一。皂苷最早作為飼料添加劑是在1961年，從百合科絲蘭屬和知母屬提取的薩灑皂苷，具有天然免疫增強(qiáng)劑的作用。養(yǎng)殖試驗(yàn)表明，薩灑皂苷可顯著提高動(dòng)物的采食量、增重率和飼料轉(zhuǎn)化率，并能促進(jìn)動(dòng)物健康和提高免疫性能，減少環(huán)境污染和死亡率。從南美皂樹(shù)(Quillaja saponaria Molina)樹(shù)皮的水提取物中鑒定分離得到的皂苷Quil A可作為魚(yú)的一種天然免疫增強(qiáng)劑。Francis等（2002）[2]研究表明，鯉魚(yú)飼料中較佳皂樹(shù)皂苷的添加水平是150 mg/kg，而羅非魚(yú)飼料中的皂樹(shù)皂苷較佳添加水平是300 mg/kg，且皂樹(shù)皂苷促生長(zhǎng)效果在添加初期較顯著。皂樹(shù)皂苷具有較強(qiáng)的溶血性，這對(duì)其作為飼料添加劑的開(kāi)發(fā)有一定的限制。三七總皂苷溶血性遠(yuǎn)較皂樹(shù)皂苷小，應(yīng)用于動(dòng)物無(wú)毒副作用，有望研發(fā)成為水產(chǎn)動(dòng)物一種新型天然免疫增強(qiáng)劑。

丙二醛的含量與機(jī)體抗氧化性能密切相關(guān)，丙二醛作為脂質(zhì)氧化的中間產(chǎn)物，是衡量機(jī)體脂質(zhì)氧化程度的一個(gè)重要指標(biāo)。辜玲芳等（2008）[3]研究發(fā)現(xiàn)，皂苷有降低異育銀鯽體內(nèi)丙二醛含量的趨勢(shì)，本試驗(yàn)得出類似的結(jié)果。SOD是機(jī)體重要抗氧化酶系，可及時(shí)清除體內(nèi)O2-、H2O2等過(guò)氧化物。龐素鳳等(2008)[4]試驗(yàn)顯示，在銀鯽的飼料中添加1.0 mg/kg的云芝多糖，可提高其血清中SOD的活性，但如果添加水平過(guò)高或過(guò)低，則沒(méi)有顯著影響。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在羅非魚(yú)飼料中添加適宜水平三七總皂苷能提高其肝胰臟SOD的活性。溶菌酶是魚(yú)類非特異性免疫系統(tǒng)的主要成分之一，在魚(yú)體抵抗感染性致病菌的最前沿防御機(jī)制中起著重要作用。Guojun Yin等(2006)[5]試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加0.1%和0.5%的黃芪可以明顯提高羅非魚(yú)血清中的溶菌酶活性。ACP和ALP是一類對(duì)底物要求較低的磷酸單脂水解酶，直接參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和鈣磷代謝，對(duì)脊椎動(dòng)物骨骼的形成具有重要作用。另外，ACP是高等動(dòng)物體內(nèi)巨噬細(xì)胞溶酶體的標(biāo)志酶；ALP能夠通過(guò)改變病原體的表面結(jié)構(gòu)，增強(qiáng)被侵襲機(jī)體對(duì)病原體的識(shí)別和吞噬能力，因而有助于提高魚(yú)體的抗病力。

4 結(jié)語(yǔ)

本研究結(jié)果表明，飼料中添加適宜水平的三七總皂苷，對(duì)羅非魚(yú)肌肉中的粗蛋白、粗脂肪、水分和灰分的含量沒(méi)有顯著影響，卻顯著降低了肌肉中的丙二醛和膽固醇含量，可以提高羅非魚(yú)肝胰臟超氧化物歧化酶活性，顯著提高羅非魚(yú)血清溶菌酶活性、血清及肝胰臟酸性磷酸酶活性和堿性磷酸酶活性，增強(qiáng)羅非魚(yú)血清及肝胰臟非特性免疫功能，對(duì)促進(jìn)羅非魚(yú)的無(wú)公害養(yǎng)殖和生產(chǎn)低脂、低膽固醇的安全羅非魚(yú)具有重要意義。

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[3]辜玲芳，侯永清，丁斌鷹，等.幾種植物提取物對(duì)異育銀鯽生長(zhǎng)性能和血液生化指標(biāo)的影響[J].淡水漁業(yè)，2008，38（2）：23-26.

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