賴諾普利聚乙烯醇微粒的制備及其質(zhì)量評(píng)價(jià)Δ

吳俊珠，金拓（1.大理學(xué)院藥學(xué)院，大理市671000；2.上海交通大學(xué)藥學(xué)院，上海市200240）

賴諾普利聚乙烯醇微粒的制備及其質(zhì)量評(píng)價(jià)Δ

吳俊珠1，2＊，金拓2#（1.大理學(xué)院藥學(xué)院，大理市671000；2.上海交通大學(xué)藥學(xué)院，上海市200240）

目的：制備賴諾普利聚乙烯醇微粒并評(píng)價(jià)其質(zhì)量。方法：以聚乙烯醇為載體，采用噴霧干燥法制備賴諾普利聚乙烯醇微粒?？疾熘苿┑男螒B(tài)、粒徑、跨度、載藥量、包封率和體外溶出度。結(jié)果：所制賴諾普利聚乙烯醇微粒為近球形，表面有孔，平均粒徑為17.29μm，跨度為0.88，載藥量為31.40%，包封率為94.20%，30min時(shí)體外累積溶出百分率達(dá)90%以上。結(jié)論：該制劑制備工藝簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，質(zhì)量檢測(cè)指標(biāo)合格。

賴諾普利；聚乙烯醇；微粒；噴霧干燥法；制備；質(zhì)量評(píng)價(jià)

賴諾普利（Lisinopril，LIS）是第3代血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（ACEI），臨床用于高血壓和心力衰竭的治療。目前，心血管疾病的治療和二級(jí)預(yù)防常常需要多種藥物聯(lián)合使用[1]，但由此可致患者用藥的順應(yīng)性較差，而開(kāi)發(fā)攜帶、使用方便的復(fù)方劑型可解決此問(wèn)題。為使LIS與其它活性成分（尤其是液體魚(yú)油）制備復(fù)方制劑時(shí)有良好的穩(wěn)定性，筆者以理化性質(zhì)較穩(wěn)定、生物相容性好的聚乙烯醇（Polyvinyl alcohol，PVA）為載體[2]制備LIS-PVA微粒（LIS-PVA-MP）。PVA-MP的制備有多種方法：以醋酸乙烯為原料，采用乳化-聚合-水解-交聯(lián)的方法制備交聯(lián)度不同雙層結(jié)構(gòu)的小球（PVA beads）[3，4]；或以PVA為原料，采用乳化-物理交聯(lián)法[2]以及乳化-化學(xué)交聯(lián)法[5]制備微球；或采用噴霧干燥法制備載藥微粒[6]。本研究中筆者采用噴霧干燥法制備LIS-PVA-MP，通過(guò)正交試驗(yàn)考查處方、工藝對(duì)載藥微粒粒徑、形態(tài)、載藥量、包封率的影響，并進(jìn)行體外溶出試驗(yàn)，為該復(fù)方制劑的研究提供基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

OPDT-8噴霧干燥機(jī)（上海大川原干燥設(shè)備有限公司）；2102PC型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（美國(guó)Unico公司）；高效液相色譜（HPLC）儀，包括LC-10AT VP泵、SPD-10AVP紫外檢測(cè)器（日本島津公司）；pH S-3TC數(shù)顯pH計(jì)（上海天達(dá)儀器有限公司）；KQ-100DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；S-2150型掃描電鏡（日本Hitachi公司）；CIS 100粒度粒形分析儀（荷蘭Ankersmid儀器有限公司）；RCZ-6B1型藥物溶出度儀（上海黃海藥檢儀器有限公司）。

1.2 試藥

賴諾普利（批號(hào)：050912，純度：98.2%）及賴諾普利精制品（批號(hào)：050912，純度：99.91%）均由大洋化工有限公司提供；己烷磺酸鈉（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，含量：≥98.0%）；PVA（Mr：13000～23000，醇解度：87%～89%；Mr：31000～50000，醇解度：87%～89%；Mr：85000～124000，醇解度：87%～89%）購(gòu)自美國(guó)Aldrich公司；磷酸二氫鉀、磷酸、氫氧化鈉、鹽酸為分析純，液體石蠟為化學(xué)純，乙腈為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 分析方法建立

2.1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇。以0.1mol·L－1鹽酸（以下簡(jiǎn)稱(chēng)溶劑）為溶劑，制備濃度為100μg·mL－1的LIS溶液及400μg·mL－1的PVA溶液，以溶劑為空白，在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果LIS在215nm波長(zhǎng)附近處有最大吸收峰，而PVA在此波長(zhǎng)處幾乎無(wú)吸收，故選擇215nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.1.2 色譜條件。色譜柱：Shim-Pack VP-ODS（150mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-pH 2.5磷酸鹽緩沖液（含0.0053mol·L－1己烷磺酸鈉）＝20∶80；流速：0.5mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm ；柱溫：55℃；進(jìn)樣量：20μL。

2.1.3 系統(tǒng)適用性。在上述色譜條件下，以0.1mol·L－1鹽酸為溶劑，制備LIS精制品溶液、供試品溶液（按“2.3.4”項(xiàng)下方法制備），分別取上述2種溶液及空白樣品溶液（取微粒處方用量的PVA，按供試品溶液制備方法制備）各20μL進(jìn)樣，記錄色譜。結(jié)果，PVA對(duì)主藥測(cè)定無(wú)干擾。3種溶液色譜見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.精制品溶液；B.供試品溶液；C.空白樣品溶液Fig 2 HPLC chromatographyA.reference substance solution；B.samples solution；C.blank sample solution

2.1.4 線性范圍與最低檢測(cè)限。精密稱(chēng)定LIS精制品10mg，用溶劑約50mL溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，溶劑稀釋至刻度，搖勻，得精制品貯備液a。精密吸取50mL貯備液a置于100mL容量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，得貯備液b。分別精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL貯備液b置于10mL容量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，配制一系列不同濃度的LIS溶液。在上述色譜條件下，分別取20μL進(jìn)樣，每個(gè)濃度重復(fù)進(jìn)樣3次，以LIS峰面積平均值（A）對(duì)其濃度（C）回歸，得回歸方程：A＝30217C+13774（r＝0.9998），結(jié)果，LIS檢測(cè)濃度在5～100μg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低檢測(cè)限為8ng（信噪比S/N＝3）。

2.1.5 精密度試驗(yàn)。日內(nèi)精密度：取20μg·mL－1精制品溶液，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，其峰面積RSD＝0.84%。日間精密度：3d內(nèi)分別制備20μg·mL－1精制品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，其峰面積RSD＝1.36%。

2.1.6 回收率試驗(yàn)。分別精密稱(chēng)取LIS精制品10.0、11.0、10.4mg，按1∶3配比精密加入PVA，混勻，得3份模擬微粒，分別置于燒杯中，加入溶劑約50mL，60℃水浴加熱5min，完全溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，溶劑稀釋至刻度，搖勻。再對(duì)每份溶液繼續(xù)分別精密吸取0.5、5.0mL置于10mL容量瓶中，溶劑稀釋至刻度，搖勻，共制備低、中、高濃度的9份溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果樣品的平均回收率為100.3%，RSD＝1.0%（n＝9），符合含量測(cè)定要求。

2.1.7 重復(fù)性試驗(yàn)。取同一批號(hào)的LIS-PVA-MP，分別精密稱(chēng)定5份，按“2.3.4”項(xiàng)下操作制備供試品溶液及對(duì)照液，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算微粒含藥量及載藥量（%），結(jié)果微粒中LIS平均載藥量為39.62%，RSD＝1.56%。

2.1.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)。將供試品溶液置于冰箱中4℃保存，分別于0、2、6、8、12、24h 取樣，按上述色譜條件進(jìn)樣，6次所得峰面積的RSD＝0.66%，表明樣品溶液于4℃保存在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2 LIS-PVA-MP制備工藝

稱(chēng)取PVA加入適量去離子水，水浴加熱溶解，放冷后加入LIS，攪拌使之溶解制備含藥料液，采用進(jìn)風(fēng)溫度185℃、出風(fēng)溫度95℃，旋風(fēng)分離器壓力0.65kPa，噴霧干燥法制備LISPVA-MP。

2.3 正交試驗(yàn)優(yōu)化LIS-PVA-MP的處方與工藝

2.3.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)。據(jù)初步試驗(yàn)結(jié)果，選擇對(duì)微粒粒徑、分布、形態(tài)、載藥量和包封率有影響的4個(gè)因素，每個(gè)因素取3個(gè)水平，采用L9（34）正交設(shè)計(jì)表安排試驗(yàn)，因素及水平見(jiàn)表1。

表1 因素水平表Tab 1Factors and levels

2.3.2 粒徑及分布測(cè)定。取適量LIS-PVA-MP，加入約5mL輕質(zhì)液體石蠟，超聲波分散10min，用粒度粒形分析儀測(cè)定平均粒徑、D10、D50、D90，并由此計(jì)算跨度＝（D90－D10）/D50。

2.3.3 微粒形態(tài)的觀察。取適量LIS-PVA-MP分散于導(dǎo)電膠表面，噴金后，采用掃描電鏡觀察其形態(tài)。根據(jù)顆粒的圓整度、表面凹陷程度、粘連程度對(duì)各微粒評(píng)分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：球形+++（3），近球形++（2），不規(guī)則形（0）；無(wú)凹陷++++（4），略有凹陷+++（3），凹陷較多++（2），不規(guī)則形（0）；顆粒無(wú)粘連+++（3），顆粒輕微粘連++（2），顆粒粘連較多（1），顆粒呈條狀絲狀（0）。

2.3.4 載藥量與包封率的測(cè)定。取LIS-PVA-MP適量精密稱(chēng)定，置于燒杯中，加入溶劑約50mL，60℃水浴加熱5min，完全溶解，放冷，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，溶劑稀釋至刻度，搖勻，0.45μm濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；同時(shí)配制LIS對(duì)照液，按上述色譜條件，分別取供試品溶液及對(duì)照液各20μL進(jìn)樣，記錄峰面積，外標(biāo)法計(jì)算含量。按微粒中LIS的百分含量（%，W/W）計(jì)算載藥量，根據(jù)實(shí)際藥物含量與理論藥物含量比值的百分率計(jì)算包封率（EE%）。

2.3.5 正交試驗(yàn)結(jié)果與分析。采用綜合評(píng)分法優(yōu)化處方、工藝，按評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：S1＝（10/平均粒徑）×2，S2＝（2/跨度）×2，S3＝（載藥量/10）×2，S4＝（包封率/10）×2，S5＝形態(tài)評(píng)分×2，Y＝S1+S2+S3+S4+S5。正交試驗(yàn)的9次試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果Tab 2 Results of orthogonal test

以A、B、C、D因素分別為自變量X1、X2、X3、X4，以Y為因變量，采用Excel電子表格進(jìn)行多元曲線回歸，得回歸方程：Y＝－29.876+0.00031959X1+127.09X2－ 1.9436X3+1.5712X4（r＝0.9355），標(biāo)準(zhǔn)誤差S＝2.4403，F(xiàn)＝7.0087＞F0.05（4，4）＝6.3882，回歸具有顯著性（α＝0.05）。

根據(jù)回歸方程，當(dāng)X1取31000、X2取0.05、X3取0.33（1∶3）、X4取40時(shí)，總分Y最高，即A2B3C3D3。然而，考慮到實(shí)際的試驗(yàn)中，料液中PVA的濃度不宜太高，否則制得的微粒易發(fā)生粘連，LIS-PVA投料比也不宜取最小，否則載藥量過(guò)小。因此，根據(jù)實(shí)際情況，本試驗(yàn)中取A2B2C2D3為優(yōu)化結(jié)果。

2.3.6 優(yōu)化條件驗(yàn)證。按A2B2C2D3條件制備3批微粒，分別測(cè)定粒徑、跨度、粒徑分布，考查微粒形態(tài)（結(jié)果評(píng)為9分），并測(cè)定載藥量與包封率，相關(guān)結(jié)果見(jiàn)表3、圖2、圖3。

表3 3批微粒各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果Tab 3 Index determination of 3batches of LIS-PVA-MP

圖2 微粒掃描電鏡圖（×1000）Fig 2 Scanning electron micrograph（×1000）

圖3 微粒的粒徑分布圖Fig 3 Distribution of particle size of LIS-PVA-MP

由圖2可見(jiàn)，LIS-PVA-MP為近球形，表面有孔、略有凹陷。按評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為驗(yàn)證試驗(yàn)的產(chǎn)品微粒打分，結(jié)果Y＝48.82。將驗(yàn)證試驗(yàn)的自變量代入回歸方程，可求得預(yù)測(cè)值y＝45.72，預(yù)測(cè)范圍為 y±U0.05×S，查表U0.05＝1.960，預(yù)測(cè)范圍為（40.94，50.50）。優(yōu)化后的實(shí)際得分為48.82，高于前9個(gè)試驗(yàn)號(hào)的得分，并在預(yù)測(cè)范圍內(nèi)，與預(yù)測(cè)值之間的偏差為6.78%。

2.4 LIS-PVA-MP體外溶出度考察

對(duì)驗(yàn)證試驗(yàn)制得的3批微粒，各稱(chēng)取約相當(dāng)于LIS 10mg的微粒裝于膠囊殼中，放入沉降籃內(nèi)，根據(jù)《美國(guó)藥典》28版（簡(jiǎn)稱(chēng)USP 28）[7]LIS片溶出度測(cè)定方法，分別在0、5、10、15、20、30、40、50、60、75min 時(shí)各取5mL，并向溶出杯內(nèi)補(bǔ)加溶出介質(zhì)5mL，采用“2.1.2”所述色譜條件測(cè)定，計(jì)算累積溶出百分率（n＝3），結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖4 LIS-PVA-MP體外溶出曲線（n＝3）Fig 4 Dissolution curves of LIS-PVA-MP（n＝3）

圖4 表明，微粒15min時(shí)溶出50%左右，30min溶出達(dá)90%以上，40min可達(dá)98%以上，其釋藥規(guī)律符合Weibull方程：lnln[1/（1－F（t））]＝1.6841ln（t－1.05）－4.7517（r＝0.9990），T50＝14.57min，Td＝17.85min。

3 討論

3.1 色譜條件的確立

基于USP 28LIS片含量測(cè)定方法，以本文所述色譜系統(tǒng)，色譜柱為Shim-Pack VP-ODS，其他條件按USP 28進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果主峰拖尾嚴(yán)重，無(wú)法達(dá)到其規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。通過(guò)單因素考查，調(diào)整流動(dòng)相pH值、柱溫、流速，可獲得適宜保留時(shí)間，改善LIS的峰形和拖尾，這與Bouabdallah 和Kocijan等[8，9]的報(bào)道一致。最終確立了條件相對(duì)溫和的流動(dòng)相pH 2.5、柱溫55℃、流速0.5mL·min－1的色譜條件，理論塔板數(shù)按LIS計(jì)算為1903，拖尾因子為1.3，符合USP 28對(duì)該片劑的規(guī)定。

3.2 噴霧干燥法制備LIS-PVA-MP

根據(jù)PVA、LIS的性質(zhì)以及料液噴霧干燥的效果，確定進(jìn)風(fēng)溫度為185℃，出風(fēng)溫度為95℃。霧化器轉(zhuǎn)速對(duì)微粒形態(tài)、大小影響很大，其低于36Hz時(shí)，粒徑大、分布寬，微粒易發(fā)生粘連，故選擇在36～40Hz作進(jìn)一步考查。

通過(guò)單因素考查，采用醇解度為87%～89%，Mr為13000～23000、31000～50000、85000～124000的PVA制備LIS-PVA-MP，發(fā)現(xiàn)PVA Mr對(duì)微粒大小、形態(tài)影響較大，Mr為85000～124000的PVA含藥料液由于黏度大不能很好地被霧化，干燥過(guò)程中易形成絲狀、條狀物，故選擇的Mr為13000～23000、31000～50000采用正交試驗(yàn)作進(jìn)一步考查。PVA濃度對(duì)微粒大小、形態(tài)影響也較大，6%PVA料液所得微粒發(fā)生粘連，表面變形嚴(yán)重；此外隨濃度增大，載藥量、包封率略有增加，但趨勢(shì)并不顯著。投藥比對(duì)微粒載藥量、包封率有較大影響，隨投藥比增大，載藥量增大，但包封率降低。

由初步試驗(yàn)的結(jié)果，對(duì)各主要因素的水平作適當(dāng)調(diào)整后進(jìn)一步安排了正交試驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化。按優(yōu)化的參數(shù)制備LIS-PVA-MP，結(jié)果其粒徑和粒徑分布適當(dāng)，有比較滿意的載藥量、包封率及體外溶出速度，且制備工藝簡(jiǎn)單，重復(fù)性好。

[1] Wald NJ，Law MR.A strategy to reduce cardiovascular disease by more than 80%[J].BMJ，2003，326（7404）：1419.

[2] Jin T，Pennefather P，Lee PI.Lipobeads：a hydrogel anchored lipid vesicle system[J].FEBS Letters，1996，397（1）：70.

[3] Kim CJ，Lee PI.Synthesis and characterization of suspension-polymerized poly（vinyl alcohol）beads with coreshell structure[J].Journal of Applied Polymer Science，1992，46（12）：2147.

[4] Kim CJ，Lee PI.Composite polyvinyl alcohol beads for controlled drug delivery[J].PharmaceuticalResearch，1992，9（1）：10.

[5] 趙大慶，譚金權(quán).聚乙烯醇微粒的制備與研究[J].中國(guó)新藥雜志，2005，14（2）：181.

[6] Ozmen L，Langrish TAG，Gipps EM.Spray drying pharmaceutical products for nasal delivery：The effects of feed solution properties and operating conditions on particle size and density——Heat and Mass Transfer Australasia Proceedings of the Sixth Australasian：Heat and Mass Transfer Conference[C].New York：Begell House，1998：427.

[7] The United States Pharmacopeial Convention.The United States Pharmacopeia[S].USA：Rockville，2005：1139.

[8] Bouabdallah S，Trabelsi H，Bouzouita K，et al.Reversed-phase liquid chromatography of lisinopril conformers[J].J Biochem Biophys Methods，2002，54（1～3）：391.

[9] Kocijan A，Grahek R，Kocjan D，et al.Effect of column temperature on the behaviour of some angiotensin converting enzyme inhibitors during high-performance liquid chromatographic analysis[J].J Chromatogr B，2001，755（1～2）：229.

Preparation and Quality Evaluation of Lisinopril Polyvinyl Alcohol Particles

WU Jun-zhu（School of Pharmacy，Dali University，Dali 671000，China）
WU Jun-zhu，JIN Tuo（School of Pharmacy，Shanghai Jiaotong University，Shanghai 200240，China）

OBJECTIVE：To prepare lisinopril-loaded polyvinyl alcohol（PVA）particles（LIS-PVA-P）and establish its quality control method.METHODS：LIS-PVA-P was prepared by spray-drying process with PVA as carrier.The preparation was detected in terms of morphology，particle size，span，drug-loading capacity，encapsulation and in vitro dissolution.RESULTS：The preparation assumed sphere with porous surface.The average particle size was 17.29μm while drug-loading capacity 31.40%，encapsulation 94.20%，Span was 0.88，90%of the drug loads were released within 30min.CONCLUSION：The preparation process is simple，good in repeatability and qualified in quality.

Lisinopril；Polyvinyl alcohol；Particles；Spray-drying process；Preparation；Quality evaluation

R943；R972

A

1001-0408（2010）09-0825-04

2009-04-09

2009-09-25）