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    紫外分光光度法測定川射干總黃酮的含量

    2010-05-07 02:27:22張瀟李蓉唐斌
    四川生理科學雜志 2010年2期
    關鍵詞:射干鳶尾分光

    張瀟 李蓉 唐斌

    (1.瀘州醫(yī)學院化學教研室,2.瀘州醫(yī)學院藥理毒理學研究室,四川 瀘州 646000)

    本品為鳶尾科植物鳶尾(Iris tectorum Maxim)的干燥根莖,苦,寒,入肺、肝經(jīng)。主產(chǎn)廣東、廣西和四川,具有消熱解毒,消痰利咽的功效,用于咽喉腫痛,痰咳氣喘[1]。現(xiàn)代藥學研究表明,川射干含有射干苷、鳶尾苷、野鳶尾苷、鳶尾甲苷A、點地梅雙糖苷、鳶尾苷元、鳶尾甲黃素A、染料木素等多種物質[2]。本文以射干苷為對照品,采用紫外分光光度法,建立了川射干總黃酮的含量測定方法。本試驗所用的儀器設備操作簡單,適于普及,可用于川射干藥材的質量控制,為其開發(fā)利用奠定基礎。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 儀器

    UV-2100雙光束紫外/可見光分光光度計(北京瑞利分析儀器公司);XR205SM-DR型電子天平(瑞士Precisa);CQX25-06型超聲波清洗器(上海必能信超聲有限公司,功率250W,頻率25kHz)。

    1.1.2 藥品

    射干苷標準品:購自中國藥品生物制品檢定所,在選定色譜條件分離后按面積歸一化法計算含量為98.88%,符合含量限度要求,故以含量為100%計算;川射干飲片:購自瀘州市圣杰藥房,經(jīng)瀘州醫(yī)學院藥學院張春博士鑒定為鳶尾科植物鳶尾的干燥根莖,即川射干;乙醇為分析純。

    1.2 方法

    1.2.1 供試品溶液的配制

    精確稱取川射干粉末約1g(過三號篩),置于100ml的具塞錐形瓶中,加入70%乙醇約50mL,超聲處理(功率250W,頻率50kHz)1h,放冷,搖勻,減壓過濾,用少量 70%乙醇分多次洗滌濾渣,將濾液轉入100ml容量瓶中,用70%乙醇定容,精確量取濾液0.2mL,置于l0mL容量瓶中,用70%乙醇定容,搖勻,即得。

    1.2.2 射干苷對照品溶液的制備

    精確稱取射干苷標準品適量,用70%乙醇制成濃度為0.1 mg?mL-1的溶液,即得。

    1.2.3 測定波長的確定[3]

    取射干苷對照品及供試品溶液各適量,以70%乙醇為空白試劑,分別于紫外可見光分光光度計200~600nm波長范圍內進行波長掃描。

    1.2.4 線性關系考察

    精確量取射干苷對照品溶液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL,分別置于l0mL容量瓶中,用70%乙醇稀釋溶解至刻度,搖勻,以70%乙醇為空白試劑,于266nm波長處測定吸光度。

    1.2.5 精密度試驗

    取上述供試品溶液,連續(xù)測定5次。

    1.2.6 穩(wěn)定性試驗

    取對照品及供試品溶液于室溫分別放置 0、2、4、6、8、10、12h后,測定吸光度。

    1.2.7 重現(xiàn)性考察

    取上述藥材樣品,按1.2.1方法制備供試品溶液,平行制備5份,分別測定吸光度。

    1.2.8 回收率試驗

    取已知射干苷含量(4.12%)的川射干藥材粉末 6份 ,每份約0.5g,分成 3組,每組 2份,分別精密添加對照品溶液(0.1 mg?mL-1)2、3、4ml,按1.2.1方法制備溶液并按1.2.9方法測定,計算回收率。

    1.2.9 樣品的含量測定

    取3個批次的川射干藥材粉末各約1g(過三號篩),按1.2.1方法制備供試品溶液,以70%乙醇為空白試劑,于紫外分光光度計266nm波長處測定吸光度,分別計算其含量。

    2 結果

    2.1 檢測波長

    川射干提取液與射干苷對照品溶液均在266nm處有最大吸收,故確定266nm為檢測波長。

    2.2 線性關系

    以吸光度(A)為縱坐標,濃度(C)為橫坐標繪制標準曲線,得到回歸方程為Y=0.692X-0.0085,r=0.9991。射干苷濃度在0.002~0.010 mg?mL-1范圍內線性關系良好。

    2.3 精密度

    計算得5次吸光度的RSD為0.53%,表明本方法精密度良好。

    2.4 穩(wěn)定性

    計算得7個時間點吸光度的RSD為0.25%,表明對照品及供試溶液在12h內穩(wěn)定。

    2.5 重現(xiàn)性

    試驗測得5份川射干藥材中總黃酮的平均值為4.12%,RSD值為0.76%(n=5),表明方法重現(xiàn)性良好。

    2.6 回收率

    結果表明加樣回收率的平均值為97.45%;RSD=0.65%(n=6),符合規(guī)定(見表1)。

    2.7 樣品的含量測定

    測得3份樣品中,川射干總黃酮的平均含量為4.17%(以射干苷計)(見表2)。

    3 討論

    在供試品溶液制備時曾研究了川射干中總黃酮的提取溶劑,分別以水,50%甲醇、50%乙醇、70%乙醇作提取溶劑。結果顯示,以70%乙醇為提取溶劑時,樣品中總黃酮含量最高,因此,選用70%乙醇為樣品提取溶劑。曾考察了超聲處理時間(30、45、60、90min),結果提取60min和90min時提出液的濃度相差不大,但比45min時明顯增高,考慮到超聲90min時間太長,提取過程中產(chǎn)熱嚴重可能會破壞某些成分,故選擇超聲處理60min。

    表1 加樣回收率試驗結果(n=6)

    表2 樣品中射干苷的含量測定結果

    采用紫外分光光度法測定川射干中總黃酮的含量,儀器設備操作簡單,適于普及,靈敏度高,檢測結果準確可靠,具有良好的重現(xiàn)性和回收率,故該方法可用于川射干藥材的質量控制。

    1 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2005版一部[S].北京:化學工業(yè)出版社,2005:28.

    2 袁崇均.川射干化學成分的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2008,20(3):444-446.

    3 李國信.紫外分光光度法測定射干中總異黃酮的含量[J].遼寧中醫(yī)雜志,2008,35(3):428-429.

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