CD41標(biāo)記的微小巨核細(xì)胞染色在老年貧血診斷中的應(yīng)用

(齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院檢驗(yàn)科，黑龍江齊齊哈爾 161000)

微小巨核細(xì)胞是一類形態(tài)異常的小型巨核細(xì)胞，見于多種血液病，是骨髓病態(tài)造血的特征之一［1］，由于其體積較小，形態(tài)多樣，常規(guī)瑞特-姬姆薩(瑞-姬氏)染色易與淋巴細(xì)胞、幼紅細(xì)胞等相混淆，漏檢率高，從而導(dǎo)致檢出率低而限制了在診斷中的價(jià)值。我們采用CD41標(biāo)記的微小巨核細(xì)胞染色法(SAP染色法)檢測了107例老年貧血患者骨髓涂片，以探討微小巨核細(xì)胞的數(shù)量和類型在老年貧血診斷中的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1．1 資料

選擇2004年1月至2008年12月在我院門診和住院患者，年齡60歲以上，Hb＜100 g·L－1的患者107例，其中男61例，女46例;骨髓增生異常綜合征(MDS)19例，巨幼紅細(xì)胞貧血(MA)27例，缺鐵性貧血(IDA)11例，多發(fā)性骨髓瘤(MM)10例，慢性病性貧血(ACD)17例，原發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)8例，溶血性貧血(HA)3例，腎性貧血(RA)2例，再生障礙性貧血(AA)5例，純紅再障(PRCA)3例，慢性再生障礙性貧血(CAA)2例。以上病例均已確診，診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)文獻(xiàn)［2］。

CD41標(biāo)記的微小巨核細(xì)胞染色試劑盒購自協(xié)和干細(xì)胞工程有限公司，瑞-姬氏染色液購自珠海貝索(BASO)生物技術(shù)有限公司。

1．2 方法

常規(guī)進(jìn)行骨髓涂片(約2．5 cm×3 cm大小)，然后進(jìn)行普通的瑞-姬氏染色和SAP染色。SAP染色法步驟如下:(1)將骨髓涂片放入固定液中(甲醇∶丙酮=1∶1)固定90 s，取出晾干。(2)在骨髓片上滴加生物素-鼠抗人CD41抗體，室溫放置40 min，然后用PBS洗滌2次，每次5 min。(3)滴加堿性磷酸酶-鏈霉卵白素二抗，室溫放置30 min，然后用PBS洗滌2次，每次5 min。(4)顯色:取1 mg堅(jiān)固紅加1 ml底物溶液溶解(新鮮現(xiàn)配)，混勻后滴加于骨髓片上，室溫放置15 min。鏡下觀察，待胞膜或胞漿出現(xiàn)明顯的紅色后用自來水輕輕沖洗，晾干。然后用蘇木素復(fù)染60 min，自來水沖洗，用0．5%氨水返藍(lán)5 s，自來水沖洗后晾干，鏡檢。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 11．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2．1 SAP染色法陽性細(xì)胞形態(tài)

顯微鏡下觀察細(xì)胞核呈藍(lán)色，胞膜或胞漿呈紅色標(biāo)記的為陽性細(xì)胞;無紅色標(biāo)記的為陰性細(xì)胞(圖1、2)。

圖1 SAP染色淋巴樣小巨核細(xì)胞 ×1 000

2．2 微小巨核細(xì)胞形態(tài)

分為4型:Ⅰ型為淋巴樣小巨核細(xì)胞，直徑＜12 μm，核圓形且多凹陷，胞漿較少，常有毛狀或泡狀突起似撕紙狀，強(qiáng)嗜堿性呈云霧狀，少有顆粒;核多偏一側(cè)，染色質(zhì)濃集，結(jié)構(gòu)不清，通常無核仁(圖1、2)。Ⅱ型為單元核小巨核細(xì)胞，直徑12～25 μm，胞漿量比淋巴樣小巨核細(xì)胞多，有突起及偽足，漿內(nèi)有紫紅色粉塵樣顆粒，周邊常有血小板附著。Ⅲ型為大單元核巨核細(xì)胞，直徑25～40 μm，胞漿內(nèi)充滿粉塵樣顆粒;核圓形或橢圓形，常偏位。Ⅳ型為多元核小巨核細(xì)胞，直徑12～40 μm，胞漿與單圓核小巨核細(xì)胞類似;細(xì)胞核多至10余個(gè)。

圖2 瑞-姬氏染色淋巴樣小巨核細(xì)胞 ×1 000

2．3 老年貧血各疾病組瑞-姬氏染色和SAP染色巨核細(xì)胞數(shù)量

見表1。SAP染色的骨髓片中巨核細(xì)胞數(shù)明顯高于瑞-姬氏染色，兩者巨核細(xì)胞的檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0．01)。

2．4 107例老年貧血骨髓巨核細(xì)胞瑞-姬氏染色和SAP染色小巨核細(xì)胞陽性率和類型

見表2。

表1 瑞-姬氏和SAP染色法骨髓片中巨核細(xì)胞中位數(shù)比較 個(gè)·片－1

表2 老年貧血各疾病組骨髓巨核細(xì)胞瑞-姬氏和SAP染色小巨核細(xì)胞陽性率和類型

通過表2可以看出，不同疾病組比較，MDS組小巨核細(xì)胞陽性率最高，4種類型小巨核細(xì)胞均可見到;RA、AA、PRCA、CAA組均未見到小巨核細(xì)胞。小巨核細(xì)胞陽性率由高到低依次為MDS＞ITP＞MA＞ACD＞MM＞IDA。HA組病例少且有1例陽性，未作比較。除MDS組外，ITP、MA組等均未檢出淋巴樣小巨核細(xì)胞。AA、CAA組等疾病骨髓受抑，未檢出小巨核細(xì)胞，可以認(rèn)為是與MDS的重要區(qū)別。ITP、MA等疾病組雖然可見小巨核細(xì)胞，但均未檢出淋巴樣小巨核細(xì)胞?？梢姠裥托【藓思?xì)胞是MDS的一個(gè)重要特征之一。

3 討 論

隨著我國進(jìn)入老齡化社會(huì)，老年性疾病發(fā)病率逐年提高。國內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道，老年貧血發(fā)生率為7% ～28%，占同期住院老年患者的57．3%［3］。本組資料顯示，60歲以上老年人MA和MDS發(fā)病率分別排在第1和第2位;MA是由于葉酸、VB12缺乏引起細(xì)胞內(nèi)DNA合成障礙，導(dǎo)致細(xì)胞核發(fā)育障礙所致的骨髓三系細(xì)胞核漿發(fā)育不平衡及無效造血性貧血，以骨髓中粒系、紅系、巨核系三系細(xì)胞出現(xiàn)巨幼變?yōu)槠涮卣?而MDS是一組獲得性造血功能嚴(yán)重紊亂的造血干細(xì)胞克隆性疾病，其特點(diǎn)為骨髓中一系或多系血細(xì)胞發(fā)育異常，伴有不同程度的病態(tài)造血［4－5］。因此 MDS、尤其在早期的難治性貧血階段(MDS-RA)，其實(shí)驗(yàn)室檢查、特別是骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)方面與MA有極多相似之處，給臨床診斷及鑒別診斷帶來困難。

CD41a抗體是血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa的特異性抗體，是巨核細(xì)胞-血小板系統(tǒng)的獨(dú)特標(biāo)記［6］。對(duì)于常規(guī)瑞-姬氏染色形態(tài)學(xué)難以識(shí)別的小巨核細(xì)胞(特別是淋巴樣小巨核細(xì)胞)，通過SAP染色法，小巨核細(xì)胞核呈藍(lán)色，胞膜或胞漿呈紅色，低倍鏡下易于辨認(rèn)［1，7－8］，因此具有重要的鑒別意義。

目前病態(tài)小巨核細(xì)胞已被列為MDS的診斷指標(biāo)之一［9］。由于臨床常規(guī)進(jìn)行巨核細(xì)胞檢查，一般是先在低倍鏡下進(jìn)行巨核細(xì)胞計(jì)數(shù)，然后換油鏡分類，所以與淋巴細(xì)胞、幼紅細(xì)胞大小相似的小巨核細(xì)胞往往容易漏檢，從而延誤診斷。采用SAP染色法可以明顯提高小巨核細(xì)胞的檢出率，對(duì)于MDS的早期診斷及其鑒別診斷具有重要的臨床價(jià)值。SAP染色法比傳統(tǒng)的APAAP染色法、親和素-生物素-過氧化物酶法更加敏感、特異［1，10］，具有操作簡便、結(jié)果易觀察、成本低等優(yōu)點(diǎn)。

綜上所述，本研究應(yīng)用CD41標(biāo)記的SAP染色有助于對(duì)老年性貧血的診斷和鑒別診斷，特別是對(duì)老年MDS的診斷有極其重要的臨床意義，為早期治療提供可靠的依據(jù)。

［1］龔旭波，吳先國，盧興國，等．CD41標(biāo)記微小巨核細(xì)胞染色法及其應(yīng)用價(jià)值探討［J］．中華血液學(xué)雜志，2008，29(6):420-422．

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