姜厚樸的微波炮制工藝研究

王 麟， 袁 珂， 劉華亮

（1.浙江林學(xué)院天然藥物研發(fā)中心，浙江臨安 311300;2.河南中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，河南鄭州 450008）

厚樸為木蘭科植物厚樸Magnolia officinaisRehd.et Wils.或凹葉厚樸Magnolia officinalisRehd.et Wils.var.biloba Rehd.et Wils.的干燥干皮、根皮及枝皮［1］。厚樸載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，又名厚皮、川樸、紫油厚樸。性溫，味苦、辛，具有燥濕消痰、下氣除滿的功能。生品性味峻烈，具有抗菌、消炎、抗胃潰瘍、抗氧化等作用［2］，厚樸生用辛辣，有“棘人喉舌”的副作用，在臨床上較少生用，姜制后可消除對(duì)咽喉的刺激性，同時(shí)可增強(qiáng)寬中和胃的作用。厚樸中的主要成分厚樸酚與和厚樸酚為聯(lián)苯型木脂素類［3］，以游離態(tài)與植物膠、樹脂等脂溶性成分共存。姜制厚樸的炮制方法目前應(yīng)用的主要有姜炙法和生姜汁煮法［4－6］。厚樸的炮制方法繁多，厚樸歷代炮制方法有凈制、切制、炒制、輔料制幾大類，超過16種炮制方法。事實(shí)上厚樸的姜制方法各地也不盡統(tǒng)一，有姜汁拌后炒的，有姜汁拌后蒸的，有姜汁拌后煮的，也有拌姜汁燜潤后直接烘干的。在實(shí)際生產(chǎn)過程中姜炙法的煙塵污染較為嚴(yán)重，生姜汁煮法的加工時(shí)間過長。而微波炮制是近年來快速發(fā)展的一種新技術(shù)，具有無污染、快速、高效、安全、節(jié)能、質(zhì)量易控等優(yōu)點(diǎn)，尤其是短時(shí)快速，可以避免物料長時(shí)間高溫加熱引起的有效成分分解等特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于多種植物的提取，干燥、炮制等并取得了顯著成效。故本實(shí)驗(yàn)對(duì)姜厚樸的微波炮制工藝進(jìn)行了優(yōu)化研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器與試劑 Waters 2695液相分離單元（在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、四元梯度泵、柱溫箱），Waters 2996 PDA檢測器，微量分析天平（EETTLER AE 240瑞士，十萬分之一）（METTLER），色譜純甲醇（天津四友公司），Millipore Simplicity型超純水器（美國Millipore公司），NJL07－3型實(shí)驗(yàn)專用微波爐（南京杰全微波設(shè)備有限公司，額定功率800W），KQ2200DE數(shù)控超聲儀，AUTO SCIENCE溶劑過濾裝置，微孔濾膜（上海醫(yī)藥工業(yè)研究院）。森信DGG－9240A型干燥箱、娃哈哈純凈水，其他試劑均為分析純。

1.2 對(duì)照品及藥材 厚樸酚對(duì)照品:中國藥品生物制品檢定所（批號(hào):110729－200310）;和厚樸酚對(duì)照品:中國藥品生物制品檢定所（批號(hào):110730－200307）。厚樸藥材于2007年5月采自浙江龍泉，經(jīng)浙江林學(xué)院林業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院遺傳學(xué)科斯金平教授鑒定為木蘭科植物厚樸Magnolia officinaisRehd.et Wils.的干燥樹皮。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Waters Xbridge ODS C18柱;流動(dòng)相:MeOH－H2O（78∶22）;柱溫:25 ℃;檢測波長:294 nm;流速:1 mL/min。

2.2 含量測定方法的建立

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱定厚樸酚對(duì)照品2.60 mg、和厚樸酚對(duì)照品0.97 mg，分別置25 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，過0.45 μm微孔濾膜，即得對(duì)照品溶液。

2.2.2 微波炮制品及厚樸生品溶液的制備 取按照最佳工藝進(jìn)行微波炮制所得的炮制品與厚樸生品粉末（過三號(hào)篩）各約0.2 g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，搖勻，密塞，浸漬24 h，濾過。精密量取續(xù)濾液5 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得微波炮制品及厚樸生品溶液。

2.2.3 傳統(tǒng)炮制品溶液的制備 取厚樸絲，加姜汁拌勻，悶潤，待姜汁被吸盡后，置炒制容器內(nèi)用文火加熱，炒干，取出晾涼。取本品粉末（過三號(hào)篩）約0.2 g，精密稱定，按照供試品溶液的制備方法制備，得到傳統(tǒng)炮制品溶液。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取厚樸酚對(duì)照品溶液2、5、10、15、20 μL，和厚樸酚對(duì)照品溶液 1、2、5、10、20 μL分別注入高效液相色譜儀中，按上述色譜條件測定。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，對(duì)照品含量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。計(jì)算厚樸酚與和厚樸酚的回歸方程分別為:Y=1.68×106X－1.19×104，r=0.999 9;Y=1.73×106X－4×103，r=0.999 9。結(jié)果表明厚樸酚在0.092 8～0.928 μg范圍內(nèi)，和厚樸酚在0.020 4～0.408 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 取對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀中，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積積分值，計(jì)算厚樸酚與和厚樸酚的RSD分別為0.62%和0.59%。表明厚樸酚與和厚樸酚精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 分別在 0、2、4、6、8、10、12 h進(jìn)同一樣品溶液10 μL，測定峰面積積分值，計(jì)算厚樸酚與和厚樸酚的RSD分別為0.84%和0.79%。表明厚樸酚與和厚樸酚在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一樣品粗粉5份，每份約0.2 g，精密稱定，按照上述供試品溶液的制備方法制備。取供試品溶液10 μL注入高效液相色譜儀，測定厚樸酚與和厚樸酚峰面積積分值，計(jì)算RSD分別為1.93%和1.39%。

2.2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量的姜炙厚樸粉末約0.1 g，精密稱定，分別加入厚樸酚與和厚樸酚對(duì)照品適量，按供試品溶液的制備方法制備。取樣品供試液10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積積分值，計(jì)算厚樸酚與和厚樸酚的回收率分別為99.08%和98.87% ，RSD分別為1.98%和1.69%。

2.2.9 樣品的含量測定 依次進(jìn)微波炮制品、厚樸生品溶液及傳統(tǒng)炮制品溶液各10 μL于高效液相色譜儀中，按照前述色譜條件測定峰面積積分值，計(jì)算各供試品溶液中厚樸酚與和厚樸酚的含量（以總酚含量計(jì)），結(jié)果厚樸傳統(tǒng)炮制品中厚樸酚與和厚樸酚（總酚）的平均含量為18.708 83 mg/g，RSD為1.64%;而微波炮制品中厚樸酚與和厚樸酚（總酚）的平均含量為20.78 mg/g，RSD為2.44%;厚樸生品中厚樸酚與和厚樸酚（總酚）的平均含量為24.64 mg/g，RSD為2.13%，對(duì)照品和樣品的色譜圖見圖1。

圖1 對(duì)照品及樣品色譜圖

2.3 正交設(shè)計(jì) 選用L9（34）正交方案，以炮制品 中厚樸酚與和厚樸酚（總酚）的含量為考察指標(biāo)，采用生姜用量、微波功率、加熱時(shí)間3個(gè)因素，每個(gè)因素3個(gè)水平進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)選出微波法的最佳炮制工藝，取9份厚樸藥材，每份取樣500 g，結(jié)果見表1、表2 和表3。

表1 因素水平表

表2 L9（34）正交試驗(yàn)表

表3 方差分析結(jié)果

3 討論

3.1 從直觀分析表可以看出，各因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果重要性為微波功率＞加熱時(shí)間＞生姜用量。方差分析結(jié)果表明，微波功率和加熱時(shí)間對(duì)姜制厚樸炮制品中總酚含量的影響有顯著意義（P＞0.05），而生姜用量的影響較少（P＜0.05）。因此微波炮制姜厚樸的最佳工藝為A2B2C2，即生姜用量10%，微波功率550 W，微波時(shí)間15 min。

3.2 通過與傳統(tǒng)炮制品比較可知，傳統(tǒng)炮制法生產(chǎn)過程中炮制火候、溫度、時(shí)間等較難掌握，溫度過高則產(chǎn)品易焦糊，過低則產(chǎn)品含水量較高，且費(fèi)工費(fèi)時(shí)。而按照最佳工藝加工出的微波炮制品的總酚含量高于傳統(tǒng)炮制品，且外觀更加美觀，雜質(zhì)較少，炮制過程中的各項(xiàng)參數(shù)簡便可控，無傳統(tǒng)姜炙過程中的煙塵污染，不對(duì)生產(chǎn)人員的身體健康造成傷害。可見，微波法炮制姜制厚樸的工藝合理可行，建立的HPLC方法準(zhǔn)確，重復(fù)性好，適用于厚樸飲片的質(zhì)量控制。

［1］中國藥典［S］.一部.2005:205.

［2］李杰萍，梁 統(tǒng)，周克元，等.厚樸酚對(duì)趨化三肽激活的大鼠中性粒細(xì)胞功能的影響［J］.中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，34（3）:260－263.

［3］黃文華，郭寶林，斯金平.不同種源厚樸酚性成分的HPLC圖譜研究［J］. 中國中藥雜志，2005，30（13）:968－971.

［4］中國藥典［S］.一部.2005:196.

［5］歐陽榮，周新蓓，胡鐵驪，等.厚樸生片及5種不同炮制品的質(zhì)量比較［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2007，13（10）:19－21.

［6］葉定江，原思通.中藥炮制學(xué)辭典［M］.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2005:469.