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    以HIV-1 IN-LEDGF/p75相互作用為靶點(diǎn)的抑制劑篩選

    2018-12-11 10:51:54許曉雙張大為
    關(guān)鍵詞:磁珠靶點(diǎn)質(zhì)粒

    許曉雙,張大為

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    以HIV-1 IN-LEDGF/p75相互作用為靶點(diǎn)的抑制劑篩選

    許曉雙,張大為

    213001 常州,江蘇理工學(xué)院生物信息與醫(yī)藥工程研究所

    晶狀體上皮源性生長(zhǎng)因子 p75 蛋白(LEDGF/p75)與 HIV-1 整合酶(IN)之間的蛋白-蛋白相互作用是開(kāi)發(fā)抗 HIV-1 藥物的有效靶點(diǎn),本文旨在尋找以 HIV-1 IN-LEDGF/p75 相互作用為靶點(diǎn)的小分子抑制劑。

    采用均相時(shí)間分辨熒光技術(shù)(HTRF)篩選了 799 個(gè)化合物,比對(duì) IN-LEDGF/p75 相互作用的抑制活性。

    發(fā)現(xiàn) 5 個(gè)化合物——腎上腺酮、6-溴-1,2-二氫萘-1,2-二酮、頭孢噻吩、根皮含柘樹(shù)呫噸酮 L 和迷迭香酸對(duì)該相互作用表現(xiàn)出不同程度的抑制作用,其 IC50值分別為 12.3、22.7、26.2、18.5 和 1.13 μmol/L。

    為 HIV-1 IN-LEDGF/p75 相互作用抑制劑的發(fā)現(xiàn)以及新的抗 HIV-1 藥物的開(kāi)發(fā)提供了重要基礎(chǔ)。

    HIV 整合酶; HIV 整合酶抑制劑; LEDGF/p75; 均相時(shí)間分辨熒光技術(shù); 蛋白-蛋白相互作用

    人類(lèi)免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)是引起獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immune deficiency syndrome,AIDS)的病原體。HIV 屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科()慢病毒屬(),是一類(lèi)潛伏期很長(zhǎng)的病毒。人群中流行的 HIV 病毒主要有 2 種亞型:HIV-1 和 HIV-2。HIV-1 具有較高的毒力,更容易傳播同時(shí)也導(dǎo)致了全球大多數(shù)國(guó)家的 HIV 感染[1]。目前,針對(duì)該病毒缺乏有效的疫苗或者治愈手段,而針對(duì)病毒復(fù)制不同階段開(kāi)發(fā)的化學(xué)治療藥物仍然是防治艾滋病的有效途徑[2]。

    HIV-1 整合酶(integrase,IN)介導(dǎo)逆轉(zhuǎn)錄后形成的病毒 DNA 與宿主細(xì)胞基因組的整合,是病毒復(fù)制所必需的關(guān)鍵酶,也是研究抗艾滋病藥物的重要靶標(biāo)[3]。目前,經(jīng)美國(guó) FDA 批準(zhǔn)上市的 IN 抑制劑有 3 個(gè),包括雷特格韋(raltegravir,RAL)、埃替格韋(elvitegravir,EVG)和度魯特韋(dolutegravir,DTG),均為 IN 鏈轉(zhuǎn)移反應(yīng)抑制劑(integrase strand transfer inhibitors,INSTIs)[4-5]。隨著 3 種 INSTIs 在臨床的應(yīng)用,針對(duì)它們的耐藥性突變病毒株已經(jīng)出現(xiàn)[6]。因此,尋找新的作用機(jī)制靶點(diǎn)以開(kāi)發(fā)新的 IN 抑制劑顯得尤為迫切和重要。

    HIV-1 自身編碼的蛋白質(zhì)數(shù)量有限,需要依賴(lài)宿主細(xì)胞蛋白及其信號(hào)通路完成自身復(fù)制。其中參與整合的宿主蛋白稱(chēng)為整合輔因子(integration cofactors,INCFs)[7]。目前,研究最為清楚的 INCF 為晶狀體上皮源性生長(zhǎng)因子 p75 蛋白(lens epithelium-derived growth factor,LEDGF/p75)[8]。LEDGF/p75 也是首個(gè)被發(fā)現(xiàn)的能與 HIV-1 IN 發(fā)生蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)的宿主蛋白。該 PPI 主要由 LEDGF/p75 蛋白 C 端 IN 結(jié)合區(qū)(integrase-binding domain,IBD)與 HIV-1 IN 催化核心區(qū)(catalytic core domain,CCD)作用形成,研究表明該蛋白-蛋白相互作用是開(kāi)發(fā)抗 HIV-1 藥物的有效靶點(diǎn)[8]。

    目前,盡管文獻(xiàn)已經(jīng)報(bào)道了許多 HIV-1 IN-LEDGF/p75 相互作用抑制劑,但還沒(méi)有一個(gè)該類(lèi)抑制劑上市用于抗病毒治療。因此,積極尋找和設(shè)計(jì)新的 HIV-1 IN-LEDGF/p75 相互作用抑制劑,具有重要的臨床意義和廣闊的應(yīng)用前景。本文以 HIV-1 IN-LEDGF/p75 相互作用為靶點(diǎn),采用均相時(shí)間分辨熒光(homogeneous time resolved fluorescence,HTRF)技術(shù),篩選了 799 個(gè)化合物抑制相互作用的活性,旨在尋找更多的 HIV-1 IN-LEDGF/p75 相互作用的抑制劑,為開(kāi)發(fā)新的抗 HIV-1 藥物奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌株及質(zhì)粒 大腸桿菌()菌株 BL21(DE3)購(gòu)自北京全式金生物技術(shù)有限公司;pMD-18-T 載體購(gòu)自寶生物工程(大連)有限公司;表達(dá)載體 pET28a、pGEX-4T-1、重組質(zhì)粒 pET28a-IN-dm(表達(dá) N 端融合 6 × His 標(biāo)簽含有 F185K/C280S 可溶型雙突變 IN)和 pGEX-4T-p75(表達(dá) N 端融合 GST 標(biāo)簽的 p75 蛋白)由本實(shí)驗(yàn)室保存。

    1.1.2 試劑與儀器 小分子化合物購(gòu)自國(guó)家小分子化合物資源中心,其中399 個(gè)來(lái)自 InterBioScreen 公司(簡(jiǎn)稱(chēng)IB)的活性化合物庫(kù),400 個(gè)來(lái)自 BioBioPha 公司(簡(jiǎn)稱(chēng)BBP)的結(jié)構(gòu)類(lèi)型多樣的天然產(chǎn)物庫(kù);Ni-NTA 與 GST 純化柱填料購(gòu)自常州天地人和生物科技有限公司;Anti-6His-XL665 受體磁珠和 Anti-GST-Cryptate 供體磁珠購(gòu)自法國(guó) Cisbio 公司;384 孔聚丙烯淺孔微孔板和 Envision 2102 multilabel reader 多功能酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)Perkin Elmer 公司;BE-9008 微孔板恒溫振蕩器購(gòu)自其林貝爾儀器制造有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 GST-IBD 的表達(dá)純化 以構(gòu)建好的重組質(zhì)粒 pGEX-4T-p75 為母本質(zhì)粒,PCR 擴(kuò)增 p75 IBD 結(jié)構(gòu)域(第 347-429 為氨基酸殘基)表達(dá)序列,克隆至表達(dá)載體 pGEX-4T-1 的H I-I 位點(diǎn)。正確構(gòu)建的含 p75 IBD 編碼基因的重組表達(dá)質(zhì)粒命名為 pGEX-4T-IBD,然后轉(zhuǎn)化至BL21(DE3),培養(yǎng)過(guò)夜挑取單個(gè)克隆,37 ℃振蕩培養(yǎng)過(guò)夜,按 1:100 的比例擴(kuò)大培養(yǎng)至對(duì)數(shù)中期,0.5 mmol/L IPTG 30 ℃誘導(dǎo)表達(dá) 3 h,收集菌體。裂解液[50 mmol/L Tris-HCl(pH 7.2),500 mmol/L NaCl,1 mmol/L DTT,1 mmol/L EDTA,1 mmol/L PMSF]重懸菌體,超聲破菌,離心收集上清。利用GST 瓊脂糖凝膠 FF 親和色譜柱純化 LEDGF/p75融合蛋白。用洗脫 buffer[50 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0),500 mmol/L NaCl,1 mmol/L DTT,20 mmol/L 還原型谷胱甘肽]洗脫目的蛋白,具體純化步驟參考文獻(xiàn)[9]。采用 SDS-PAGE 檢測(cè)蛋白表達(dá)純化,BCA 法測(cè)定蛋白質(zhì)含量。

    1.2.2 IN-HIS 的表達(dá)純化 以重組質(zhì)粒 pET28a-N-IN-dm 為母本質(zhì)粒,PCR 擴(kuò)增 IN CCD 結(jié)構(gòu)域(第 50-212 為氨基酸殘基)表達(dá)序列,克隆至表達(dá)載體 pET28a 的I-I 位點(diǎn)。正確構(gòu)建的含 IN CCD 編碼基因的重組表達(dá)質(zhì)粒命名為 pET28a-IN-CCD,然后轉(zhuǎn)化至BL21(DE3),培養(yǎng)過(guò)夜挑取單個(gè)克隆,37 ℃振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。按照 1:100 的比例擴(kuò)大培養(yǎng)至對(duì)數(shù)中期,1 mmol/L IPTG 30 ℃誘導(dǎo)表達(dá) 4 h,收集菌體。裂解液[20 mmol/L HEPES(pH 7.3),1 mol/L NaCl,2 mmol/L β-ME,10% 丙三醇,0.1% NP-40]重懸菌體,超聲破菌,離心收集上清。利用 Ni-瓊脂糖凝膠 6FF 親和色譜柱純化 IN-HIS 融合蛋白。用洗脫 buffer[20 mmol/L HEPES(pH 7.3),1 mol/L NaCl,2 mmol/L β-ME,10% 丙三醇,250 mmol/L 咪唑]洗脫目的蛋白,檢測(cè)方法同 1.2.1。

    1.2.3 基于 HTRF 的 IN-IBD 相互作用抑制劑的篩選方法 當(dāng) C-端帶有 His標(biāo)簽的 HIV-1 IN(IN-HIS)和 N 端帶有 GST 標(biāo)簽的 IBD(GST-IBD)蛋白相互作用時(shí)(空間距離小于10 nm),Anti-6His-XL665 受體磁珠和Anti-GST-Cryptate 供體磁珠也會(huì)相應(yīng)靠近,從而發(fā)生共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)現(xiàn)象[10]。供體磁珠熒光分子的激發(fā)將誘發(fā)受體分子發(fā)出熒光,同時(shí)供體熒光分子自身的熒光強(qiáng)度衰減。當(dāng)抑制劑分子阻斷 IN-HIS 和 GST-IBD 的相互作用時(shí),F(xiàn)RET 現(xiàn)象減弱。因此 FRET 現(xiàn)象的強(qiáng)弱可以反映抑制劑分子對(duì)兩個(gè)蛋白相互作用抑制作用的強(qiáng)弱,從而該方法可以用于 IN 與 IBD 相互作用抑制劑的篩選。

    HTRF 實(shí)驗(yàn)在 384 孔板進(jìn)行,所用蛋白和化合物均用反應(yīng) buffer[25 mmol/L Tris-HCl(pH 7.5),150 mmol/L NaCl,1 mg/ml BSA,0.1% NP40,2 mmol/L MgCl2]稀釋。將以下成分加入 384 孔板中:4 μl 50 nmol/L IN、4 μl 25 nmol/L IBD、2 μl 化合物,混勻后 25 ℃、200 r/min 反應(yīng) 30 min。然后加入 5 μl 0.8 nmol/L 的 GST-Cryptate 供體磁珠和 5 μl 4 nmol/L 的 Anti-6His-XL665 受體磁珠(含 100 mmol/L KF),混勻后 25 ℃,200 r/min 反應(yīng) 1 h。使用多功能酶標(biāo)儀,以 320 nm 為激發(fā)光,讀取 665 nm 和 620 nm 處的發(fā)射光。以 BI-224436 作為陽(yáng)性對(duì)照。

    1.2.4 Z 因子的測(cè)定 為了評(píng)價(jià)所構(gòu)建的 HTRF 篩選 GST-IBD 與 IN-HIS 相互作用抑制劑方法的質(zhì)量與穩(wěn)定性,分別測(cè)定了 Z 因子、信號(hào)窗(signal window,SW)和 CV 等主要參數(shù)。當(dāng) Z 因子> 0.5、SW > 2、CV < 20% 時(shí),該篩選方法的結(jié)果正確可信。此外,高通量篩選方法的信號(hào)噪音比(signal-to-ratio,S/N)> 10,信號(hào)背景比(signal-to-background,S/B)值> 3,該高通量篩選方法才具有高靈敏度和高特異性。Z 因子、S/N、S/B 的計(jì)算公式如下:

    Z = 1 –3 ×(SDmax– SDmin) |Mmax– Mmin|

    S/N =Mmax– Mmin SDmin

    S/B =Mmax Mmin

    Mmax:最大信號(hào)值的平均值;Mmin:最小信號(hào)值的平均值;SDmin:最小信號(hào)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差;SDmax:最大信號(hào)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    分別計(jì)算各孔 665 nm 和 620 nm 處熒光強(qiáng)度的比值(Ration 665/620),并計(jì)算各孔的相對(duì)抑制率。活性樣品進(jìn)行濃度稀釋后檢測(cè)相對(duì)抑制率,使用軟件 Graphpad 6.0 作圖計(jì)算半數(shù)抑制濃度 IC50值。

    2 結(jié)果

    2.1 GST-IBD 與 IN-HIS 的表達(dá)純化結(jié)果

    圖 1A 為 GST-IBD 在大腸桿菌 BL21(DE3)中的表達(dá)結(jié)果,GST-IBD 在經(jīng) 0.5 mmol/L 的 IPTG 誘導(dǎo)后,目的蛋白(36.89 kD)蛋白量明顯增多,通過(guò) GST 柱純化,并用 20 mmol/L 谷胱甘肽洗脫檢測(cè)得到 GST-IBD 蛋白,蛋白條帶清晰可見(jiàn),沒(méi)有非特異性條帶,以 BSA 作為標(biāo)準(zhǔn)品,使用 BCA 法測(cè)得 GST-IBD 蛋白的濃度約為 0.28 mg/ml。

    圖 1B 為IN-HIS 在大腸桿菌 BL21(DE3)中的表達(dá)結(jié)果,IN-HIS 在經(jīng) 1 mmol/L 的 IPTG 誘導(dǎo)后,蛋白(32.96 kD)表達(dá)量明顯增多,通過(guò) Ni-NTA 柱純化,并用 250 mmol/L 咪唑洗脫檢測(cè)得到 IN-HIS 蛋白,蛋白條帶清晰可見(jiàn),沒(méi)有非特異性條帶,以 BSA 作為標(biāo)準(zhǔn)品,使用 BCA 法測(cè)得 IN-HIS 蛋白的濃度約為 0.37 mg/ml。

    2.2 HTRF 方法穩(wěn)定性分析

    Z 因子、信號(hào)窗(SW)和 CV 是評(píng)價(jià)藥物篩選方法均一性和穩(wěn)定性的重要參數(shù)。如圖 2 所示,Z 因子、SW 值、CV 值分別為 0.89、21.05、4.09%,符合 Z 因子 > 0.5、SW > 2、CV < 20%,說(shuō)明篩選結(jié)果是正確可信的;S/N 與 S/B 的值分別為 172.07 與 3.83,符合 S/N > 10,S/B > 3,說(shuō)明該篩選方法具有高靈敏度和高特異性。

    2.3 IB 庫(kù)中 IN-LEDGF/p75 抑制劑篩選結(jié)果

    將 IB 庫(kù)中 399 個(gè)化合物進(jìn)行抑制 IN-LEDGF/p75 活性篩選,每個(gè)化合物初篩體系終濃度為 50 μmol/L,重復(fù) 2 次。初篩結(jié)果顯示,化合物腎上腺酮(adrenalone)、6-溴-1,2-二氫萘-1,2-二酮(bonaphton)、頭孢噻吩(cefalotin)對(duì) IN-LEDGF/p75 抑制活性均達(dá)到 90% 以上。將這 3 個(gè)化合物在反應(yīng)體系中的終濃度以 50 μmol/L 作為起始濃度進(jìn)行倍比稀釋?zhuān)瑴y(cè)定3 個(gè)化合物對(duì) IN-LEDGF/p75 的抑制百分率,通過(guò)非線(xiàn)性擬合得到 IC50值(圖 3 ~圖 5)。結(jié)果顯示,腎上腺酮、6-溴-1,2-二氫萘-1,2-二酮、頭孢噻吩的 IC50值分別為 12.3、22.7和 26.2 μmol/L。

    圖 1 SDS-PAGE 檢測(cè) GST-IBD 與 IN-HIS 的表達(dá)純化結(jié)果[A:GST-IBD(M:分子量標(biāo)準(zhǔn);1:上清;2:誘導(dǎo)后;3:誘導(dǎo)前;4:20 mmol/L GSH洗脫);B:IN-HIS(1:誘導(dǎo)前;2:誘導(dǎo)后;3:上清;4:250 mmol/L 咪唑洗脫;M:分子量標(biāo)準(zhǔn))]

    Figure 1 Expression and purification results of GST-IBD and IN-HIS were detected by SDS-PAGE [A: GST-IBD (M: Marker;1: Supernatant; 2: After induction; 3: Before induction; 4: 20 mmol/L GSH elution); B: IN-HIS (1: Before induction; 2: After induction; 3: Supernatant; 4: 250 mmol/L imidazole elution; M: Marker)]

    圖 2 HTRF 測(cè)試 GST-IBD 與 IN-HIS 相互作用方法評(píng)價(jià)結(jié)果

    Figure 2 Evaluation results of GST-IBD and IN-HIS interaction by HTRF

    2.4 BBP 庫(kù)中 IN-LEDGF/p75 抑制劑篩選結(jié)果

    同樣,將 BBP 庫(kù)中 400 個(gè)化合物進(jìn)行抑制 IN-LEDGF/p75 活性篩選,每個(gè)化合物初篩體系終濃度為 50 μmol/L,重復(fù) 2 次。初篩結(jié)果顯示,化合物根皮含柘樹(shù)呫噸酮 L(cudraxanthone L)與迷迭香酸(rosmarinic acid)對(duì) IN-LEDGF/p75 抑制活性均達(dá)到 90% 以上。將這 2 個(gè)化合物在反應(yīng)體系中的終濃度以 50 μmol/L 作為起始濃度進(jìn)行倍比稀釋?zhuān)瑴y(cè)定 2 個(gè)化合物對(duì) IN-LEDGF/p75 的抑制百分率,通過(guò)非線(xiàn)性擬合得出 2 個(gè)化合物對(duì) IN-LEDGF/p75 抑制的 IC50值(圖 6 和圖 7)。結(jié)果顯示,根皮含柘樹(shù)呫噸酮 L 和迷迭香酸的 IC50值分別為 18.5 和 1.13 μmol/L。

    圖 3 化合物腎上腺酮的 IC50(A)與化學(xué)結(jié)構(gòu)式(B)

    Figure 3 IC50(A) and chemical structure formula (B) of compound adrenalone

    圖 4 化合物6-溴-1,2-二氫萘-1,2-二酮的 IC50(A)與化學(xué)結(jié)構(gòu)式(B)

    Figure 4 IC50(A) and chemical structure formula (B) of compound bonaphton

    圖 5 化合物頭孢噻吩的 IC50(A)與化學(xué)結(jié)構(gòu)式(B)

    Figure 5 IC50(A) and chemical structure formula (B) of compound cefalotin

    圖 6 化合物根皮含柘樹(shù)呫噸酮 L 的 IC50(A)與化學(xué)結(jié)構(gòu)式(B)

    Figure 6 IC50(A) and chemical structure formula (B) of compound cudraxanthone L

    圖 7 化合物迷迭香酸的 IC50(A)與化學(xué)結(jié)構(gòu)式(B)

    Figure 7 IC50(A) and chemical structure formula (B) of compound rosmarinic acid

    3 討論

    HIV-1 IN-LEDGF/p75 蛋白之間的相互作用對(duì)于 IN 進(jìn)入細(xì)胞核以及染色體定位是必需的,是篩選抗病毒藥物的重要靶點(diǎn)[8]。晶體結(jié)構(gòu)顯示,二聚化的整合酶 CCD 形成的結(jié)合口袋與 LEDGF/p75 的 IBD 發(fā)生了相互作用。研究表明,抑制 CCD-IBD 相互作用的小分子化合物也能夠抑制它們各自全長(zhǎng)蛋白,即 IN 和 LEDGF/p75 之間的相互作用。因此,本文采用全長(zhǎng)的 IN 與 IBD 之間的相互作用來(lái)進(jìn)行 IN-LEDGF/p75 之間的相互作用篩選。

    腎上腺酮是兩棲綱、爬行綱、鳥(niǎo)綱和哺乳類(lèi)中的嚙齒目動(dòng)物的主要糖皮質(zhì)激素,具有調(diào)節(jié)應(yīng)激反應(yīng)、免疫反應(yīng)的功能。此外,腎上腺酮還是目前公認(rèn)的心臟復(fù)蘇首選藥的合成前體[11]。6-溴-1,2-二氫萘-1,2-二酮是一種新的抗病毒化療藥物。研究表明,6-溴-1,2-二氫萘-1,2-二酮能明顯降低鼻內(nèi)接種 A2 型流感(香港)68 病毒的小鼠的嚴(yán)重致死率[12]。頭孢噻吩臨床上作為耐青霉素金葡菌(耐甲氧西林者除外)所致的呼吸道感染、軟組織感染、尿路感染、敗血癥等的選用藥物[13],可用于 AIDS 引起的細(xì)菌感染。根皮含柘樹(shù)呫噸酮 L 為氧雜蒽酮類(lèi)化合物,廣泛存在于一些天然中草藥中,具有利尿、抗微生物、抗病毒、強(qiáng)心、抗結(jié)核、抗癌、抗肝毒等藥理活性[14]。目前未見(jiàn)關(guān)于這 4 個(gè)化合物具有抑制 IN-LEDGF/p75 相互作用的活性的報(bào)道。因此,本研究首次報(bào)道了這 4 個(gè)化合物具有抑制IN-LEDGF/p75 相互作用的活性。

    迷迭香酸廣泛分布于唇形科、紫草科、葫蘆科等植物資源中,具有抗菌消炎、抑制 HIV 整合酶、抑制透明質(zhì)酸酶、抗抑郁、抗血栓、抗腫瘤等藥理作用[15]。Tewtrakul 等[16]發(fā)現(xiàn),提取于紫蘇的迷迭香酸在體外抑制 HIV-IN 活性的 IC50值為5 μmol/L,而本文發(fā)現(xiàn)迷迭香酸在體外抑制 IN-LEDGF/p75 相互作用的 IC50為 1.13 μmol/L,表明迷迭香酸是一種蛋白-蛋白相互作用抑制劑,為發(fā)現(xiàn) HIV-1 IN-LEDGF/p75 相互作用抑制劑提供了重要基礎(chǔ)。

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    Screening of inhibitors targeting HIV-1 IN-LEDGF/p75 interaction

    XU Xiao-shuang, ZHANG Da-wei

    Institute of Bioinformatics and Medical Engineering, Jiangsu University of Technology, Changzhou 213001, China

    The protein-protein interaction between the cellular chromatin associated protein lens epithelium-derived growth factor (LEDGF/p75) and the HIV-1 integrase (IN) is an effective target for the development of anti-HIV-1 drugs. This work aims to find small molecular inhibitors targeting the HIV-1 IN-LEDGF/p75 interaction.

    The inhibitory activity of 799 compounds (from 2 compounds libraries: InterBioScreen and BioBioPha) on the interaction of IN-LEDGF/p75 was screened by a homogeneous time resolved fluorescence (HTRF)-based assay.

    It was found that five compounds, adrenalone, bonaphton, cefalotin, cudraxanthone L and rosmarinic acid, showed different inhibitory effect on the interaction of HIV-1 IN-LEDGF/p75, and their IC50values were 12.3, 22.7, 26.2, 18.5 and 1.13 μmol/L, respectively.

    This work provides an important basis for the discovery of HIV-1 IN-LEDGF/p75 interaction inhibitors and the development of new anti-HIV-1 drugs.

    HIV integrase; HIV integrase inhibitors; LEDGF/p75; Homogeneous time resolved fluorescence; Protein-protein interaction

    ZHANG Da-wei, Email: zhangdw517@gmail.com

    國(guó)家自然科學(xué)基金(31700297)

    張大為,Email:zhangdw517@gmail.com

    2018-07-09

    10.3969/j.issn.1673-713X.2018.06.003

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