沙蔥中黃酮類化合物對小鼠非特異性免疫機能影響的研究

趙春艷 敖長金 張興夫

蔥屬植物在我國資源豐富，品種繁多，黃酮化合物是其中重要的活性成分，在防治心血管疾病及抗腫瘤等方面有著潛在的療效，極具開發(fā)價值。沙蔥為生長在草原、沙地的百合科植物，在內(nèi)蒙古草原、沙地分布極為廣泛，資源豐富。沙蔥也是放牧羊喜愛采食的牧草，根據(jù)當?shù)啬羺^(qū)人民多年的經(jīng)驗，羊采食沙蔥后生長速度加快，發(fā)病率減少，而且可顯著改善肉的品質(zhì)和風味。

張美莉等（1997）研究指出，沙蔥所含營養(yǎng)成分較全面，含有較多的蛋白質(zhì)、脂肪等物質(zhì)[1]。巴俊杰等（2002）指出，沙蔥所含的氨基酸中，谷氨酸含量最高，其次是天門冬氨酸，異亮氨酸第三。EAA/TAA為40.45%，達到了 FAO/WHO（1973）提出的理想蛋白質(zhì)模式[2]。盧媛（2002）研究指出，沙蔥含有較高的粗蛋白（30.66%DM）和代謝能（11.85 MJ/kg DM），較低的中性洗滌纖維（17.55%DM），是一種營養(yǎng)價值較高的優(yōu)等牧草[3]。趙麗華（2005）試驗研究證明，飼喂沙蔥可以明顯改善舍飼羊羊肉的品質(zhì)和風味[4]。張巧娥（2007）研究發(fā)現(xiàn)，沙蔥及提取物降低了飽和脂肪酸（SFA）的含量，同時提高了單不飽和脂肪酸（MUFA）和多不飽和脂肪酸（PUFA）的含量，從而提高了肉的品質(zhì)，降低了肉的膻味[5]。劉戰(zhàn)（2007）研究發(fā)現(xiàn)，通過對臟器系數(shù)的計算，以及剖檢和病理檢查均未見心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟的明顯病理變化，表明沙蔥提取物幾乎不對小白鼠的臟器構(gòu)成損傷，也未使小白鼠出現(xiàn)臨床中毒表現(xiàn)[6]。

黃酮類化合物廣泛存在于蔬菜、水果、牧草和藥用植物中，是植物在長期自然選擇過程中產(chǎn)生的一些次級代謝產(chǎn)物。蔥屬植物中已知的黃酮大都具有酚羥基結(jié)構(gòu)，因此，是較好的抗氧化劑[7]。這類物質(zhì)的來源范圍非常廣，對心腦血管疾病、人體組織的衰老、消除人體過多活性自由基、癌癥、以及其他身體調(diào)節(jié)功能等都有密切相關(guān)[8]。

動物的營養(yǎng)狀況直接影響免疫機能的觀念己經(jīng)越來越被人們廣泛接受，通過營養(yǎng)調(diào)控動物的免疫機能從而改善動物的健康狀況逐漸成為動物營養(yǎng)研究領(lǐng)域一個重要的熱點(Ferket等,2000)[9]。因此，本研究的目的是分離純化沙蔥中的黃酮類化合物，以昆明種小白鼠為動物模型，研究飼喂沙蔥黃酮對機體非特異性免疫機能的影響。

1 試驗材料和方法

1.1 試驗材料

1.1.1 沙蔥來源

沙蔥采自內(nèi)蒙古伊克昭盟，沙蔥黃酮為本實驗室提取純化。

1.1.2 試驗動物飼養(yǎng)管理及日糧配方

試驗鼠系昆明種小白鼠，購于內(nèi)蒙古大學實驗動物中心，按試驗動物飼養(yǎng)方法飼養(yǎng)，基礎(chǔ)日糧配方見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧配方

1.1.3 試驗儀器

分析天平、手術(shù)剪、眼科鑷等常用手術(shù)器械、微量移液器、一次性塑料試管、試管架、旋渦混勻器、冰箱、水浴鍋和TU-1800PC紫外可見分光光度計。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗設(shè)計與試驗方案

純昆明種小鼠 480只，體重（20±2）g，購于內(nèi)蒙古大學實驗動物中心，按試驗動物飼養(yǎng)方法飼養(yǎng)。將小鼠隨機分為4組，每組120只（雌雄各半），分籠飼養(yǎng)。試驗設(shè)計與方案見表2。

表2 試驗設(shè)計與方案

預飼期5 d，正式試驗期14 d，正式試驗期內(nèi)2次宰殺采血并分離血清，-20℃保存；采少量肝臟組織，研磨，以生理鹽水稀釋成10%和1%的組織勻漿，-20℃保存。

1.2.2 測定指標及數(shù)據(jù)計算

免疫器官指數(shù)、酸性磷酸酶活性、巨噬細胞吞噬功能、溶菌酶含量。

每組隨機抽取10只稱重、剖殺，取出胸腺、脾臟用生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸凈組織表面水分后稱重，計算免疫器官與體重的相對重量。

免疫器官指數(shù)＝免疫器官（脾、胸腺）鮮重（g）×10/屠體重（g）。

酸性磷酸酶活性和溶菌酶含量采用試劑盒測定法，均由南京建成生物工程研究所提供。

巨噬細胞吞噬功能采用碳廓清法[10]。按0.10 ml/10 g的劑量給各組小鼠尾靜脈注射以生理鹽水稀釋4倍的印度墨汁，注射后2、20 min分別從小鼠的左眼眶和右眼眶取血20 μl，加入0.1%Na2CO3溶液2.5 ml中，搖勻，以0.1%Na2CO3溶液作空白對照。用TU-1800PC型紫外可見分光光度計于600 nm處測吸光度值（OD值），將小鼠處死，取肝、脾稱重，按下列公式計算出碳廓清指數(shù)（Carbon dissection index）κ和吞噬系數(shù)（Phagocytic coefficient）α。

式中OD1、OD2分別為2、20 min時，取血測得的吸光度值，t2、t1為注射印度墨汁后采血的時間，W為體重，WLS為肝+脾合重。

2 數(shù)據(jù)處理

本試驗的數(shù)據(jù)用Excel初步整理后，采用SAS 9.0軟件包中的ANOVA過程進行方差分析，多重比較用Duncan's法。

3 試驗結(jié)果和分析

3.1 沙蔥黃酮對小鼠免疫器官指數(shù)的影響（見表3）

表3 沙蔥黃酮對小鼠免疫器官指數(shù)的影響

從表3可以看出，試驗第7 d時，沙蔥組的脾指數(shù)顯著高于對照組、沙蔥黃酮純化組和沙蔥黃酮粗提物組（P＜0.05），沙蔥黃酮純化組顯著高于對照組和沙蔥黃酮粗提物組（P＜0.05），沙蔥黃酮粗提物組高于對照組，但差異不顯著（P＞0.05）；第 14 d時，試驗各組的脾指數(shù)高于對照組，但差異不顯著（P＞0.05），其中沙蔥黃酮純化組高于其它各組。試驗第7 d時，試驗各組的胸腺指數(shù)與對照組差異不顯著，其中沙蔥黃酮純化組高于其它各組；第14 d時，沙蔥黃酮純化組的組胸腺指數(shù)顯著高于其它各組（P＜0.05），沙蔥黃酮粗提物組高于對照組和沙蔥組，但差異不顯著（P＞0.05），對照組和沙蔥組差異不顯著（P＞0.05）。

3.2 沙蔥黃酮對外周血和肝臟酸性磷酸酶（Acid Phosphatase,ACP）活性的影響（見表 4）

表4 沙蔥黃酮對血清和肝組織ACP活性的影響

從表4可以看出，試驗第7 d時，試驗組的血清ACP含量顯著高于對照組（P＜0.05），試驗組之間差異不顯著（P＞0.05）；第14 d時，沙蔥黃酮純化組的血清ACP含量顯著高于其它各組（P＜0.05），而沙蔥組和沙蔥黃酮粗提物組高于對照組，差異不顯著（P＞0.05）。試驗第7 d時，沙蔥組和沙蔥黃酮純化組肝臟ACP含量顯著高于對照組（P＜0.05），沙蔥黃酮粗提物組高于對照組，但差異不顯著（P＞0.05），第 14 d時，試驗各組肝臟ACP含量顯著高于對照組（P＜0.05），試驗各組之間差異不顯著（P＞0.05）。隨著試驗期的延長，血清中ACP含量顯著增高，而肝臟中ACP含量又顯著降低，原因有待于進一步研究。

3.3 沙蔥黃酮對巨噬細胞吞噬功能的影響（見表5）

表5 沙蔥黃酮對巨噬細胞吞噬功能的影響

從表5可以看出，試驗第7 d時，對照組和沙蔥黃酮純化組碳廓清指數(shù)顯著高于沙蔥組和沙蔥黃酮粗提物組（P＜0.05），后兩組之間差異不顯著（P＞0.05）；第14 d時，試驗各組碳廓清指數(shù)高于對照組，但差異不顯著（P＞0.05），其中沙蔥黃酮純化組高于其它各組。試驗第7 d時，沙蔥黃酮純化組的吞噬指數(shù)顯著高于對照組和沙蔥組（P＜0.05），沙蔥黃酮粗提物組高于對照組和沙蔥組，但差異不顯著（P＞0.05）；第14 d時，沙蔥黃酮純化組的吞噬指數(shù)顯著高于對照組和沙蔥黃酮粗提物組（P＜0.05），高于沙蔥組，但差異不顯著（P＞0.05），沙蔥組顯著高于沙蔥黃酮粗提物組（P＜0.05），高于對照組，差異不顯著（P＞0.05）。隨著試驗期的延長，碳廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)都有所增加，證明短期內(nèi)飼喂沙蔥黃酮能增強機體的非特異性免疫。

3.4 沙蔥黃酮對血清中溶菌酶含量的影響（見表6）

表6 沙蔥黃酮對小鼠血清溶菌酶含量的影響（μg/ml）

從表6可以看出，試驗第7 d時，沙蔥黃酮粗提物組和沙蔥黃酮純化組血清溶菌酶含量顯著高于對照組和沙蔥組（P＜0.05）；第14 d時，沙蔥黃酮純化組顯著高于其它各組，沙蔥黃酮粗提物組顯著高于對照組（P＜0.05），高于沙蔥組，但差異不顯著（P＞0.05）。

4 討論

免疫器官稱重法是目前研究機體免疫狀況的方法之一。一般認為，免疫器官重量降低為免疫抑制所致，而免疫器官重量增加則為免疫增強的表現(xiàn)（李素芬，2000）[11]。丁劍冰等（1997）研究表明，ACP 與巨噬細胞的活性有關(guān)，小鼠從胚胎17 d起脾內(nèi)出現(xiàn)具有ACP活性的巨噬細胞，生后集中在邊緣區(qū)及紅髓中，構(gòu)成主要防御屏障[12]。由于ACP是巨噬細胞激活的可靠指標之一[13]，通過測定巨噬細胞內(nèi)ACP活性的高低，可以反映巨噬細胞的活性，從而反映機體非特異性免疫功能。

小鼠碳廓清試驗中所測得的廓清指數(shù)（κ）可反映網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能，吞噬指數(shù)（α）則反映單核巨噬細胞的吞噬能力[14]。張逸凡等（1999）研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，淫羊藿高劑量能夠增加正常小鼠碳廓清吞噬指數(shù)和校正吞噬指數(shù)，提高血清溶血素抗體生成水平，提示淫羊藿能提高機體非特異性免疫和體液免疫，提高機體對有害刺激的防御作用[15]。李書桐等（1995）報道，淫羊藿總黃酮（TFE）可提高小鼠腹腔巨噬細胞吞噬能力，并能使受環(huán)磷酰胺損傷的小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬功能恢復至正常水平[16]。與本試驗結(jié)果基本一致。

溶菌酶作為機體非特異免疫因子之一[17]，參與機體多種免疫反應(yīng)，在機體正常防御功能和非特異免疫中，具有保持機體生理平衡的重要作用[18]。它可改善和增強巨噬細胞吞噬和消化功能[19]，激活白細胞吞噬功能，并能改善細胞抑制劑所導致的白細胞減少[20]，從而增強機體的抵抗力。

5 結(jié)論

從試驗結(jié)果看，沙蔥黃酮純化組通過提高機體的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、血液和肝臟的酸性磷酸酶含量、小鼠的碳廓清指數(shù)（κ）和吞噬系數(shù)（α）、血液中溶菌酶的含量，來增強機體非特異性免疫機能。

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