黃鶴通絡(luò)膠囊對(duì)大鼠 Pulsinelli法腦缺血再灌注模型的影響

劉福昌 張曉雙 程 陜西省寶雞職業(yè)技術(shù)學(xué)院中醫(yī)藥學(xué)系 (寶雞 721013)

黃鶴通絡(luò)膠囊由姜黃、仙鶴草、丹參、葛根等組成,具有活血化瘀、醒腦通絡(luò)等功能,臨床主要用于腦卒中的治療。為了闡明其藥理作用及其機(jī)制,我們觀察了黃鶴通絡(luò)膠囊對(duì)大鼠Pulsinelli法腦缺血再灌注模型的影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD品系大鼠,雄性,250～ 300g,由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,合格證號(hào) scxk(軍 )2007-007。

1.2 藥品及試劑 黃鶴通絡(luò)膠囊,0.45g/粒,內(nèi)容物呈棕色粉末狀 ,1g內(nèi)容物約相當(dāng)于生藥 5.1g,批號(hào):20060823,用蒸餾水將其配成所需濃度的混懸液備用;曲克蘆丁片,由山西津華暉星制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào):060901;超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)試劑盒,由南京建成生物工程研究所出品 ,批號(hào)分別為 20061027、20061101;紅四氮唑,上?？曝S化學(xué)試劑有限公司出品,批號(hào):050812。

1.3 主要儀器 SW-CJ-2FD型雙人單面凈化工作臺(tái),蘇州凈化設(shè)備有限公司出品;UV1102紫外分光光度計(jì),上海天美科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn);702型超低溫冰箱,美國(guó)熱電公司生產(chǎn);HDW-600型高頻電灼治療儀,成都航天產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)有限責(zé)任公司生產(chǎn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法 取 SD品系大鼠,雄性,體重 280～ 320g。除假手術(shù)組外,其余大鼠采用 Pulsinelli法 (四血管阻塞法)建立大鼠全腦缺血再灌注損傷模型[1～3]。以 10%水合氯醛 0.35mL/100g腹腔注射麻醉,背位固定。在超凈工作臺(tái)下,按無(wú)菌操作于大鼠背部正中枕骨后第 1、2頸椎位置切口,鈍性分離,暴露第 1頸椎的橫突翼,并找到左、右橫突孔,用電凝器灼斷雙側(cè)椎動(dòng)脈,縫合傷口。然后,再仰位固定大鼠,鈍性分離左右兩側(cè)頸總動(dòng)脈,用動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈阻斷血流,10min后同時(shí)開(kāi)啟兩動(dòng)脈夾進(jìn)行腦再灌流。術(shù)中及術(shù)后麻醉清醒前用烤燈維持動(dòng)物體溫(37.0±0.5)℃ ,實(shí)驗(yàn)室溫度保持在(24～ 25)℃。第2d,按動(dòng)物體征狀況[4]均衡后隨機(jī)分為 5組,即模型組,曲克蘆丁組(150mg/kg)、黃鶴通絡(luò)膠囊大、中、小劑量組(8g生藥 /kg、4g生藥 /kg和 2g生藥 /kg)。假手術(shù)組除不阻塞四血管和腦再灌流外,其他操作與模型組相同。各組動(dòng)物灌胃給藥,模型組和假手術(shù)組給予等容積的蒸餾水。各組動(dòng)物每天給藥 1次,連續(xù) 7天,給藥容積 20mL/kg。對(duì)于有進(jìn)食困難的動(dòng)物,每天早晚灌胃濃牛奶各 1次。末次給藥后 1h,斷頭處死大鼠,迅速取出全腦,稱重,計(jì)算腦指數(shù)(g/100g體重 )。除嗅球、小腦和低位腦干外,將腦置于-80℃,冠狀切成 6片 1～ 1.5mm厚腦片。取同一位置的 1個(gè)腦片,先取適量照 SOD和 M DA試劑盒說(shuō)明測(cè)定腦組織 SOD和 M DA,剩余部分用 10%福爾馬林固定,常規(guī)取材、脫水、浸蠟、包埋、切片、HE染色,光鏡下進(jìn)行病理學(xué)檢查。其他 5片腦組織迅速置于 2%紅四氮唑(TTC染色)磷酸緩沖溶液中,37℃避光溫孵染色 30min,其間每隔 7～ 8min翻動(dòng) 1次,染色后正常腦組織呈紅色,梗塞組織呈白色。溫孵完畢后用 SONY800萬(wàn)相素?cái)?shù)碼相機(jī)拍照腦片 ,輸入計(jì)算機(jī),采用 image-pro plus圖像處理軟件計(jì)算梗塞面積,求出每鼠 5片腦片總梗塞面積與腦片總面積之比。為了消除誤差,將圖像中的所有白色區(qū)域均記入梗塞面積。

3 結(jié) 果 3.1 對(duì)腦組織 SOD和 M DA的影響 測(cè)定腦組織 SOD和 M DA,用t值法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,比較組間差異。結(jié)果見(jiàn)表 1。

表1 對(duì)腦組織 SOD和 MDA的影響

結(jié)果表明,黃鶴通絡(luò)膠囊 4g生藥 /kg和 8g生藥 /kg能明顯升高腦缺血再灌注大鼠腦組織 SOD活性;黃鶴通絡(luò)膠囊 8g生藥 /kg能降低腦缺血再灌注大鼠腦組織 MDA含量,與模型組比較,差異有顯著性意義 (P＜0.05或 P＜0.01),提示黃鶴通絡(luò)膠囊具有提高腦缺血再灌注大鼠腦組織的抗氧化作用。

3.2 對(duì)腦指數(shù)和腦梗塞的影響 稱量腦重,計(jì)算腦指數(shù)(g/100g體重)結(jié)果見(jiàn)表 2。TTC染色后拍照腦片,輸入計(jì)算機(jī),用 image-pro plus圖像處理軟件計(jì)算梗塞面積 ,求出每鼠 5片腦片總梗塞面積與腦片總面積之比。用 t值法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,比較組間差異,結(jié)果見(jiàn)表 2。

表2 對(duì)腦指數(shù)和腦梗塞的影響

黃鶴通絡(luò)膠囊 2g生藥 /kg、4g生藥 /kg和 8g生藥 /kg對(duì)腦缺血再灌注大鼠腦指數(shù)影響較小,但均能減小腦梗塞面積,降低腦梗塞面積與腦總面積比值與模型組比較差異有顯著性意義(P ＜0.01)。

3.3 對(duì)腦組織病理學(xué)檢查的影響 腦組織病理學(xué)檢查顯示,假手術(shù)組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)正常,模型組血管明顯擴(kuò)張,水腫現(xiàn)象明顯,神經(jīng)元結(jié)構(gòu)紊亂,尼氏體減少,其中 1例腦膜血管擴(kuò)張,有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。黃鶴通絡(luò)膠囊 2g生藥 /kg、4g生藥 /kg和8g生藥 /kg血管擴(kuò)張較輕,水腫明顯改善,神經(jīng)元損傷減輕,其中 4g生藥 /kg和 8g生藥 /kg作用較顯著。

4 討 論 腦卒中是以腦循環(huán)血流量下降為特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病,是現(xiàn)今世界范圍主要的致死、致殘疾病之一。腦卒中屬祖國(guó)醫(yī)學(xué)“中風(fēng)病”范疇。可分為多種不同證型,如肝陽(yáng)暴亢,風(fēng)火上擾;風(fēng)痰瘀血,痹阻脈絡(luò);氣虛血瘀,脈絡(luò)瘀阻;痰濁上擾 ,蒙蔽清竅;瘀血內(nèi)阻,神明失用等。在傳統(tǒng)認(rèn)識(shí)的基礎(chǔ)之上,結(jié)合臨床實(shí)踐,有學(xué)者認(rèn)為:不少正經(jīng)、奇經(jīng)皆上注于頭,因而腦內(nèi)氣血豐盈、絡(luò)脈宏富,而中風(fēng)病位在腦,故中風(fēng)病自始至終都存在著“病絡(luò)”的狀況[5]。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn),腦血流中斷和再灌注使腦細(xì)胞產(chǎn)生損傷是一個(gè)快速的級(jí)聯(lián)反應(yīng),包括許多環(huán)節(jié),如能量障礙、細(xì)胞酸中毒、興奮性氨基酸釋放增加、細(xì)胞內(nèi)鈣失穩(wěn)態(tài)、自由基生成、凋亡基因激活等。這些環(huán)節(jié)互為因果,彼此重疊,并相互聯(lián)系,形成惡性循環(huán),最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或壞死。更提出了“毒損腦絡(luò)”的中風(fēng)病機(jī)理論[6]。

黃鶴通絡(luò)膠囊由姜黃、仙鶴草、丹參、葛根等組成,具有活血化瘀、醒腦通絡(luò)等功能,臨床主要用于腦卒中的治療。本實(shí)驗(yàn)表明,黃鶴通絡(luò)膠囊 4g生藥 /kg和 8g生藥 /kg能明顯升高SOD活性,8g生藥 /kg能降低 M DA含量 0.05或 0.01)。黃鶴通絡(luò)膠囊 2g生藥 /kg、4g生藥 /kg和 8g生藥 /kg對(duì)腦缺血再灌注大鼠腦指數(shù)影響較小,但均能減小腦梗塞面積,降低腦梗塞面積與腦總面積比值(P＜0.01)。腦組織病理學(xué)檢查顯示,假手術(shù)組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)正常,模型組血管明顯擴(kuò)張,水腫現(xiàn)象明顯,神經(jīng)元結(jié)構(gòu)紊亂,尼氏體減少,其中 1例腦膜血管擴(kuò)張,有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。黃鶴通絡(luò)膠囊大、中劑量組動(dòng)物腦血管擴(kuò)張較輕,水腫改善,神經(jīng)元損傷減輕。,提示黃鶴通絡(luò)膠囊具有提高腦缺血再灌注大鼠腦組織的抗氧化作用,抑制四血管阻塞引起的大鼠全腦缺血再灌注損傷,減小腦梗塞面積和腦組織病理?yè)p害,對(duì)腦卒中產(chǎn)生治療作用。

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