中藥復方肺泰膠囊的主要成分含量測定

余宗陽，歐陽學農(nóng)，賀全山，戴西湖，劉志臻

（中國人民解放軍南京軍區(qū)福州總醫(yī)院腫瘤科，福建 福州 350025）

中藥復方肺泰膠囊（軍內(nèi)科研制劑注冊號[（2002）南科02001號]）是多年來經(jīng)臨床反復篩選和提煉的中藥復方口服制劑，主要由黃芪、半枝蓮、莪術(shù)、腫節(jié)風、全蝎等8味中藥組成[1]。異秦皮啶（7-羥基-6，8-二甲氧基香豆素）屬于香豆素類，為方中主藥腫節(jié)風的主要活性成分。為進一步提高對制劑的質(zhì)量控制，筆者根據(jù)相關(guān)文獻及藥典等資料[1-3]，采用高效液相色譜（HPLC）法對異秦皮啶進行了含量測定，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Beckman 125型高效液相色譜儀（美國Beckman）；FA1004型電子天平（上海天平儀器廠）；DK-S24型電熱恒溫水浴鍋（上海精宏實驗設備有限公司）；星海旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（無錫市海王生化設備有限公司）；KQ-600DE型數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；YSEI綜合藥品穩(wěn)定性試驗箱（重慶市永生實驗儀器廠）。異秦皮啶對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為110837-200304）；肺泰膠囊（福州總醫(yī)院自制，批號為 030612，030818，031221）；乙腈為色譜純，甲醇、磷酸為分析純，水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Hypersil ODS 柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈 -0.2%磷酸溶液（21∶79），梯度洗脫程序為 0min（20∶80）→20min（40 ∶60）→30 min（20 ∶80）；流速：1.0 mL/min；柱溫：18 ℃ ；檢測波長：344 nm；進樣量：20 μL。此條件下色譜圖見圖1，理論塔板數(shù)按異秦皮啶峰計算不低于2 000。

2.2 溶液制備

精密稱取經(jīng)60℃減壓干燥2 h的異秦皮啶對照品0.01 g，用甲醇配制成2.00 μg/mL的對照品溶液。將肺泰膠囊內(nèi)容物研細，取約0.3 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加甲醇適量，置水浴上回流提取6 h，提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)適當濃縮后過濾，置25 mL量瓶中，甲醇定容，搖勻，即得供試品溶液。按處方比例并以相同工藝制備缺異秦皮啶的陰性對照品，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液。精密稱取異秦皮啶對照品0.010 8 g，置10 mL量瓶中，甲醇定容，作為貯備液，以流動相稀釋得對照品溶液。

2.3 方法學考察

陰性干擾試驗：精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀。結(jié)果處方中其他組分和輔料對異秦皮啶的測定無干擾（見圖1）。

線性關(guān)系考察：取質(zhì)量濃度為2.00，4.32，6.48，8.64，10.80 μg/mL的對照品溶液，按上述色譜條件進行含量測定。以質(zhì)量濃度 C為橫坐標、峰面積 Y為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程 Y=69 427X+15 961，r=0.999 9（n=5）。結(jié)果表明異秦皮啶質(zhì)量濃度在2.00～10.80 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：取對照品溶液，依法連續(xù)進樣。結(jié)果峰面積的RSD=1.76%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，10 h 時取樣測定。結(jié)果含量的 RSD=1.47%（n=6），表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗：取同一批樣品，依法制備供試品溶液并測定含量。結(jié)果平均含量為0.148 mg/g，RSD=1.19%（n=6），表明方法的重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗：取3批樣品，每批3份，每份約0.3 g，精密稱定，加入質(zhì)量濃度為46.0 μg/mL的對照品溶液0.8，1.0，1.2 mL各3份，依法測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

圖1 高效液相色譜圖

表1 異秦皮啶加樣回收試驗結(jié)果（n=9）

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，每批2份，共6份，每份約0.3 g，精密稱定，加入純凈水各0.8，1.0，1.2 mL，制備成供試品溶液，量取20 μL注入液相色譜儀，照上述色譜條件測定。結(jié)果含量平均值為45.30 μg/mL。據(jù)相關(guān)文獻[2-3]規(guī)定并考慮生產(chǎn)工藝，確定含量下限為85%，計算得38.51 μg/mL，故暫定本品以異秦皮啶計不得低于38.51 μg/mL。

3 討論

本品組方較大，制備方法的選擇非常關(guān)鍵。曾制定方案1采用水溶解，放置過夜后超聲處理，過濾，再以氯仿萃取，提取液蒸干后用甲醇溶解；方案2參考2005年版《中國藥典（二部）》用甲醇溶解并超聲處理[1]；方案3用甲醇回流提取6 h。方案1在超聲處理后過濾時，溶液由于黏滯性太大，難以抽濾，不易操作且提取液中所需成分易損失；方案2雖然操作簡單易行，但其分離度及其測定的含量沒有方案3好。因此選用方案3進行供試品溶液的制備。提取液是有色溶液，且具有一定的黏性，建議采取多次過濾或預柱的方法，避免色譜柱損壞。

在試驗過程中，柱溫的高低影響異秦皮啶峰的分離度，柱溫升高，出峰時間加快，但后一個峰的出峰時間加快得更多，異秦皮啶峰與后一峰的分離度變小，部分重疊；柱溫降低則出峰時間延長，異秦皮啶峰與前一峰分離度變小。經(jīng)過試驗比較，確定柱溫為18℃最佳。

曾參考藥典等文獻，采用乙腈與0.1%磷酸溶液為流動相，但經(jīng)過試驗比較，其分離度及峰形不如用乙腈與0.2%磷酸溶液的流動相好。在試驗過程中，乙腈與0.2%磷酸的比例也影響其分離度，當其比例為20∶80時主峰與前一峰部分重疊，而當其比例為23∶77時又與后一峰發(fā)生重疊。通過試驗，確定其比例為21∶79最為適宜。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京:化學工業(yè)出版社，2005：502，附錄ⅪⅩ C，176.

[2]黃增瓊，蔣偉哲，黃興振，等.高效液相色譜測定腫節(jié)風含片中異秦皮啶含量[J]. 中國藥業(yè)，2007，16（5）:19-20.

[3]周國平，劉紅宇，王漢章，等.腫節(jié)風中異秦皮啶含量的HPLC法測定[J]. 中國中藥雜志，1999，24（8）:481-482.