梅毒抗體檢測(cè)方法的對(duì)比分析

王煥成

（河南省南陽(yáng)市第一人民醫(yī)院輸血科，河南南陽(yáng) 473000）

目前對(duì)梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法較多，為了探討甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)(toluidine red unheated serum test，TRUST)、酶聯(lián)免疫吸附法(treponemapallidum-ELISA，TP-ELISA)、明膠顆粒凝集法(tre-ponemapallidum particle agglutination test，TPPA)3種梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法的應(yīng)用，我們對(duì)此進(jìn)行了對(duì)比分析，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選自2009年2月～2010年2月我院住院和門(mén)診診斷和治療的梅毒患者129例，其中男性99例，女30例，年齡18～75歲，平均35.9歲。本組病例中早期潛伏期梅毒21例，一期梅毒39例，二期梅毒58例，不明期梅毒11例。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 對(duì)129例梅毒患者，采取肘部無(wú)菌靜脈血5 ml，3 000 r/min離心5 min，提取血清。

1.2.2 儀器及試劑 XK95I型多用振蕩器由江蘇江堰市新康儀器廠生產(chǎn)。START IVD ELISA全自動(dòng)酶免儀；LD5-2A離心機(jī)，北京醫(yī)用離心機(jī)廠。TRUST試劑由上海榮盛生物公司提供，TP-ELISA檢測(cè)試劑為上海科華公司產(chǎn)品，TPPA試劑由日本富士瑞必歐株式社提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法與原理

所有檢測(cè)操作程序和結(jié)果判斷均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，并在試劑盒有效期內(nèi)使用。TRUST法：采用活化心磷脂卵磷脂膽固醇配制VDRL抗原重懸于甲苯胺紅特制溶液中與梅毒患者血清中的反應(yīng)素發(fā)生粉紅色凝集。分別取50 μl的待測(cè)血清和TRUST試劑置于紙卡中，混勻8 min后肉眼觀察凝集情況，使陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)紅色絮狀凝集現(xiàn)象。TPELISA法：包被精制基因工程表達(dá)的梅毒螺旋體特異性抗原，與梅毒血清抗體發(fā)生特異結(jié)合，產(chǎn)生顯色反應(yīng)。TPPA法：用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒與血清中的梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見(jiàn)的凝集反應(yīng)，明膠顆粒為玫瑰紅色。

2 結(jié)果

129例梅毒患者進(jìn)行3種方法的檢測(cè)，TRUST法檢測(cè)陽(yáng)性92例，陽(yáng)性率為71.37%；TP-ELISA法檢測(cè)陽(yáng)性112例，陽(yáng)性率為86.82%；TPPA法檢測(cè)陽(yáng)性129例，陽(yáng)性率為100%；3種方法檢測(cè)陽(yáng)性率經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析比較，P＜0.05有顯著性差異。同時(shí)對(duì)3種檢測(cè)方法的敏感度、特異性進(jìn)行比較，具體見(jiàn)表1。

經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，TP-ELISA、TPPA兩種檢測(cè)方法比較，P＞0.05無(wú)顯著性差異；TRUST檢測(cè)方法與TP-ELISA、TPPA兩種檢測(cè)方法比較，P＜0.05有顯著性差異。

表1 3種檢測(cè)方法的靈敏度、特異性比較（%）Tab.1 Comparision of sensitivity,specificity of 3 kinds of detection methods(%)

3 討論

梅毒是由蒼白螺旋體引起的一種經(jīng)典的性傳播慢性感染性疾病，它可以引起全身性的感染及病變。其傳播方式有經(jīng)性接觸傳播、血液傳播和母嬰垂直傳播3種[1]。近年來(lái)梅毒的發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)，2008年國(guó)家衛(wèi)生部公布27種法定報(bào)告的甲、乙類(lèi)傳染病中，梅毒發(fā)病由原來(lái)的第7位上升至第5位。梅毒的診斷依賴(lài)病史、癥狀、體征，暗視野顯微鏡檢查和血清學(xué)檢查。梅毒感染者血清中可產(chǎn)生非特異性反應(yīng)素抗體和梅毒螺旋體的特異性抗體，血清學(xué)檢測(cè)是實(shí)驗(yàn)室診斷梅毒的重要依據(jù)之一，它在梅毒的診斷、治療及研究方面均有重要意義。

TRUST是采用活化心磷脂卵磷脂膽固醇配制VDRL抗原重懸于含甲苯胺紅特制溶液中與梅毒患者血清中的反應(yīng)素發(fā)生粉紅色凝集，因而檢測(cè)出梅毒。TRUST由于其廉價(jià)、快速、方便以及其所用的抗原是從牛心提取的心磷脂和從雞蛋黃提取的卵磷脂及膽固醇，其測(cè)定效價(jià)比RPR、USR高一個(gè)滴度等特點(diǎn)，所以廣泛用于臨床住院和門(mén)診患者的梅毒篩查；其敏感性及特異性較差，對(duì)早期梅毒、晚期梅毒及治療后梅毒檢測(cè)的敏感性低以及對(duì)神經(jīng)梅毒的不敏感性，常出現(xiàn)假陰性而漏檢，其可作為梅毒療效觀察或隨訪有否復(fù)發(fā)或再感染的指標(biāo)[2]。

TP-ELISA是隨著近年梅毒螺旋體基因工程的研制成功而發(fā)展起來(lái)的一種血清學(xué)檢測(cè)方法，是利用重組梅毒螺旋體的特異性抗原包被酶標(biāo)板孔，并采用雙抗原夾心法檢測(cè)血清標(biāo)本中的梅毒特異性IgM和IgG抗體，極大地提高了試驗(yàn)的敏感性和特異性[3]，對(duì)早期和晚期梅毒都有較高的檢出率。用ELISA法檢測(cè)的TP抗體穩(wěn)定，即使經(jīng)抗梅毒治療后，抗體仍繼續(xù)存在，甚至終生存在，用儀器判讀試驗(yàn)結(jié)果[4]。本實(shí)驗(yàn)中TP-ELISA的敏感性、特異性均很好，與TPPA的符合率高，無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，該方法重復(fù)性好，結(jié)果穩(wěn)定可靠。

梅毒螺旋體特異性抗體明膠凝集試驗(yàn)(TPPA)是使用螺旋體毒株制成抗原，是全螺旋體純化抗原，在抗原組成上比較全面，不易產(chǎn)生假陽(yáng)性，特異性較高，靈敏度高。梅毒螺旋體感染后，此抗體在體內(nèi)持續(xù)存在，可終身保留，檢測(cè)結(jié)果不隨病情發(fā)展和治療而變化，故TPPA作為梅毒的確診試驗(yàn)，對(duì)各期梅毒的檢測(cè)結(jié)果都有較好的穩(wěn)定性，不易出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。是目前公認(rèn)的較好的梅毒確認(rèn)方法，具有很高的敏感性和特異性[5]，但是試劑較貴，以肉眼判斷結(jié)果，不宜大批量檢測(cè)，一般作為T(mén)RUST和TP-ELISA等初篩陽(yáng)性以及潛伏期梅毒和一些非螺旋體試驗(yàn)陰性又高度懷疑為梅毒患者的確認(rèn)試驗(yàn)，也可用于排除用非特異性抗體檢測(cè)所致的假陽(yáng)性[4]。

由結(jié)果可知，臨床上進(jìn)行大量人員的高危人群梅毒篩查時(shí)宜采用TP-ELISA檢測(cè)方法，由于其敏感性和特異性較高而且檢測(cè)方法簡(jiǎn)便，假陽(yáng)性率和假陰性率較低等特點(diǎn)易采用TP-ELISA檢測(cè)方法[6]。對(duì)TRUST和TP-ELISA等初篩陽(yáng)性以及潛伏期梅毒和一些非螺旋體試驗(yàn)陰性又高度懷疑為梅毒患者的確認(rèn)試驗(yàn)采用TRUST檢測(cè)方法[5]。在臨床應(yīng)用過(guò)程中積極掌握梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法的特點(diǎn)對(duì)梅毒的診治可提供重要的參考依據(jù)，減少假陽(yáng)性率和減少假陰性率，為梅毒及早發(fā)現(xiàn)、及早診斷提供明確診斷的依據(jù)。

[1]孫蕓,黎保仝.11799例普通住院患者梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果分析[J].臨床檢驗(yàn)雜志,2005,23(3):171.

[2]程艷杰,王廣杰,劉明,等.梅毒螺旋體特異性抗體檢測(cè)方法的實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2006,29(3):272.

[3]鄧曉琴,楊茂,向艷玲,等.ELISA法梅毒檢測(cè)的鉤狀效應(yīng)及其分析[J].中國(guó)輸血雜志,2006,19(3):220.

[4]鄒黎.梅毒血清學(xué)試驗(yàn)幾種檢測(cè)方法比較[J].實(shí)用醫(yī)技雜志,2006,13(21):3788.

[5]李群,王福華.三種梅毒檢測(cè)方法的比較[J].中華醫(yī)學(xué)實(shí)踐雜志,2006,5(3):78.

[6]韓國(guó)柱,邵長(zhǎng)庚.我國(guó)梅毒瘤型和臨床特點(diǎn)[J].中華皮膚科雜志,2005,38(5):322.