蜂膠抗動脈粥樣硬化作用的研究進展*1

袁 娜 王家富 黃慶玉

(泰山醫(yī)學院，山東 泰安 271016)

蜂膠是廣為熟知的被廣泛應用于保健食品的一種物質(zhì),是蜜蜂從植物幼芽或受傷樹干上采集樹脂,并混入上腭腺分泌物和蜂臘后，經(jīng)咀嚼加工而成的一種粘稠膠狀物質(zhì)[1]。

蜂膠中含有大量的生物活性物質(zhì)和微量元素,主要包含5大類成分:樹脂、樹膠約占50%～55%,蜂膠約占30%,揮發(fā)油約占10%,花粉約占5%,各種有機酸和礦物質(zhì)約占5%[2]。目前已從蜂膠中分離鑒定出的成分有黃酮類、萜烯類、醌類、酯類、醇類、酚類、醚類、有機酸和大量氨基酸、酶類、維生素B1、維生素B2、維生素B6、維生素E和維生素A 以及礦物質(zhì)等。近年來國內(nèi)外對蜂膠的研究取得很大進展,使得蜂膠的應用也越來越廣泛。它的抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、調(diào)節(jié)血脂等方面的作用也越來越受到人們的關(guān)注?，F(xiàn)將蜂膠抗動脈粥樣硬化相關(guān)研究作一綜述。

1 調(diào)節(jié)血脂水平

血脂是血液中脂肪的總稱,主要指血中的膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)。高血脂是動脈粥樣硬化形成的主要原因,血液中長期過高的膽固醇、甘油三脂，使得血管壁上過多的脂類容易被自由基氧化,形成脂質(zhì)過氧化物質(zhì), 沉積在血管壁上,從而導致動脈粥樣硬化。血清中TC、TG 及低密度脂蛋白(LDL-C) 含量升高和高密度脂蛋白(HDL-C) 含量降低是誘發(fā)動脈硬化和導致心腦血管疾病的重要因素, 高LDL-C 血癥是動脈粥樣硬化的易患因子, 其在血漿中的濃度與動脈粥樣硬化的發(fā)生率呈明顯的正相關(guān)。大量研究證明蜂膠醇提液和水提液均能有效抑制高脂血癥SD大鼠血清中的甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT ) 的升高, 并且能有效抑制肝臟組織中的TC、TG、丙二醛(MDA) 的升高, 但對血清中的高密度脂蛋白(HDL-C)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA )、一氧化氮(NO ) 的影響不明顯; 蜂膠醇提液能有效降低高脂血癥SD 大鼠的體重、肝重及肝指數(shù), 表明蜂膠能夠改善高脂血癥大鼠的脂質(zhì)代謝[3]。通過分離結(jié)扎大鼠膽總管進行成功造模后，觀察蜂膠對肝臟形態(tài)學變化，發(fā)現(xiàn)蜂膠組大鼠肝細胞擴大，膽小管擴張，肝臟水腫情況減輕，壞死肝細胞數(shù)目及清除比例增加[4]。蜂膠降低血脂機理尚未完全闡明，可能是與膽固醇或其轉(zhuǎn)化物膽酸結(jié)合，從而抑制其在腸內(nèi)的吸收，促進降解和排泄而起到調(diào)節(jié)血脂的作用，或與提高脂類代謝相關(guān)酶活性有關(guān)。

2 對內(nèi)皮細胞的作用

各種原因造成的動脈內(nèi)膜損傷是動脈粥樣硬化病變發(fā)生的關(guān)鍵因素。內(nèi)皮細胞功能障礙可以引發(fā)一系列變化,從而促進動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。張云香等[5]在一定濃度的腫瘤壞死因子-α誘導的人臍靜脈內(nèi)皮細胞凋亡的模型實驗中，加入不同濃度的蜂膠水提液，用流式細胞儀和缺口末端標記技術(shù)TUNEL檢測細胞凋亡率，實驗結(jié)果為模型組內(nèi)皮細胞凋亡率均明顯高于對照組,不同濃度蜂膠組內(nèi)皮細胞凋亡率明顯低于模型組。從而發(fā)現(xiàn)蜂膠對血管內(nèi)皮細胞起到一定的保護作用。喬松素亦稱松屬素，是蜂膠黃酮類成份中含量較高的一種，約為1.7%～2.8%，屬于雙氫黃酮類。李東娟等[6]培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞, 建立脂多糖損傷模型，光鏡下觀察細胞形態(tài), MTT 法觀察喬松素對人臍靜脈內(nèi)皮細胞活性的影響, ELISA 方法檢測培養(yǎng)上清中血管假血友病因子的含量, TUNEL 法檢測細胞凋亡率。發(fā)現(xiàn)喬松素能增強人臍靜脈內(nèi)皮細胞活性, 抑制脂多糖誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞的凋亡, 從而發(fā)揮可能的內(nèi)皮細胞保護功能。喬松素還能夠通過一氧化氮環(huán)化鳥苷酸(NO-cGMP) 和開放鉀離子通道封鎖鈣離子通道，從而引起小鼠動脈環(huán)舒張[7]。然而有其他學者[8]研究發(fā)現(xiàn)黃酮類中不同結(jié)構(gòu)的化合物，這些化合物對血管內(nèi)皮細胞形成管型具有抑制作用，咖啡酸乙酯的血管抑制作用最強，并且這些物質(zhì)具有的抗生成血管性質(zhì)與抗氧化性有相關(guān)性，即抗生成血管性質(zhì)強，反而該化合物的抗氧化能力相對要弱。

3 調(diào)節(jié)炎癥介質(zhì)作用

多種炎性介質(zhì)參與動脈粥樣硬化的病變形成。致炎因子首先引起內(nèi)皮細胞的功能障礙,從而引起一系列有大量炎性介質(zhì)參與的炎性反應。許多研究證實蜂膠具有抗炎癥的作用。抗炎性質(zhì)源于黃酮類物質(zhì)對致炎因子的抑制作用。高良姜黃素可以抑制環(huán)氧化酶、脂氧合酶 、聚半乳糖醛酸酶的活性，降低了環(huán)氧化酶2的表達?？Х人嵋阴ネㄟ^阻止細胞膜花生四烯酸的釋放達到抗炎特性?；ㄉ南┧峥梢砸种骗h(huán)氧化酶1和2的活性[9]?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMP)對細胞的遷移、侵襲、活化及動脈粥樣硬化的形成、血管重塑等均起重要作用。動脈粥樣硬化斑塊形成的早期,循環(huán)中的單核細胞和血小板黏附于損傷的內(nèi)膜下,釋放大量的細胞因子和生長因子,刺激血管平滑肌細胞增殖并分泌細胞外基質(zhì),同時又刺激平滑肌細胞和內(nèi)皮細胞合成基質(zhì)金屬蛋白酶,以促進細胞擺脫細胞基質(zhì)的束縛,然后進行遷移。細胞增殖和細胞外基質(zhì)的沉積以及基質(zhì)金屬蛋白酶引起的細胞外基質(zhì)降解之間失去平衡,最終導致斑塊形成。MMP-9 主要由單核巨噬細胞、中性粒細胞、成纖維細胞分泌產(chǎn)生。采用熒光電泳法,檢測不同葡萄糖濃度和不同蜂膠濃度處理的體外培養(yǎng)的人成纖維細胞及單核巨噬細胞系的基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9 蛋白的表達，發(fā)現(xiàn)蜂膠可抑制這些細胞MMP-9 的表達, 并呈劑量依賴性，有益于細胞基質(zhì)的積聚,從而有益于傷口的愈合[10]。核因子(nuclear factor kappa B,NF-κB )是一種重要的炎癥轉(zhuǎn)錄因子, 許多炎癥基因的表達是通過NF- κB的活化來實現(xiàn)的。在動脈粥樣硬化病變部位，血管平滑肌、血管內(nèi)皮細胞內(nèi)均可見NF-κB的激活現(xiàn)象，后者的NF-κB異常激活被認為是AS的始動機制之一[11]。利用載脂蛋白E基因敲除小鼠模型，研究證明咖啡酸苯乙酯可以抑制NF-κB，在高膽固醇血癥下也能阻止動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展，并且沒有不良反應?？Х人岜揭阴ネ瑯涌梢詼p少在大動脈NF-κB相關(guān)基因產(chǎn)物如TNF-α、 IL-2、 血小板源性生長因子( PDGF-BB)和 E-選擇素表達,以及NF-κB下游相關(guān)分子產(chǎn)物的激活。從而說明咖啡酸苯乙酯可以通過NF-κB和氧化應激，來達到治療動脈粥樣硬化的目的[12]。

4 抗氧化作用

蜂膠乙醇提取液具有明顯的抗氧化功能， 主要原因就是由于蜂膠中黃酮類化合物與超氧陰離子反應， 阻止自由基反應的引發(fā)， 或與鐵離子鰲合阻止羥基自由基的生成，或與脂質(zhì)過氧化基反應阻止脂質(zhì)過氧化過程等途徑。用分光光度計測定蜂膠水提液對臍動脈平滑肌細胞過氧化物歧化酶活性(SOD)及丙二醛(MDA)含量的影響，結(jié)果顯示蜂膠水提液組SOD活性較對照組有顯著性差異，高濃度的蜂膠水提液能減少MDA的生成[13]。 咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester，CAPE)是蜂膠中分離的一種活性成分，研究發(fā)現(xiàn)CAPE可以顯著降低MDA含量，提高SOD、過氧化氫酶 (CAT)活性，對谷胱甘肽過氧化酶 (GSH-Px)活性顯著提高。說明蜂膠可以清除氧自由基，對抗脂質(zhì)過氧化和一些參與氧化反應的酶活性具有作用[14]。阿魏酸、咖啡酸和二咖啡醇喹尼酸等含有酚羥基的有機酸可消除自由基,抑制氧化反應和自由基反應,具有保護肝細胞和抗肝脂質(zhì)過氧化作用。糖類中的果糖也有明顯的抗氧化作用。蜂膠中眾多的其他類化合物均有抗氧化作用,可能比已知的抗氧化物維生素C和維生素E 更加具有潛力[15]。中國蜂膠和巴西蜂膠有抑制大鼠體內(nèi)黃嘌呤氧化酶活性的作用,但是中國蜂膠作用更明顯[16]。在糖尿病大鼠模型中檢測咖啡酸苯乙酯對大腦氧化應激和炎癥反應的影響，發(fā)現(xiàn)其能夠顯著降低一氧化氮和丙二醛的含量，以及過氧化氫酶和過氧化物酶黃嘌呤氧化酶在大腦的含量，升高谷胱甘肽的含量，降低腫瘤壞死因子-α和干擾素、一氧化氮的含量[17]。

5 調(diào)節(jié)血小板作用

近年來研究發(fā)現(xiàn)動脈粥樣硬化的發(fā)生與血管內(nèi)皮損傷，血小板黏附、聚集和血栓形成密切相關(guān)。血小板在動脈粥樣硬化的發(fā)病過程中起重要作用[18]。張云香等[19]采用體外灌注法,用纖維蛋白原和人Ⅱ型膠原蛋白包被蓋玻片,復制血管內(nèi)膜創(chuàng)傷模型,正常血液流經(jīng)纖維蛋白原和膠原膜表面后,測量血小板粘附率。濃度為0.1 g/L的24%乙醇蜂膠提取液作實驗組,加入24%的乙醇作陰性對照組,同濃度的阿魏酸乙醇溶液作陽性對照組，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蜂膠乙醇提取液能抑制血小板的活化,降低其在纖維蛋白原和膠原蛋白膜表面的粘附活性,對血小板與纖維蛋白原的作用更明顯?？Х人岜揭阴ヒ部梢砸种颇z原暴露引起血小板聚集，對血小板ATP釋放也有抑制作用[20]。蜂膠醇提物和蜂膠醚提物及其成分咖啡酸苯乙酯,在雞胚尿囊絨膜和肺動脈內(nèi)皮細胞增生試驗中的抗血管新生活性,三者抑制雞胚尿囊絨膜的血管新生和平滑肌細胞的增殖[21]。

6 對平滑肌細胞和巨噬細胞的作用

血管平滑肌細胞向內(nèi)皮遷移,由收縮表型轉(zhuǎn)變?yōu)楹铣杀硇筒⒋罅吭鲋?，是高血壓、動脈粥樣硬化等心血管疾病的主要病理基礎(chǔ)。探討蜂膠水提液對血管緊張素Ⅱ誘導的人臍動脈平滑肌細胞增殖作用的影響時發(fā)現(xiàn)，血管緊張素Ⅱ誘導血管平滑肌細胞的增殖,氯沙坦能阻滯該作用，一定濃度的蜂膠水提液可抑制血管緊張素Ⅱ誘導的血管平滑肌細胞的增殖,其機制可能與限制細胞由G1期向S期轉(zhuǎn)變及增殖細胞核抗原的表達有關(guān)[22]。蜂膠能使炎癥早期巨噬細胞的活性升高 ，活化的巨噬細胞又能清除血管內(nèi)氧化修飾的脂蛋白從而起到防御動脈粥樣硬化功能。但巨噬細胞的過度活化會產(chǎn)生細胞因子,進而活化T淋巴細胞，激活補體系統(tǒng),誘導巨噬細胞轉(zhuǎn)化為泡沫細胞[23]。正常情況下巨噬細胞分泌很少的白細胞介素1和一氧化氮，但脂多糖可以誘導巨噬細胞分泌白細胞介素1和一氧化氮合成酶mRNA增多，蜂膠黃酮類物質(zhì)可以減少脂多糖導致的巨噬細胞合成分泌功能，降低炎癥反應[24]。蜂膠中的黃酮類成分，也抑制核轉(zhuǎn)錄因子的表達，從而引起致炎細胞因子降低,誘導巨噬細胞的凋亡。

許多學者已經(jīng)開始從分子基因水平來揭示蜂膠抗動脈粥樣硬化的作用機制,但蜂膠抗動脈粥樣硬化的細胞分子學機制十分復雜,涉及到其調(diào)節(jié)血脂的作用；保護血管內(nèi)皮細胞結(jié)構(gòu)和功能的完整性; 調(diào)節(jié)巨噬細胞吞噬和分泌，抑制血管平滑肌細胞異常增殖和遷移;影響生長調(diào)節(jié)因子和細胞因子的合成和釋放等多個環(huán)節(jié)?，F(xiàn)在大量的研究表明蜂膠具有廣泛的生理及藥理活性 ,開發(fā)前景極為廣闊。隨著對蜂膠成分及功能研究的深入，其生物學作用將得到不斷的探索發(fā)現(xiàn)。

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