高蛋白飲食對(duì)犬體內(nèi)司帕沙星藥動(dòng)學(xué)的影響

康紀(jì)平，何海霞，李秋波，馮曉科（.四川省養(yǎng)麝研究所，都江堰市 6830；2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床藥理研究室，重慶市 40006）

司帕沙星（Sparfloxacin，SPFX）是第3代氟喹諾酮類廣譜抗菌藥，已在臨床廣泛應(yīng)用，其具有口服吸收良好、組織分布廣、血漿蛋白結(jié)合率低、消除t1/2長(zhǎng)等藥動(dòng)學(xué)特點(diǎn)。文獻(xiàn)[1]報(bào)道，進(jìn)食幾乎不影響其吸收，但高蛋白飲食是否對(duì)其吸收等有影響未見文獻(xiàn)報(bào)道，為此，本研究將探討高蛋白飲食是否影響SPFX在Beagle犬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，以為該藥的合理用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 試藥

SPFX片（河南帥克制藥有限公司，批號(hào)：20081201，規(guī)格：每片0.1 g）；SPFX對(duì)照品（重慶蕓峰藥業(yè)有限公司，批號(hào)：030612，純度：99.1%；使用時(shí)精確稱取SPFX 20 mg，置于50 mL容量瓶中，用適量甲醇溶解，加甲醇至刻度，即為400 μg·mL－1的SPFX標(biāo)準(zhǔn)貯備液，備用；再用雙蒸水稀釋為400 ng·mL－1的工作濃度備用）；內(nèi)標(biāo)諾氟沙星（NF，山西博達(dá)制藥有限公司，純度：99.0%。使用時(shí)精密稱取NF對(duì)照品10 mg，置于50 mL容量瓶中，用適量雙蒸水溶解，加雙蒸水至刻度，混勻，即為200 μg·mL－1的NF標(biāo)準(zhǔn)貯備液；再用雙蒸水稀釋為20 μg·mL－1的工作濃度）；乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純；高蛋白飲食為雀巢奶粉。

1.2 動(dòng)物

健康合格Beagle犬8只，♀♂各半，體質(zhì)量10 kg左右，由四川養(yǎng)麝研究所提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證為：川實(shí)動(dòng)管質(zhì)第63號(hào)，環(huán)境設(shè)施合格證號(hào)為：川實(shí)動(dòng)管第64號(hào)。

1.3 儀器

1100系列高效液相色譜（HPLC）儀，包括1100泵系統(tǒng)、可調(diào)波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器和1100工作站（美國(guó)Agilent公司）。

1.4 分組及給藥

選取犬8只，♀♂各半，隨機(jī)分為SPFX空腹組和合用高蛋白飲食組，即分別為空腹組與高蛋白飲食組，每組4只。犬于實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，實(shí)驗(yàn)開始時(shí)，高蛋白飲食組供給牛奶每只200 g，同時(shí)給予SPFX 10 mg·kg－1[2]；空腹組僅給予SPFX 10 mg·kg－1和水（每只200 mL），然后送回籠中，8 h后統(tǒng)一進(jìn)食。各組于給藥后1、2、3、4、5、6、8、12、24、48 h經(jīng)大隱靜脈采血3 mL，分離血漿，－20℃保存，待測(cè)。2周后2組交叉實(shí)驗(yàn)，取血樣時(shí)間等均同前。

1.5 血藥濃度測(cè)定

1.5.1 色譜條件。色譜柱：Hypersil C18（200 mm×5.0 mm，5 μm）；固定進(jìn)樣環(huán)：100 μL；流動(dòng)相：甲醇-0.008 mol·L－1磷酸鹽緩沖液-0.5 mol·L－1四丁基溴化銨＝25∶75∶4；流速：1.0 mL·min－1；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：292 nm；柱溫：室溫；內(nèi)標(biāo)：NF。

1.5.2 樣品處理。參照文獻(xiàn)[2]，取1.0 mL犬血漿樣品，加入NF 0.1 mL（20 μg·mL－1）、0.05 mol·L－1NaOH 0.1 mL 和 4 mL CHCl2，旋搖1 min，3000 r·min－1離心2 min，去有機(jī)層，置于40℃水浴中，氮?dú)獯蹈?。?.1 mL流動(dòng)相復(fù)溶，進(jìn)樣50μL。

1.5.3 方法學(xué)研究。（1）色譜行為：在本實(shí)驗(yàn)所采用的色譜條件下，取SPFX+NF對(duì)照品溶液、空白血漿、空白血漿+SPFX+NF、犬服藥后2 h血漿+NF進(jìn)樣分析，色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.SPFX+NF對(duì)照品；B.空白血漿；C.空白血漿+SPFX+NF；D.犬服藥后2 h血漿+NF；1.NF；2.SPFXFig 1 HPLC chromatographyA.SPFX+NF control；B.blank plasma；C.blank plasma+SPFX+NF；D.plasma 2 h after administration+NF；1.NF；2.SPFX

由圖1可見，血漿中SPFX的tR為7.6 min左右，內(nèi)標(biāo)NF的tR為4.5 min左右。SPFX和NF峰形良好，且不受血漿內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性關(guān)系與最低定量濃度：在空白血漿中分別添加SPFX使血藥濃度相當(dāng)于4.0000、2.0000、1.0000、0.5000、0.2500、0.1250、0.0625、0.03125 μg·mL－1，按“樣品處理”項(xiàng)下操作，將所得數(shù)據(jù)SPFX峰面積/NF峰面積比Y與SPFX濃度X進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y＝3.5307X－0.1346（r＝0.9994，n＝5）。結(jié)果，SPFX檢測(cè)濃度線性范圍為0.03125～4.0000 μg·mL－1，最低定量濃度為0.03125 μg·mL－1（RSD＝15.66%，n＝5）。

（3）精密度和重復(fù)性：取高、中、低3種質(zhì)控樣本（4.0000、0.5000、0.0625 μg·mL－1），每個(gè)濃度5份，考察批內(nèi)和批間變異。批內(nèi)誤差（每個(gè)濃度同日內(nèi)測(cè)定5次）、日內(nèi)變異性結(jié)果及批間誤差（每個(gè)濃度連續(xù)測(cè)5 d，每天測(cè)1次）、日間變異性結(jié)果見表1。

表1 精密度及重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果（n＝5）Tab 1 Results of precision and repeatability（n＝5）

（4）回收率：取高、中、低3種質(zhì)控樣本（4.0000、0.5000、0.0625 μg·mL－1），每個(gè)濃度5份，按規(guī)定方法評(píng)價(jià)本法的回收率。結(jié)果高、中、低濃度的回收率分別為（101.11±5.43）%、（99.34±3.58）%、（105.28±5.35）%。

（5）凍融穩(wěn)定性考察：將含藥血漿反復(fù)冷凍（－20℃）、融化，按“樣品處理”項(xiàng)下方法處理及測(cè)定，5周內(nèi)測(cè)定5次。結(jié)果表明，血漿樣品在5周內(nèi)經(jīng)反復(fù)凍融，穩(wěn)定性良好，RSD＝6.15%。

1.6 數(shù)據(jù)處理

采用中國(guó)藥理數(shù)理學(xué)會(huì)編制的3p97計(jì)算機(jī)軟件，計(jì)算各個(gè)體的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。數(shù)據(jù)以表示，組間行t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 藥-時(shí)曲線

空腹組與高蛋白飲食組SPFX的平均血藥濃度-時(shí)間曲線見圖2。

圖2 2組平均血藥濃度-時(shí)間曲線Fig 2 Mean plasma concentration-time curve of 2 groups

2.2 藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

受試犬血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)采用計(jì)算機(jī)3p97程序自動(dòng)擬合，空腹組與高蛋白飲食組的口服吸收過程分別符合二室、一室模型。求得有關(guān)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表2。

表2 2組藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比較（，n＝8）Tab 2 Comparison of pharmacokinetic parameters between 2 groups（，n＝8）

表2 2組藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比較（，n＝8）Tab 2 Comparison of pharmacokinetic parameters between 2 groups（，n＝8）

與空腹組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.fasting group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

由表2可見，高蛋白飲食組與空腹組比較，lag time、tmax延長(zhǎng)（P＜0.01），t1/2β/t1/2ke降低，Cmax無顯著性差異，AUC（0～t）增加。

3 討論

目前對(duì)SPFX的血藥濃度檢測(cè)幾乎均選HPLC法測(cè)定，但測(cè)定條件如流動(dòng)相等各有不同。在本研究中，筆者選用甲醇和磷酸鹽緩沖液，同時(shí)加入四丁基溴化銨作為流動(dòng)相，結(jié)果表明檢測(cè)結(jié)果較好、方法簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好、保留時(shí)間恰當(dāng)。原因是SPFX結(jié)構(gòu)中同時(shí)具有芳胺和芳酸結(jié)構(gòu)，整體呈現(xiàn)酸性，如果采用三乙胺和磷酸鹽組成緩沖液與甲醇混合可致SPFX的保留時(shí)間過短，不能使藥物與有關(guān)雜質(zhì)峰充分分離，而加入離子對(duì)四丁基溴化銨可使SPFX保留時(shí)間延長(zhǎng)1倍以上，保證藥物與雜質(zhì)充分分離。

文獻(xiàn)[1]報(bào)道，進(jìn)食對(duì)SPFX的吸收幾乎無影響。本研究結(jié)果表明，合用高蛋白飲食后，與空腹相比較lag time延長(zhǎng)，導(dǎo)致吸收滯后，故tmax也延長(zhǎng)。雖然高蛋白飲食可推遲藥物的tmax，并可加速藥物自體內(nèi)的排出，提高了AUC（0～t）值，但Cmax間比較無顯著性差異。

總的來說，高蛋白飲食可延緩SPFX的吸收速度，但可增加吸收量，加快其排出速度，可明顯影響司帕沙星藥動(dòng)學(xué)。該作用是否因高蛋白與SPFX間形成一定的復(fù)合物而減慢吸收，促進(jìn)其排泄引起，尚待進(jìn)一步研究。

[1]杜黎明，衛(wèi)洪清，郜 艷，等.反相高效液相色譜法測(cè)定人尿中的司帕沙星[J].分析化學(xué)，2001，29（9）：1108.

[2]張 斌，汪華蓉，康紀(jì)平，等.脂質(zhì)飲食對(duì)加替沙星藥動(dòng)學(xué)的影響[J].中國(guó)藥房，2008，19（25）：1952.