鹽酸莫西沙星片的人體藥動學(xué)研究Δ

徐玉紅，李玉珍，李 東，李 杰，鐘 芬，楊蕾萍，陽 宇，鄭學(xué)慶（.廣東醫(yī)學(xué)院附屬福田人民醫(yī)院，深圳市 580；.深圳市人民醫(yī)院/暨南大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，深圳市 5800；.深圳市大鵬人民醫(yī)院，深圳市 580）

莫西沙星（Moxifloxacin）是一種新的第4代8-甲氧基喹諾酮類藥，它既保留了良好的抗革蘭陰性菌活性，又具有較強的抗革蘭陽性菌及厭氧菌、支原體、衣原體等活性。在已完成的20余項臨床試驗中，莫西沙星體現(xiàn)了良好的耐受性和安全性，是一個非常有臨床應(yīng)用前景的抗菌藥物[1～3]。莫西沙星具有良好的藥動學(xué)特性，口服吸收良好，平均絕對生物利用度達90%，血漿蛋白結(jié)合率為50%，具有良好的組織穿透性[1，2]。國外文獻報道了莫西沙星在健康志愿者、患者體內(nèi)的藥動學(xué)，以及食物、抗酸劑、礦物質(zhì)等對其藥動學(xué)的影響[4～9]；但是到目前為止，尚未見有莫西沙星在中國健康人體內(nèi)的藥動學(xué)研究報道。參考有關(guān)文獻[5，8，10]，筆者建立以高效液相色譜-紫外（HPLC-UV）法測定血漿中莫西沙星濃度的方法，并對健康中國人單劑量口服鹽酸莫西沙星片400 mg后在體內(nèi)的藥動學(xué)進行了研究，旨在為臨床給藥提供參考。

1 材料

1.1 儀器

1100高效液相色譜儀，包括G1311A四元泵、G1322A真空脫氣機、G1315B-DAD檢測器，D1316A柱溫箱、rheodyne-7725i手動進樣器、ChemStation工作站（美國Agilent公司）；UV-2201紫外分光光度計（日本島津公司）；AG285電子天平（瑞士梅特勒托利多儀器有限公司）；XW-80A渦旋混合器（原上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠）；KQ5200DB超聲波清洗器（江蘇昆山市超聲儀器有限公司）；高速離心機（美國雅培公司）；pHS-3C數(shù)字pH計（上海精科雷磁儀器廠）。

1.2 試藥

鹽酸莫西沙星片（德國拜耳醫(yī)藥保健股份公司，規(guī)格：400 mg，批號：1108020）；鹽酸莫西沙星對照品（德國拜耳醫(yī)藥保健股份公司，批號：BXR2C4N，標示含量：94.8%）；內(nèi)標：加替沙星對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：30518-200402，標示含量：97.2%）；甲醇、乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純，水為注射用水（本院制劑室自制）。所有試液使用前均經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.02 mol·L－1KH2PO4緩沖液（調(diào)節(jié)pH值至3.0）-甲醇-乙腈（65∶20∶15）；流速：1.0 mL·min－1；檢測波長：296 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μL。

2.2 試驗溶液的制備

2.2.1 鹽酸莫西沙星對照品溶液：準確稱取干燥至恒重的鹽酸莫西沙星對照品10.91 mg（相當(dāng)于莫西沙星10.0 mg），置于10 mL容量瓶中，加注射用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度為1000 mg·L－1的對照品貯備溶液，置于4℃冰箱中備用。臨用時分別精密量取適量莫西沙星對照品貯備液于10 mL容量瓶中，以流動相稀釋至刻度，得系列濃度（2.5、5、10、20、40、80、160、250 mg·L－1）的莫西沙星對照品溶液。

2.2.2 內(nèi)標溶液：準確稱取干燥至恒重的加替沙星對照品適量，加注射用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對照品貯備液。取適量用流動相稀釋，制備成質(zhì)量濃度為20 mg·L－1的內(nèi)標溶液。

2.3 受試者選擇

12名健康志愿者，男性8人，女性4人，年齡22～43歲，平均年齡（29.8±5.5）歲，平均身高（163.5±5.6）cm，平均體質(zhì)量（60.9±9.1）kg。經(jīng)體檢，心電圖、血尿常規(guī)、肝腎功能等均正常。無胃腸道疾病史，試驗前2周內(nèi)未使用任何藥物，無藥物過敏史（特別是對于喹諾酮類藥），空腹血糖正常，2個月內(nèi)無捐血史。所有受試者均簽署知情同意書，試驗方案經(jīng)廣東醫(yī)學(xué)院附屬福田人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批同意后實施。

2.4 試驗方案

試驗為開放式、單周期、單劑量設(shè)計。受試者禁食至少10 h后，于第2天早晨8∶00時以200 mL水送服單劑量鹽酸莫西沙星片400 mg，服藥2 h后可自由飲水，用藥4 h及12 h后進食統(tǒng)一低脂餐。試驗期間忌酒、茶及含咖啡因的飲料，避免劇烈運動。整個試驗期間，進行藥物安全性及耐受性監(jiān)測。于給藥前0 h及給藥后0.25、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10、12、24 h時取肘中靜脈血4 mL，置肝素抗凝管中，3000 r·min－1離心10 min分離血漿（30 min內(nèi)完成）。密封標記后，－20℃中保存直到分析。

2.5 血漿樣品處理

血漿樣品室溫自然解凍，渦旋混合30 s。取10 mL具塞錐形玻璃管，依次精密加入血漿0.5 mL、濃度為20 mg·L－1的加替沙星內(nèi)標溶液15 μL，渦旋30 s混合均勻；加入二氯甲烷5 mL，渦旋混合提取5 min，10000 r·min－1離心10 min，取二氯甲烷層，于50℃水浴氮氣流吹干，殘渣以100 μL流動相渦旋30 s溶解，10000 r·min－1離心3 min后取20 μL進樣。所有樣品在貯藏及處理過程中注意避光。

2.6 方法學(xué)驗證

2.6.1 專屬性考察：分別取6名健康受試者的空白血漿0.5 mL，按“2.5”項下方法操作，獲得空白血漿樣品的色譜圖1A；將一定濃度莫西沙星對照品溶液10 μL加入到空白血漿0.5 mL中得0.2 mg·L－1莫西沙星對照品血樣，同法操作，獲得色譜圖1B；取健康受試者單劑量口服鹽酸莫西沙星片400 mg后12 h的血漿樣品，同法操作，得色譜圖1C。結(jié)果表明，血漿中內(nèi)源性物質(zhì)及代謝物均不干擾樣品測定，色譜圖峰形對稱性好，基線噪音小。在該色譜條件下，加替沙星與莫西沙星保留時間分別約為5.8、7.6 min，理論塔板數(shù)按莫西沙星計算不低于8000。

圖1 高效液相色譜圖A.空白血漿；B.空白血漿+0.2 mg·L－1莫西沙星對照品溶液；C.健康受試者服藥12 h后血漿樣品；1.加替沙星；2.莫西沙星Fig 1 HPLC Chromatograms of moxifloxacinA.blank plasma；B.blank plasma spiked with 0.2 mg·L－1moxifloxacin control；C.plasma sample in 12 h after oral administration of moxifloxacin；1.gatifloxacin；2.moxifloxacin

2.6.2 線性關(guān)系考察：取10 mL具塞錐形離心管9支，分別精確加入健康受試者空白血漿0.5 mL，除空白管外，每支管精確加入不同濃度的莫西沙星對照品溶液10 μL，渦旋混合30 s，使?jié)舛确謩e為0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、5.0 mg·L－1，按“2.5”項自“加入濃度為20 mg·L－1加替沙星內(nèi)標液15 μL”起步驟操作并測定，分別記錄莫西沙星峰面積及內(nèi)標峰面積，以莫西沙星與內(nèi)標峰面積比值（Y）對莫西沙星質(zhì)量濃度（X）進行線性回歸，得回歸方程Y＝2.1194X－0.0779（r＝0.9998）。結(jié)果表明，莫西沙星血藥濃度在0.05～5.0 mg·L－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。莫西沙星的最低定量限為0.05 mg·L－1，最低檢測限為0.015 mg·L－1（S/N＝3）。

2.6.3 精密度試驗：用空白血漿及莫西沙星對照品溶液配制濃度為0.1、1.6、5.0 mg·L－1的3 種莫西沙星質(zhì)量控制樣品，各6份，按“2.5”項下方法操作，當(dāng)日內(nèi)各濃度重復(fù)測定6次，并連續(xù)6 d每天制備上述3種濃度的莫西沙星樣品進行測定，將測定結(jié)果比值代入回歸方程，計算日內(nèi)、日間精密度，結(jié)果見表1。

表1 精密度及回收率試驗結(jié)果（，n＝6）Tab 1 Results of precision and recovery tes（t ，n＝6）

表1 精密度及回收率試驗結(jié)果（，n＝6）Tab 1 Results of precision and recovery tes（t ，n＝6）

2.6.4 方法回收率及提取回收率：取空白血漿0.5 mL，加入莫西沙星對照品溶液適量，分別配制成0.1、1.6、5.0 mg·L－1的系列濃度溶液，各6份，按“2.5”項下方法操作并測定。將莫西沙星與加替沙星峰面積比代入線性方程，計算濃度，測定濃度與加入濃度的比值即為方法回收率。另取空白血漿0.5 mL，不加入莫西沙星對照品溶液及內(nèi)標溶液，按“2.5”項下方法處理，取二氯甲烷層，向含二氯甲烷的錐形管中依次加入對應(yīng)量的莫西沙星對照品溶液及內(nèi)標溶液，渦旋30 s，同法吹干、溶解、測定，將提取后測得的峰面積與未提取測得的峰面積進行比較，計算提取回收率。結(jié)果見表1。

2.6.5 血漿樣品穩(wěn)定性：（1）凍融穩(wěn)定性：用空白血漿制備足量的濃度為0.1、1.6、5.0 mg·L－1的莫西沙星血漿樣品，即刻按“2.5”項方法操作并測定。然后在－20℃冰箱中冷凍24 h后取出，室溫解凍后，各取樣0.5 mL操作并測定。剩余血漿樣品再次放入－20℃冰箱中冷凍，24 h后解凍、處理、測定，重復(fù)凍融循環(huán)3次，考察血漿樣品凍融穩(wěn)定性。結(jié)果低、中、高濃度RSD分別為6.72%、3.47%、4.89%，顯示凍融條件對血漿樣品的檢測結(jié)果無明顯的影響。（2）室溫及凍存穩(wěn)定性：用空白血漿制備足量的濃度為0.10、1.60、5.00 mg·L－1的莫西沙星血漿樣品，吸取各濃度樣品1 mL于1.5 mL離心管中，每個濃度9份，其中5份在室溫下放置0、2、4、8、12 h后按“2.5”項方法操作并測定。另外4份分別在－20℃冰箱中保存1、2、4、12周后，再按“2.5”項方法操作并測定，考察血漿樣品室溫及冷凍放置穩(wěn)定性。室溫下3種濃度測定結(jié)果RSD為4.18%～5.77%，冷凍條件下測定結(jié)果RSD為4.58%～8.15%。表明莫西沙星血漿樣品在室溫放置12 h以及－20℃冷凍條件下放置12周均有良好穩(wěn)定性。

2.7 安全性評價

受試者服藥后，由專職醫(yī)務(wù)人員觀察、記錄藥品不良反應(yīng)，服藥24 h后進行心電圖、空腹血糖檢查。除2例受試者有輕度胃腸道不適外，其余受試者無明顯不良反應(yīng)，所有受試者服藥前、后心電圖均正常，空腹血糖在正常范圍內(nèi)。結(jié)果顯示單劑量口服莫西沙星片400 mg后受試者耐受性良好。

2.8 藥動學(xué)研究

12例健康志愿者，按試驗設(shè)計方案服藥、取血、測定分析，用DAS軟件對獲得的數(shù)據(jù)進行處理，采用非房室模型法計算藥動學(xué)參數(shù)。12名受試者單劑量口服鹽酸莫西沙星片400 mg后的平均藥-時曲線見圖2，主要藥動學(xué)參數(shù)見表2。

圖2 12名受試者單劑量口服鹽酸莫西沙星片后400 mg的平均藥-時曲線Fig 2 Mean plasma concentration-time curve of moxifloxacin after a single oral dose of 400 mg moxifloxacin hydrochloride tablet in 12 healthy volunteers

3 討論

國外報道莫西沙星測定方法的文獻較多，但多采用熒光檢測器、液-質(zhì)聯(lián)用或特殊柱分離術(shù)[4，5，8，10]，本文建立了適用范圍更廣的測定血樣中莫西沙星的HPLC-UV法。莫西沙星屬兩性化合物，堿性較強，保留時間長，峰形易拖尾。筆者對色譜柱、流動相（包括組成、比例、pH值）等進行了全面篩選，最終優(yōu)化出的色譜條件專屬性強，靈敏度高，且保留時間適中。試驗表明，采用常用的幾種蛋白沉淀試劑直接沉淀蛋白，干擾物相對較多，且靈敏度差，而在一定pH值條件下以二氯甲烷提取后可消除大部分內(nèi)源性干擾物質(zhì)。方法學(xué)驗證結(jié)果及實際應(yīng)用表明，本文建立的HPLC-UV法可用于藥動學(xué)研究。

表2 12名受試者單劑量口服鹽酸莫西沙星片400 mg后的主要藥動學(xué)參數(shù)Tab 2 Pharmacokinetic parameters of moxifloxacin after a single oral dose of 400 mg moxifloxacin tablet in 12 healthy volunteers

藥動學(xué)研究結(jié)果表明，中國人單劑量口服鹽酸莫西沙星片400 mg后所獲得的藥動學(xué)參數(shù)與國外文獻報道的白種人、黑人及亞裔志愿者研究結(jié)果基本一致[4，7，8]，表明其藥動學(xué)無明顯種族差異。試驗數(shù)據(jù)表明，1日1次單劑量口服鹽酸莫西沙星片400 mg，其谷濃度約為0.5 mg·L－1，遠高于其對大多數(shù)常見致病菌的最小抑菌濃度（MIC）（0.25 mg·L－1）[3]，AUC24/MIC和Cmax/MIC的比值分別超過125、10（對于喹諾酮類藥，兩者比值與臨床治療效果密切相關(guān)）。本文t1/2約為10.3 h，與文獻報道[4，8，9]一致，略低于文獻[5]，故支持1日1次給藥方案。

安全性監(jiān)測結(jié)果表明，莫西沙星耐受性良好。和其它喹諾酮類藥一樣，胃腸道反應(yīng)是最為常見的不良反應(yīng)，但可以通過與食物同服避免，且Cmax與AUC0～∞無明顯減少[8]。

中國健康志愿者口服莫西沙星片具血藥峰濃度高、半衰期長、耐受性好的特點，1日1次給予400 mg單劑量莫西沙星可達到并維持有效血藥濃度。

[1]Keating GM，Scott LJ.Moxifloxacin：a review of its use in the management of bacterial infections[J].Drugs，2004，64（20）：2347.

[2]Julia A，Balfour B，Wiseman LR.Moxifloxacin[J].Drugs，1999，57（3）：363.

[3]Krasemann C，Meyer J，Tillotson G.Evaluation of the clinical microbiology profile of moxifloxacin[J].Clin Infect Dis，2001，32（Suppl 1）：51.

[4]Sullivan JT，Woodruff M，Lettieri J，et al.Pharmacokinetics of a once-daily oral dose of moxifloxacin（Bay 12-8039），a new enantiomerically pure 8-methoxy quinolone[J].Antimicrob Agents Chemother，1999，43（11）：2793.

[5]Stass H，Kubitza D.Pharmacokinetics and elimination of moxifloxacin after oral and intravenous administration in man[J].J Antimicrob Chemother，1999，43（Suppl）：83.

[6]Stass H，Kubitza D，Halabi A，et al.Pharmacokinetics of moxifloxacin，a novel 8-methoxy-quinolone，in patients with renal dysfunction[J].Br J Clin Pharmacol，2002，53（3）：232.

[7]Sullivan JT，Lettieri JT，Liu P，et al.The influence of age and gender on the pharmacokinetics of moxifloxacin[J].Clinical Pharmacokinetics，2001，40（Suppl 1）：11.

[8]Lettieri J，Vargas R，Agarwal V，et al.Effect of food on the pharmacokinetics of a single oral dose of moxifloxacin 400 mg in healthy male volunteers[J].Clin Pharmacokinet，2001，40（Suppl 1）：19.

[9]Stass H，Kubitza D.Effects of dairy products on the oral bioavailability of moxifloxacin，a novel 8-methoxyfluoroquinolone，in healthy volunteers[J].Clin Pharmacokinet，2001，40（Suppl 1）：33.

[10]Laban-Djurdjevi? A，Jeliki?-Stankov M，Djurdjevi? P.Optimization and validation of the direct HPLC method for the determination of moxifloxacin in plasma[J].J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2006，844（1）：104.