不同廠家華法林鈉片的質(zhì)量評價

黎月玲，古淑儀，陳青青

（1.廣州市紅十字會醫(yī)院，廣州市 510220；2.廣東藥學(xué)院，廣州市 510006）

華法林鈉（Warfarin sodium）為香豆素類口服抗凝藥，是臨床常用的口服抗凝藥物。目前臨床使用的華法林鈉片有國內(nèi)、外不同的生產(chǎn)廠家。據(jù)臨床反映，國產(chǎn)華法林鈉片的臨床療效與進口品比較有差異，且不同廠家產(chǎn)品之間的療效、不良反應(yīng)差異也較大。由此導(dǎo)致的后果是患者從進口產(chǎn)品換為國產(chǎn)品或國產(chǎn)不同產(chǎn)品之間更換時，往往需要調(diào)整劑量，否則會影響治療效果或易致出血。這對于需長期服用華法林的患者造成極大的不便，也存在安全隱患。為了解目前市面銷售的華法林鈉片的質(zhì)量，本文對國內(nèi)、外4廠家的華法林鈉片進行質(zhì)量對比，為臨床合理用藥提供參考。

1 儀器與試藥

RCZ-5A藥物溶出儀（天津大學(xué)精密儀器廠）；高效液相色譜儀，包括515型泵、996二極管陣列檢測器、柱溫箱、Millennium工作站（美國Waters公司）；AEG-220電子分析天平（日本島津制作所）；101-2-S型電子恒溫鼓風(fēng)干燥箱、TSHZ-A臺式水浴恒溫振蕩器（上海躍進醫(yī)療器械廠）；HN10068超聲清洗器（廣州華南超聲設(shè)備廠）；YXI-3恒溫水浴鍋（廣州市越秀區(qū)醫(yī)療器械廠）。

華法林鈉片：A廠，產(chǎn)地：芬蘭，批號：1212624，規(guī)格：每片3 mg；B廠，產(chǎn)地：河南，批號：0701161，規(guī)格：每片2.5 mg；C廠，產(chǎn)地：山東，批號：703007KA，規(guī)格：每片2.5 mg；D廠，產(chǎn)地：上海，批號：070901，規(guī)格：每片2.5 mg；華法林鈉對照品（齊魯制藥有限公司，含量：102.72%）；亞芐基丙酮（國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：T20070727）；對羥基苯甲酸丙酯（天津基準(zhǔn)化學(xué)試劑有限公司，批號：20070920，含量：＞99.5%）；甲醇為色譜純；水為純化水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測定

2.1.1 溶液的制備。溶液Ⅰ：取磷酸二氫鉀1.36 g，加水50 mL溶解，加入0.2 mol·L－1氫氧化鈉溶液39.1 mL，再加水至200 mL，以氫氧化鈉溶液或磷酸調(diào)至pH（7.4±0.1），得磷酸鹽緩沖液。取上述磷酸鹽緩沖液與乙腈以85∶15的比例混合均勻，得溶液Ⅰ。

內(nèi)標(biāo)液：取對羥基苯甲酸丙酯適量，精密稱定，加乙腈溶解，使成濃度為1 mg·mL－1的溶液。

對照品溶液：取華法林鈉約31.2 mg，精密稱定，置于100 mL容量瓶中，加0.1 mol·L－1氫氧化鈉溶液 39 mL溶解，再加入0.2 mol·L－1磷酸二氫鉀溶液25 mL，加水稀釋至刻度，搖勻。精密量取15.0 mL置于50 mL容量瓶中，加內(nèi)標(biāo)液5.0 mL，以溶液Ⅰ稀釋至刻度。

2.1.2 色譜條件。色譜柱：Hypersil C18（25 cm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水-冰醋酸（68∶32∶1）；流速：1.0 mL·min－1；測定波長：280 nm。

2.1.3 樣品含量測定。按美國藥典（USP 30）[1]的方法和標(biāo)準(zhǔn)進行測定。取華法林鈉片20片，研成粉末，取粉末適量（約相當(dāng)于華法林鈉5 mg），精密稱定，置于50 mL容量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)液5 mL及溶液Ⅰ30 mL。超聲10 min，振搖60 min。加入溶液Ⅰ稀釋至刻度，濾過，得供試液。取對照品溶液、供試液各20 μL，分別注入色譜儀，記錄峰面積，計算華法林鈉的含量，應(yīng)為標(biāo)示量的95.0%～105.0%。4廠家產(chǎn)品標(biāo)示百分含量見表1。

表1 4廠家華法林鈉片含量、含量均勻度、有關(guān)物質(zhì)及溶出度測定結(jié)果Tab 1 Determination of content，content uniformity，related substances and dissolution of Warfarin sodium tablets from four pharmaceutical manufacturers

2.2 含量均勻度

按USP 30的方法進行檢查[1]。每個廠家的產(chǎn)品各抽取10片，按照“2.1”項下的操作逐片測定含量，計算平均標(biāo)示百分含量（），再根據(jù)接受值（AV）公式計算AV。若AV≤15.0%，則判為合格。4廠家華法林鈉片的AV值見表1。

2.3 有關(guān)物質(zhì)檢查

參照英國藥典（BP 2003）[2]，取粉碎后的華法林鈉片適量（約相當(dāng)于華法林鈉40 mg），加水30 mL，振搖15 min，再加鹽酸0.1 mL。以氯仿萃取3次，每次10 mL，提取液以無水硫酸鈉脫水，合并萃取液，置于恒溫水浴鍋上蒸干（40℃），殘渣以丙酮2 mL溶解，得溶液a。精密量取溶液a 0.01 mL，以丙酮稀釋至2.0 mL，得溶液b。取亞芐基丙酮適量，以丙酮溶解，制成0.0020%（W/V）的溶液c。取溶液a、b、c各20 μL，在同一硅膠GF254薄層板上分別點樣，以氯仿-環(huán)己烷-冰醋酸（5∶5∶2）為展開劑，展開，晾干，置于紫外光燈（254 nm）下檢視。在溶液a色譜中，在與亞芐基丙酮斑點相應(yīng)的位置上若有斑點，斑點顏色不得深于溶液c（限度為0.0020%）；其余雜質(zhì)斑點顏色不得深于溶液b的主斑點（限度為0.5%）。

薄層色譜結(jié)果顯示，在4廠家的溶液a色譜中，在與亞芐基丙酮斑點相應(yīng)的位置上，所顯斑點的顏色均淺于溶液c，即亞芐基丙酮含量均低于0.0020%；但其余雜質(zhì)斑點中均有深于溶液b主斑點的情況，即未知雜質(zhì)的含量大于0.5%，結(jié)果詳見表1。

2.4 溶出度測定

2.4.1 溶液的制備。內(nèi)標(biāo)液：取對羥基苯甲酸丙酯適量，精密稱定，加水溶解，使每1 mL中對羥基苯甲酸丙酯含量約為華法林片劑標(biāo)示量的1/400，必要時可加少量甲醇助溶。

標(biāo)準(zhǔn)貯備液：取華法林鈉適量，精密稱定，加水溶解使成濃度為0.0011L mg·mL－1溶液（L：華法林片劑中華法林鈉的標(biāo)示量（mg））。必要時可加入少量0.1 mol·L－1氫氧化鈉溶液助溶。

標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密量取標(biāo)準(zhǔn)貯備液3.0 mL，加入內(nèi)標(biāo)溶液1.0 mL，混勻，即得。

供試液：取溶出度試驗溶液適量，濾過，取續(xù)濾液3.0 mL，加入內(nèi)標(biāo)溶液1.0 mL，混勻，即得。

2.4.2 色譜條件。同“2.1.2”項。

2.4.3 溶出液制備及測定。同一批號的華法林鈉片各取6片，照USP 30溶出度測定法[1]中的槳法進行測定。溶出介質(zhì)為純化水，體積900 mL；轉(zhuǎn)速 50 r·min－1；溫度（37±0.5）℃。于30 min時從溶出缸中抽取試驗溶液適量，濾過。取續(xù)濾液3.0 mL，加入內(nèi)標(biāo)溶液1.0 mL，制成供試液。取標(biāo)準(zhǔn)溶液、供試液各40 μL，注入色譜儀，測定，以內(nèi)標(biāo)法計算溶出量，最后求出溶出度。30 min的溶出度應(yīng)不少于標(biāo)示量的80%。

2.4.4 結(jié)果。4廠家華法林鈉片的溶出度見表1。對所得數(shù)據(jù)進行單因素方差分析（F-檢驗），結(jié)果4廠家的華法林鈉片溶出度均數(shù)之間有極顯著性差異；再作進一步的多重比較，結(jié)果A與B、A與C、B與C、B與D、C與D之間均數(shù)差別均具有高度顯著性，A與D均數(shù)不具有顯著性差異。溶出度的方差分析見表2，多組均數(shù)間兩兩比較結(jié)果見表3。

表2 4廠家華法林鈉片溶出度的方差分析Tab 2 Variance analysis on dissolutions of Warfarin sodium tablets from four pharmaceutical manufacturers

表3 多組均數(shù)間兩兩比較結(jié)果Tab 3 Pairwise comparisons of mean data between groups

由表2和表3可見，經(jīng)方差分析和多重比較可知，A廠和D廠的差異不具有顯著性，二者與B廠的差異則具有統(tǒng)計學(xué)意義。按溶出度大小排列為A廠＝D廠＞B廠＞C廠。

3 討論

華法林鈉片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在《中國藥典》（2005年版）、USP 30、BP 2003均有收載[1～3]，各藥典所用的方法和標(biāo)準(zhǔn)有所差異。本文通過比較不同國家的標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合實際情況，選擇了標(biāo)準(zhǔn)較高、操作相對簡便的方法，從有關(guān)物質(zhì)、溶出度、含量均勻度和含量等方面對4廠家的華法林鈉片進行質(zhì)量對比研究。

在含量測定方面，無論從方法還是限度范圍，USP 30要求最為嚴(yán)格。因此，本試驗采用USP 30的方法，結(jié)果4廠家的產(chǎn)品均符合USP 30的要求。

含量均勻度檢查，BP 2003采用計數(shù)法，以實測含量的平均值表示，而USP 30和《中國藥典》（2005年版）則采用計量法，根據(jù)統(tǒng)計量進行判斷。從統(tǒng)計學(xué)意義上講，計量法比計數(shù)法的科學(xué)性強，錯判率低；另有研究結(jié)果顯示USP 30以AV的大小為判斷標(biāo)準(zhǔn)，判斷準(zhǔn)確性較《中國藥典》（2005年版）高[4，5]。因此，本試驗應(yīng)用USP 30的標(biāo)準(zhǔn)作含量均勻度檢查，結(jié)果4廠家的產(chǎn)品均符合USP 30的要求，但值得注意的是，C廠產(chǎn)品的含量均勻度判定值——AV接近界限值15.0%。

對于有關(guān)物質(zhì)檢查，USP 30未作規(guī)定，《中國藥典》（2005年版）和BP 2003則采用薄層色譜法進行檢查，BP 2003對已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)均設(shè)立了限量要求，對雜質(zhì)的控制比《中國藥典》（2005年版）更為明確和嚴(yán)格。因此，本試驗采用BP 2003的方法對有關(guān)物質(zhì)進行檢查，結(jié)果4廠家產(chǎn)品中亞芐基丙酮（雜質(zhì)之一）含量均小于0.0020%，但其它未知雜質(zhì)限量則超過0.5%的限度范圍。華法林鈉片的不良反應(yīng)是否與未知雜質(zhì)有關(guān)，有待進一步研究。

在溶出度檢查中，以USP 30的規(guī)定最為嚴(yán)格。本試驗采用USP 30的方法作溶出度檢查。從溶出度試驗結(jié)果可知，A廠和D廠的片劑30 min內(nèi)幾乎全部溶解，B廠片劑的溶出度稍低，但仍大于標(biāo)示量的80%，所以A、B、D廠的華法林鈉片均符合USP 30的要求。C廠產(chǎn)品不符合USP 30及《中國藥典》（2005年版）的要求。結(jié)果，A廠與D廠的溶出度比較無顯著性差異，二者與B廠比較具有統(tǒng)計學(xué)意義差異。溶出度大小排列為A廠＝D廠＞B廠＞C廠。溶出度的差異可能與不同廠家所用的輔料不同、生產(chǎn)工藝不同等因素有關(guān)。

體外溶出度的大小反映了藥物從制劑中溶出的速度和程度，并與口服生物利用度密切相關(guān)。相同劑量下，溶出度大的片劑往往能產(chǎn)生較強的藥理效應(yīng)或毒理作用，臨床上觀察到的療效差異可能與此相關(guān)。

綜上所述，4廠家的華法林鈉片在質(zhì)量上存在一定差異，進口品與某一國產(chǎn)品質(zhì)量接近，并優(yōu)于其它國產(chǎn)品。總體質(zhì)量評價為A廠與D廠好于B廠，更優(yōu)于C廠，C廠的產(chǎn)品質(zhì)量較差。

[1]美國藥典委員會編.美國藥典[S].第30版.USP，2006：3471、附錄711.

[2]英國藥品委員會編.英國藥典[S].2003版.BP，2003：2990.

[3]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：204.

[4]陶巧鳳，趙昱，羅旭.《美國藥典》29版含量均勻度檢查方法的統(tǒng)計特性分析[J].中國藥學(xué)雜志，2007，42（12）：932.

[5]孫苓苓.中國藥典含量均勻度檢查法與美英日藥典的比較[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2003，4（3）：13.