大孔吸附樹脂分離白鮮皮抗炎有效組分的實(shí)驗(yàn)研究

艾丹，楊桂明

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)佳木斯學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)

白鮮皮為蕓香科白鮮屬植物白鮮(Dictamnus dasycarpus Turcz.)的根皮，具有清熱燥濕、祛風(fēng)解毒，止癢的功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，白鮮皮具有抗氧化、抗病毒、抗細(xì)菌、抗炎、抗腫瘤等多種活性。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，白鮮皮的95%乙醇提取物具有顯著的抗炎作用。本實(shí)驗(yàn)中采用大孔吸附樹脂柱色譜法對(duì)白鮮皮的95%乙醇提取物進(jìn)一步分離，考察不同洗脫物對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響，探討白鮮皮抗炎的有效組分。

1 材料與儀器

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)KM小鼠70只，體重(18～22)g，♂，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SCXK黑2008004，適應(yīng)飼養(yǎng)3d后供試。

1.2 藥物

藥材:白鮮皮購于河北安國藥材市場(chǎng)，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)教研室陳效忠副教授鑒定為蕓香科植物白鮮(Dictamnus dasycarpus Turcz.)的干燥根皮，粉碎成粗粉，備用。

受試藥物:水洗脫物、20%乙醇洗脫物、50%乙醇洗脫物、70%乙醇洗脫物、95%乙醇洗脫物，供藥效篩選用。

陽性對(duì)照藥物:吲哚美辛腸溶片，臨汾寶珠制藥有限公司，批號(hào):090201。

空白對(duì)照藥物:生理鹽水，浙江濟(jì)民制藥有限公司，批號(hào):08122403。

1.3 試劑及儀器

二甲苯(分析純，沈陽市新西試劑廠，批號(hào):20061110);乙醇(分析純，沈陽市東光試劑廠，批號(hào):20090429);氫氧化鈉(分析純，天津市恒光化學(xué)試劑制造有限公司，批號(hào):20081218);鹽酸(分析純，固安縣北方化學(xué)工業(yè)公司，批號(hào):081216);水為蒸餾水;AB－8型大孔吸附樹脂(河北省滄州市寶恩化工有限公司)。

恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司，型號(hào):DK－98－1);真空干燥箱(上海齊欣科學(xué)儀器有限公司，型號(hào):DZF－6020);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠，型號(hào):RE5220);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申勝生物技術(shù)有限公司，型號(hào):R－201);電子分析天平(德國賽多利斯集團(tuán)，型號(hào):ALC－210.4)。

2 方法

2.1 樣品溶液制備

稱取白鮮皮粗粉800g，加入4倍量的95%乙醇，于恒溫水浴鍋(100℃)中回流提取2h，提取液經(jīng)濾過后，減壓濃縮揮去乙醇，放入真空干燥箱中除去殘留溶劑，干燥后的樣品加蒸餾水稀釋至0.5g·mL－1，備用。

2.2 大孔吸附樹脂預(yù)處理

稱取一定量的AB－8型大孔吸附樹脂，用水漂洗去白色混濁物，加入95%乙醇泡24h使之充分溶脹，濕法裝柱，用95%乙醇洗柱至流出液與水混合(1∶3)不呈白色混濁為止，以蒸餾水洗柱至流出液無醇味，然后用4%NaOH溶液洗至呈堿性，浸泡6h，以蒸餾水洗至中性，再用4%HCl溶液洗至呈酸性，浸泡6h，以蒸餾水洗至中性，備用。

2.3 吸附洗脫

樣品溶液過預(yù)先裝好的大孔吸附樹脂柱進(jìn)行吸附。依次用水、20%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇進(jìn)行洗脫，分別收集洗脫液，減壓濃縮回收溶劑，加蒸餾水稀釋至濃度為4mg·mL－1，備用。

2.4 陽性對(duì)照藥物制備方法

吲哚美辛腸溶片，每片25mg，實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配置成5mg·mL－1的溶液，備用。

2.5 抗炎實(shí)驗(yàn)

取KM小鼠70只，隨機(jī)分成7組:生理鹽水組，吲哚美辛組，水洗脫物組，20%乙醇洗脫物組，50%乙醇洗脫物組，70%乙醇洗脫物組和95%乙醇洗脫物組。分別灌胃給白鮮皮不同洗脫物制劑和對(duì)照藥物(詳見表1)，連續(xù)7d。末次給藥1h后，于小鼠右耳兩側(cè)均勻涂布二甲苯0.05mL·只－1，左耳不涂作為對(duì)照，致炎1h后脫頸處死動(dòng)物，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑9mm打孔器打下雙耳同一部位圓片，用電子分析天平精密稱重，右耳片重量減去左耳片的重量即為腫脹度，抑制率(%)=(模型組腫脹度－給藥組腫脹度)/模型組腫脹度×100%。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

結(jié)果如表1所示，與生理鹽水組比較，95%乙醇洗脫物能明顯減輕二甲苯致炎小鼠的耳廓腫脹程度(P<0.01)，提示95%乙醇洗脫物均有較好的抗炎作用;與吲哚美辛組比較，95%乙醇洗脫物抗炎作用未見明顯差異(P>0.05)，作用與吲哚美辛相似;與生理鹽水組比較，20%乙醇洗脫物，50%乙醇洗脫物，70%乙醇洗脫物不具有抗炎作用(P>0.05)。

表1 白鮮皮不同洗脫物對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響(±s)

表1 白鮮皮不同洗脫物對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響(±s)

注:與空白對(duì)照組比較，*P<0.01。

組別 動(dòng)物數(shù)(只)劑量(g·kg－1)腫脹程度(mg)抑制率(%)17.08±1.97－吲哚美辛組 10 10 7.40±1.79* 56.67水洗脫物組 10 50 16.38±1.95 4.16 20%乙醇洗脫物組 10 50 16.11±1.87 5.68 50%乙醇洗脫物組 10 50 15.96±1.76 6.56 70%乙醇洗脫物組 10 50 15.78±1.81 7.67 95%乙醇洗脫物組 10 50 8.81±1.92*生理鹽水組 10 10mL·kg－1 48.42

4 討論

4.1 中藥提取液中有效成分的精制方法有醇沉去雜法、有機(jī)溶劑萃取法、大孔吸附樹脂吸附法、聚酰胺柱分離法等。其中大孔吸附樹脂吸附法操作簡(jiǎn)便、無污染、成本較低，較其它方法所得提取物體積小、不吸潮、易制成各種劑型。本研究中采用AB－8型大孔吸附樹脂對(duì)白鮮皮的醇提物進(jìn)行分離。AB－8型大孔吸附樹脂為聚苯乙烯型非極性吸附樹脂，該樹脂的比表面積和孔徑較大，適合于吸附具有一定疏水性的中藥成分，吸附量較大，洗脫容易，吸附動(dòng)力學(xué)性能良好［1］。對(duì)熱、有機(jī)溶劑和一般使用條件下的酸、堿穩(wěn)定，使用壽命較長(zhǎng)。

4.2 非特異性炎癥是具有血管系統(tǒng)的活體組織對(duì)局部損傷的反應(yīng)。在炎癥的早期，某些炎癥介質(zhì)刺激血管，使血管擴(kuò)張，血管內(nèi)皮間隙擴(kuò)大，血管壁通透性增強(qiáng)，血管內(nèi)的液體、蛋白質(zhì)和白細(xì)胞等滲出到組織間隙，隨著滲出的增加，造成組織腫脹，炎癥滲出組織腫脹是急性炎癥病理組織學(xué)的主要特征。本研究采用二甲苯作為致炎因子，引起急性炎癥反應(yīng)，通過測(cè)定小鼠耳廓的腫脹程度，反應(yīng)出白鮮皮不同洗脫物的抗炎效果。實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，95%乙醇洗脫物能抑制二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹，提示其具有顯著的抗炎作用。

［1］景怡，景榮琴，任遠(yuǎn)，等.AB－8大孔吸附樹脂分離純化玉米須中總黃酮的研究［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2010，38(1):75－77.