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    人脂肪組織來(lái)源干細(xì)胞生物學(xué)特性研究

    2010-06-05 09:43:28霞,劉慶*,東,麗,學(xué)虎,
    關(guān)鍵詞:傳代脂肪組織對(duì)數(shù)

    朱 艷 霞,劉 天 慶*, 宋 克 東, 姜 麗 麗, 馬 學(xué) 虎, 崔 占 峰

    (1.大連理工大學(xué) 干細(xì)胞與組織工程研發(fā)中心,遼寧 大連 116024;2.牛津大學(xué) 工程科學(xué)系 組織工程與生物處理中心,英國(guó) 牛津 OX1 3PJ)

    0 引 言

    自2001年Zuk等[1]證實(shí)吸脂獲得的脂肪組織中存在具有多向分化潛能的細(xì)胞群,脂肪干細(xì)胞(adipose-derived stem cells,ADSC)逐漸被人們認(rèn)識(shí)并進(jìn)入干細(xì)胞研究領(lǐng)域.ADSC具有與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相似的生物學(xué)特性,并且脂肪組織分布廣泛、體內(nèi)儲(chǔ)備量大,可以多次取材并且損傷小,因此,ADSC作為組織工程和再生治療的種子細(xì)胞前景十分廣闊.

    目前國(guó)內(nèi)外對(duì)ADSC體外增殖及定向誘導(dǎo)分化能力認(rèn)識(shí)還存在分歧,研究者們通過(guò)不同方法獲得了不同量的脂肪干細(xì)胞[1、2],要想獲得高質(zhì)、高量的ADSC,必須建立一套更簡(jiǎn)便有效的分離培養(yǎng)方法.另外,大多數(shù)研究顯示ADSC的增殖周期是6~7 d,然而有研究表明ADSC在增殖2周過(guò)程中,細(xì)胞的蛋白合成率和總蛋白量一直持續(xù)增加[3].因此,ADSC的生長(zhǎng)特性還有待進(jìn)一步闡明.

    本實(shí)驗(yàn)改進(jìn)現(xiàn)有的ADSC體外分離培養(yǎng)方法,對(duì)其獲得率、體外增殖能力等進(jìn)行研究,以期ADSC為種子細(xì)胞的細(xì)胞治療和組織構(gòu)建提供細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ).

    1 材料和方法

    1.1 脂肪干細(xì)胞的分離培養(yǎng)

    自外科手術(shù)患者(年齡16~60歲)皮下獲取正常脂肪組織,約500 mg,無(wú)鈣鎂 Hank′s液沖洗,用眼科剪盡量剪破脂肪組織中肉眼可見(jiàn)的細(xì)小血管,沖洗血液后剪碎脂肪組織,移入大玻璃管中,加入0.25%胰蛋白酶(sigma)和0.1%膠原酶(I型,sigma)(體積比1∶1),37℃恒溫?fù)u床振蕩消化20 min.此時(shí)液面分為3層:上層為黃色油狀脂肪細(xì)胞層,中層為脂肪組織層,下層為含單個(gè)核細(xì)胞的液體.吸出下層液體移入含完全培養(yǎng)基(10%胎牛血清(hyclone)+高糖 DMEM (gibco))的離心管中終止消化.在剩余脂肪中加入新的胰酶和膠原酶,重復(fù)以上步驟繼續(xù)消化,重復(fù)2~3次,將收集到的液體1500 r/min離心10 min,去除懸浮的脂肪細(xì)胞和脂滴,去上清,向細(xì)胞沉淀中加入含10%胎牛血清DMEM重懸細(xì)胞,移入培養(yǎng)瓶中,37℃、5%CO2培養(yǎng)箱孵育,每2~3 d換液.細(xì)胞達(dá)到100%融合時(shí),用0.25%胰酶和0.04%EDTA(體積比1∶1)消化傳代.

    1.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀(guān)察

    使用倒置顯微鏡(IX70-131,OLYMPUS)觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng),并對(duì)傳代貼壁生長(zhǎng)在培養(yǎng)瓶中的脂肪干細(xì)胞的生長(zhǎng)、純化情況及增殖進(jìn)行連續(xù)觀(guān)察、攝像.

    1.3 細(xì)胞增殖動(dòng)力學(xué)分析

    將第4代ADSC以不同密度6.25×104、1.25×105、2.50×105、5.00×105、1.00×106和2.00×106cells/m L種于96孔板內(nèi),獲得細(xì)胞密度與光密度值的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn).以5.00×103cells/m L的密度接種細(xì)胞并分別檢測(cè)和繪制第3、7和15代細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(xiàn).采用cck-8測(cè)量細(xì)胞增殖,每100μL培養(yǎng)液中加10μL無(wú)菌cck-8,孵育3 h后在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上測(cè)各孔450 nm的光吸收值,參比波長(zhǎng)630 nm.每組設(shè)置3個(gè)平行對(duì)照,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次.

    當(dāng)細(xì)胞傳至20代時(shí),分別將20代細(xì)胞按傳統(tǒng)的每5 d傳代1次(99%融合)和每14 d傳代1次(此時(shí)細(xì)胞重疊生長(zhǎng)),兩種傳代方法傳代至25代時(shí),分別繪制2個(gè)25代細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(xiàn).

    1.4 累計(jì)群體倍增時(shí)間

    根據(jù)生長(zhǎng)曲線(xiàn)的指數(shù)增殖期計(jì)算群體倍增時(shí)間.群體倍增時(shí)間Td=T×[lg 2/lg(Nt/N0)],T代表生長(zhǎng)曲線(xiàn)中的指數(shù)增殖時(shí)間段,N0是接種時(shí)的細(xì)胞數(shù),Nt是指數(shù)增殖末期的細(xì)胞數(shù).據(jù)此公式計(jì)算25代細(xì)胞的群體倍增時(shí)間Td.

    1.5 細(xì)胞表面分子測(cè)定

    取第4、20及2個(gè)25代細(xì)胞檢測(cè)其干細(xì)胞相關(guān)表面標(biāo)記的表達(dá),操作步驟如下:培養(yǎng)的脂肪干細(xì)胞經(jīng)過(guò)消化離心(1000 r/min,5 min)后細(xì)胞重懸;細(xì)胞計(jì)數(shù)后將細(xì)胞濃度調(diào)整為1×107cells/m L,分 別 與 人 抗 CD13-PE、CD29-PE、CD34-FITC、CD44-FITC、CD45-FITC、CD105-FITC、CD166-PE 和 HLA-DR-PE作用20 min,PBS洗滌2次后用PBS重懸細(xì)胞,流式細(xì)胞儀(BD,San Jose,CA,USA)進(jìn)行檢測(cè).

    1.6 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)

    分別提取第4、20、30及2個(gè)25代細(xì)胞的總RNA,用合成第1鏈cDNA試劑盒(Ta KaRa,日本)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA、Nanog、Oct-4、Sox-2和Rex-1的引物分別進(jìn)行擴(kuò)增,GAPDH作為參照.PCR產(chǎn)物進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳,Scion Image圖像分析軟件對(duì)電泳條帶進(jìn)行分析.

    1.7 多向分化潛能的檢測(cè)

    1.7.1 成脂肪誘導(dǎo) 取第4代及2個(gè)25代細(xì)胞,以1×105cells/m L的密度接種于24孔板中.當(dāng)細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)達(dá)80%融合時(shí),換成脂肪誘導(dǎo)試劑[1],對(duì)照組加常規(guī)培養(yǎng)液.誘導(dǎo)14 d進(jìn)行油紅染色以觀(guān)察細(xì)胞脂滴形成情況.

    1.7.2 成骨誘導(dǎo) 當(dāng)細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)達(dá)80%融合時(shí),換成骨誘導(dǎo)試劑[1].細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)1周時(shí)進(jìn)行鈣鈷法堿性磷酸酶 (ALP)染色,3周進(jìn)行Von Kossa染色,干燥后鏡下觀(guān)察.

    1.7.3 成軟骨誘導(dǎo) 取第4代及2個(gè)25代細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞密度2×107cells/m L,取10μL滴于24孔板內(nèi),于37℃培養(yǎng)箱孵育3 h后加軟骨誘導(dǎo)劑[1].誘導(dǎo)培養(yǎng)2周后進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色,干燥后顯微鏡下觀(guān)察.

    1.7.4 成心肌誘導(dǎo) 取第4代及2個(gè)25代細(xì)胞,以1×105cells/m L的密度接種于24孔板中.當(dāng)細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)達(dá)80%融合時(shí)加9μmol/L 5-氮胞苷,作用24 h后換新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)4周.用心肌特異性連接蛋白Connexin-43進(jìn)行免疫熒光檢測(cè),熒光顯微鏡下觀(guān)察.

    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    采用SPSS 12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間比較采用t檢驗(yàn).P<0.05為有顯著性差異.

    2 結(jié) 果

    2.1 細(xì)胞形態(tài)

    接種后ADSC在24 h內(nèi)開(kāi)始貼壁,初為短梭形,細(xì)胞大小不等,核漿比例較大.2~4 d可見(jiàn)細(xì)胞伸展,大多數(shù)細(xì)胞為長(zhǎng)梭形,形態(tài)類(lèi)似成纖維細(xì)胞,核橢圓形,較大(圖1(a)).原代培養(yǎng)的細(xì)胞3~4 d即達(dá)90%融合,傳代后第3代細(xì)胞生長(zhǎng)出現(xiàn)方向性(圖1(b));體外培養(yǎng)20代以后,細(xì)胞的增殖速度無(wú)明顯減慢,細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯改變(圖1(c));30代以后的細(xì)胞體積明顯增大(圖1(d)).

    2.2 細(xì)胞增殖動(dòng)力學(xué)

    在本文的培養(yǎng)條件下,ADSC可傳至30代以上.從圖2(b)可以看出在最初3 d ADSC處于生長(zhǎng)適應(yīng)期,第4 d開(kāi)始細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,然而第8 d后細(xì)胞處于生長(zhǎng)停滯期.但與其他研究結(jié)果不同的是細(xì)胞并未出現(xiàn)接觸抑制,而是繼續(xù)增殖到第10 d時(shí)達(dá)到又一個(gè)增殖峰值.接下來(lái)的幾天,細(xì)胞數(shù)量雖然有所減少,第12 d后細(xì)胞又進(jìn)入另一個(gè)對(duì)數(shù)增殖期.從圖2還可以看出,隨著傳代次數(shù)的增加細(xì)胞的增殖能力有所下降.圖2(c)顯示了兩種傳代方法得到的第25代細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(xiàn).與圖2(b)類(lèi)似,這兩種細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(xiàn)表現(xiàn)出多個(gè)對(duì)數(shù)增殖期和增殖峰值,兩種方法得到的25代細(xì)胞都具有較強(qiáng)的增殖能力.

    圖1 體外培養(yǎng)的脂肪干細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變Fig.1 Morphology change of h ADSCs from subcutaneous fat tissue cultured in vitro

    圖2 脂肪干細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)Fig.2 Growth curves of h ADSC

    顯微鏡下ADSC的形態(tài)學(xué)改變(圖3)與生長(zhǎng)曲線(xiàn)一致.第6 d細(xì)胞達(dá)到90%融合,第10 d即出現(xiàn)局部重疊生長(zhǎng).然而第11 d,鏡下觀(guān)察到單層ADSC上有一些卷曲溶解的細(xì)胞,接下來(lái)的幾天,細(xì)胞繼續(xù)重疊生長(zhǎng),形成一個(gè)厚的細(xì)胞片層.20 d后,細(xì)胞片層從孔板邊緣卷起,細(xì)胞向卷起的空白區(qū)伸展增殖,跨過(guò)卷起的細(xì)胞片層和空白區(qū).當(dāng)細(xì)胞增殖至35 d以上,細(xì)胞片層完全卷起,此時(shí)通過(guò)cck-8檢測(cè)細(xì)胞數(shù)量,發(fā)現(xiàn)其OD值與20 d左右細(xì)胞的OD值無(wú)顯著性差異.

    根據(jù)生長(zhǎng)曲線(xiàn)計(jì)算細(xì)胞的群體倍增時(shí)間,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的群體倍增時(shí)間隨傳代次數(shù)的增加而增加,從第3代的36 h增加到第25代的96 h(圖4).每代細(xì)胞幾個(gè)對(duì)數(shù)增殖期的倍增時(shí)間沒(méi)有顯著性差異,但第2個(gè)對(duì)數(shù)增殖期倍增時(shí)間稍短于其他對(duì)數(shù)增殖期的倍增時(shí)間.

    圖3 對(duì)應(yīng)于生長(zhǎng)曲線(xiàn)不同時(shí)刻脂肪干細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變Fig.3 Morphology changes of h ADSC in accordance with the growth curves

    圖4 ADSC倍增時(shí)間的檢測(cè)Fig.4 Doubling time determination for ADSC

    原代細(xì)胞增殖迅速,2~3 d細(xì)胞即達(dá)90%融合,隨著傳代純化,到第4代細(xì)胞得到完全純化時(shí),ADSC細(xì)胞總量約為8×107個(gè).根據(jù)細(xì)胞倍增時(shí)間計(jì)算可知每400~600 mg脂肪組織共可收獲約5×105個(gè)ADSC.

    2.3 表面標(biāo)志物的鑒定

    流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)(表1),第4、20、25代細(xì)胞中大多數(shù)細(xì)胞CD13、CD29、CD44、CD105和CD166陽(yáng)性表達(dá),而CD34、CD45和 HLA-DR都呈陰性表達(dá).第4代細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)率稍高于第20代.本文還發(fā)現(xiàn)每隔14 d傳代得到的25代細(xì)胞干細(xì)胞相關(guān)表面標(biāo)志的表達(dá)率要高于常規(guī)5 d傳代得到的25代細(xì)胞的表達(dá)率(P<0.05).

    表1 第4和第20代脂肪干細(xì)胞表面CD標(biāo)志物的表達(dá)Tab.1 Expression of cell surface CD markers of ADSCs of passages 4 and 20

    2.4 轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)

    第4和20代細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Nanog、Oct-4、Sox-2和Rex-1都呈陽(yáng)性表達(dá),兩者的表達(dá)率R沒(méi)有顯著性差異.第30代細(xì)胞 Nanog、Oct-4、Sox-2和Rex-1 m RNA雖然也呈陽(yáng)性表達(dá),但表達(dá)率明顯低于其他兩代細(xì)胞(P<0.05)(圖5(a)、6(a)).每14 d傳代得到的25代細(xì)胞Nanog、Oct-4、Sox-2和Rex-1的表達(dá)率明顯高于每5 d傳代得到的25代細(xì)胞的表達(dá)率(圖5(b)、6(b)).

    表2 兩種傳代方法得到的25代細(xì)胞表面CD標(biāo)志的表達(dá)Tab.2 Expression of cell surface CD markers of ADSC of passage 25 with two subculture methods

    圖5 不同代數(shù)脂肪干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子m RNA的表達(dá)情況Fig.5 Transcription factors mRNA expression in h ADSC of different passages

    2.5 多向分化潛能

    2.5.1 成脂肪潛能 ADSCs經(jīng)脂肪誘導(dǎo)液向脂肪誘導(dǎo)分化5 d后,胞漿內(nèi)出現(xiàn)少量脂滴并逐漸聚集.8 d后,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯改變,從長(zhǎng)梭形類(lèi)成纖維細(xì)胞外觀(guān)逐漸變圓,并且開(kāi)始出現(xiàn)充滿(mǎn)脂滴的細(xì)胞.脂肪分化誘導(dǎo)2周后出現(xiàn)了大量的脂滴(圖7(a1)).油紅“O”染色后細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量紅染顆粒(圖7(a2)、(a3)、(a4)),證明鏡下所見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)顆粒確為脂滴.另外,從半定量分析結(jié)果(圖8)可知,第25代細(xì)胞成脂肪能力明顯弱于第4代細(xì)胞.而2個(gè)25代細(xì)胞的成脂肪潛能沒(méi)有顯著性差異.

    圖6 RT-PCR結(jié)果半定量分析Fig.6 Semiquantitative RT-PCR analysis

    2.5.2 成骨潛能ADSCs 成骨誘導(dǎo)后約7 d長(zhǎng)滿(mǎn)單層,生長(zhǎng)略慢.細(xì)胞多為梭形,隨時(shí)間延長(zhǎng),密度增高,細(xì)胞呈多層生長(zhǎng),細(xì)胞外分泌基質(zhì)增多.經(jīng)ALP染色后見(jiàn)第4代細(xì)胞具有較強(qiáng)的堿性磷酸酶的活性(圖7(b2)),而第25代細(xì)胞誘導(dǎo)7 d后堿性磷酸酶的活性明顯低于第4代(圖7(b3)、7(b4)).14 d時(shí)有局灶型點(diǎn)狀鈣化斑形成,21 d時(shí)形成明顯的礦化結(jié)節(jié)沉積,隨誘導(dǎo)時(shí)間增加,結(jié)節(jié)狀沉積愈加明顯,顏色加深.Von Kossa染色顯示結(jié)節(jié)狀沉積為黑色(圖7(c2)、(c3)、(c4)),證實(shí)了結(jié)節(jié)狀沉積為鈣鹽沉積.同樣,第25代細(xì)胞形成的鈣化結(jié)節(jié)明顯少于第4代細(xì)胞.2個(gè)25代細(xì)胞堿性磷酸酶活性和鈣化結(jié)節(jié)形成都沒(méi)有顯著性差異(圖8).

    圖7 脂肪干細(xì)胞多向分化潛能的檢測(cè)Fig.7 Multi-differentiation potentials of h ADSCs toward mesodermal and endodermal lineages

    2.5.3 成軟骨潛能 經(jīng)軟骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)后,細(xì)胞體積增大,生長(zhǎng)相對(duì)變慢,細(xì)胞由成纖維樣變?yōu)闄E圓形及三角形,有的呈腎形(圖7(d1)).誘導(dǎo)培養(yǎng)14 d可見(jiàn)細(xì)胞周?chē)谢|(zhì)分泌.甲苯胺藍(lán)染色后,可見(jiàn)大量異染性基質(zhì),呈藍(lán)紫色(圖7(d2)、(d3)、(d4)),表現(xiàn)為軟骨細(xì)胞分化特點(diǎn)(見(jiàn)圖4).2個(gè)25代細(xì)胞成軟骨潛能沒(méi)有顯著性差異,但都明顯低于第4代細(xì)胞.

    2.5.4 成心肌潛能 5-氮胞苷作用24 h,繼續(xù)培養(yǎng)4周后細(xì)胞重疊生長(zhǎng),但并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯的形態(tài)學(xué)改變和自發(fā)搏動(dòng)的細(xì)胞.熒光染色后顯微鏡下觀(guān)察,第4代ADSC少有的幾個(gè)細(xì)胞出現(xiàn)綠色熒光(圖7(e2)),而第25代細(xì)胞誘導(dǎo)染色后未見(jiàn)綠色熒光(圖7(e3)、(e4)).

    圖8 脂肪干細(xì)胞分化率的半定量分析Fig.8 Semiquantitative analysis of differentiation ratio of ADSCs

    3 討 論

    用本文改進(jìn)的分離方法,每500 mg脂肪組織平均可獲得5×105個(gè)干細(xì)胞,比文獻(xiàn)報(bào)道的細(xì)胞獲得率[4]高20倍以上.這是因?yàn)楸疚膽?yīng)用胰酶和膠原酶聯(lián)合消化,可大大縮短消化時(shí)間,從而避免了酶對(duì)細(xì)胞的過(guò)度損傷.此外,為排除紅細(xì)胞的干擾,一般都使用NH4Cl破壞紅細(xì)胞[5],而本文是通過(guò)換液的方法去除紅細(xì)胞,2次換液后紅細(xì)胞基本消失,這樣就避免了NH4Cl對(duì)細(xì)胞的損傷.

    本文分離培養(yǎng)的ADSC比前人的具有更強(qiáng)的增殖能力,25 d內(nèi)出現(xiàn)3個(gè)對(duì)數(shù)增殖期,雖然在每個(gè)對(duì)數(shù)增殖期末有生長(zhǎng)停滯現(xiàn)象,鏡下可觀(guān)察到細(xì)胞出現(xiàn)接觸抑制,有少量細(xì)胞死亡,但通過(guò)反饋?zhàn)饔眉?xì)胞又繼續(xù)分裂增殖,進(jìn)入另一個(gè)增殖高峰.ADSC 如此強(qiáng)的增殖能力是以前報(bào)道[6、7]中從未出現(xiàn)過(guò)的.

    雖然體外長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)后ADSC仍能保持較強(qiáng)的增殖能力,但還是隨著傳代次數(shù)的增加有所下降,表明傳代時(shí)胰酶的作用會(huì)對(duì)細(xì)胞造成一定的損傷.為減少胰酶的作用次數(shù),本文將培養(yǎng)至20代的細(xì)胞分別按常規(guī)5 d傳代,或14 d傳代,傳至25代時(shí)發(fā)現(xiàn)每14 d傳代得到的細(xì)胞增殖力略高于每5 d傳代得到的細(xì)胞,并且細(xì)胞數(shù)量是常規(guī)傳代的20倍.

    本文所培養(yǎng)的ADSC其CD34和CD45都呈陰性表達(dá),HLA-DR作為排除成纖維細(xì)胞的表面標(biāo)志也是持續(xù)陰性表達(dá),這可以為ADSC的自體或同種異體移植提供理論依據(jù).同時(shí)CD13、CD29、CD44、CD105和CD166都呈陽(yáng)性表達(dá),與其他研究結(jié)果一致[2、8].間充質(zhì)標(biāo)志物持續(xù)表達(dá)說(shuō)明貼壁的ADSC可以增殖而沒(méi)有丟失干細(xì)胞相關(guān)的表面標(biāo)志物,反映了ADSC向間充質(zhì)起源細(xì)胞系的分化能力,如脂肪、軟骨和成骨.

    轉(zhuǎn)錄因子 Nanog、Oct-4、Sox-2和 Rex-1,特別是Oct-4、Nanog和Sox-2在指導(dǎo)干細(xì)胞的多向分化潛能中起著重要的作用[9].本文培養(yǎng)的ADSC傳至30代時(shí)仍能表達(dá) Oct-4、Nanog、Sox-2和Rex-1 mRNA,而且每隔14 d傳代得到的25代細(xì)胞的表達(dá)率高于每隔5 d傳代得到的細(xì)胞.因?yàn)檫@4個(gè)轉(zhuǎn)錄因子啟動(dòng)、維持并調(diào)節(jié)多能干細(xì)胞的分化潛能[10],因此每隔14 d傳代得到的細(xì)胞與常規(guī)傳代的細(xì)胞相比具有更強(qiáng)的分化潛能.

    4 結(jié) 語(yǔ)

    本研究方法可以從500 mg人脂肪組織中獲得5×105個(gè)干細(xì)胞,而且所分離的細(xì)胞可快速長(zhǎng)期持續(xù)增殖(3~4 d即可達(dá)到95%融合,1個(gè)月出現(xiàn)3個(gè)對(duì)數(shù)增殖期);增殖至25代以上仍能較好保持干細(xì)胞表型特征和多向分化潛能;如果每隔14 d傳代而非常規(guī)5 d傳代,可獲得更多更高質(zhì)量的干細(xì)胞.因此ADSC相對(duì)于MSC是一個(gè)更好的干細(xì)胞資源,在細(xì)胞移植和組織工程中將有很好的應(yīng)用前景.

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