亞甲藍光化學法血漿病毒滅活對凝血因子Ⅷ的影響

房景霞 劉鑫 孫紹秋 李玉梅 房輝

輸注病毒滅活血漿成為目前國內(nèi)外預防輸注血漿制品傳播傳染病的有效措施。亞甲藍光化學法滅活病毒是最近幾年才發(fā)展起來的新技術(shù)，該法滅活血漿中病毒的效果已被證實，我國部分地區(qū)血站已廣泛推廣應(yīng)用。亞甲藍是一種染料，屬于吩噻嗪類藥物，是臨床上常用的解毒劑，主要用于治療亞硝酸鹽和氰化物中毒。它能與病原微生物核酸和蛋白質(zhì)結(jié)合，在適當波長的熒光照射下，發(fā)生一系列光化學或光生物效應(yīng)導致病原體失活。滅活病毒的效果與亞甲藍濃度，光照溫度、時間、強度，血袋容量等因素有關(guān)。本血站自2009年6月末起，采用該法對血漿進行病毒滅活，為了解病毒滅活后血漿中凝血因子Ⅷ的變化，以及該法影響凝血因子Ⅷ含量改變的因素，對病毒滅活前后的凝血因子Ⅷ的含量進行檢測。

1 材料與方法

1.1 研究對象 隨機抽取唐山市中心血站2009年10至11月無償獻血全血標本60份(400ml/份)，均于采血后6 h內(nèi)濾除白細胞，離心，制備成新鮮液體血漿(200ml/份)。將血漿無菌留樣2ml(Ⅰ組)，檢測其中的Ⅷ因子含量。另外無菌留取2ml血漿(Ⅱ組)不加亞甲藍，剩余的血漿加入亞甲藍，將它們均放入病毒滅活箱中滅活。

1.2 試劑與儀器 一次性使用去白細胞塑料血袋(山東威高集團醫(yī)用高分子制品股份有限公司，批號:0908153，有效期:2011.07);一次性使用病毒滅活裝置配套用輸血過濾器(淄博中?？滇t(yī)療器具有限公司，批號:20090626，有效期:2011.05);J6-MZ大容量低溫離心機(美國Beckman公司);HDME-1A型醫(yī)用病毒滅活箱(上海輸血技術(shù)有限公司);低溫血液濾器工作柜(天津市正源制冷設(shè)備有限公司LBC2-22);SE250型高頻熱合機(深圳達科為醫(yī)療器械有限公司);CompoDock型無菌導管連接器(德國);STatr4半自動血凝儀(法國Stago公司);乏Ⅷ因子血漿(批號:S302002，有效期:2012.02)、APTT試劑(批號:TE090722，有效期:2012.12)、CaCl2 試劑(批號:00806031，有效期:2012.12)、IBS 稀釋液(批號:S0903005，有效期:2012.12)均由德國Marbury公司生產(chǎn)。

1.3 新鮮血漿的病毒滅活處理 將血漿通過無菌導管連接器與一次性使用病毒滅活裝置配套用輸血過濾器連接，向血漿中加入亞甲藍，混勻后使其終濃度為1 μmol/L左右，將加入亞甲藍的血漿平放入病毒滅活箱中的擱架上進行照射，擱架的擺動頻率為60次/min，光照強度為30000～38000 lux，溫度為2～8℃，照射時間為35min。在低溫血液濾器工作柜內(nèi)，溫度為2～8℃，將光照后的血漿通過病毒滅活過濾器濾除亞甲藍，混勻后無菌留樣2ml(Ⅲ組)。檢測Ⅱ、Ⅲ組血漿中的Ⅷ因子含量。

1.4 檢測方法 Ⅷ因子含量的檢測采用STatr4半自動血凝儀，嚴格按照凝血因子Ⅷ檢測試劑的說明書方法操作。

2 結(jié)果

Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組血漿Ⅷ因子水平分別為(0.86 ±0.02)、(0.81±0.02)、(0.78 ±0.02)U/ml，3 組血漿Ⅷ因子水平間差異無統(tǒng)計學意義(P ＜0.05)。

3 討論

臨床上不安全的輸血除了免疫的因素之外，主要是來源于病原微生物以及其代謝產(chǎn)物的污染，特別是病毒的傳播已經(jīng)對輸血的安全性構(gòu)成了肯定并且后果嚴重的威脅。國內(nèi)外的研究報道均證實大多數(shù)的輸血后病毒感染是由“窗口期”問題引起的。在美國90%以上的輸血傳播人類免疫缺陷病毒(HIV)和乙型肝炎病毒(HBV)以及75%以上的輸血傳播丙型肝炎病毒(HCV)的危險均是來自“窗口期”感染的獻血。目前國內(nèi)各采供血機構(gòu)按照衛(wèi)生部的要求只進行乙肝表現(xiàn)抗原(HBsAg)、抗HCV、抗HIV，梅毒抗體等的檢測，并沒有要求對其他如人類嗜T細胞病毒(HTLV)、巨細胞病毒(CMV)、EB病毒(EBV)等病毒進行檢測。此外，可能通過輸血傳播疾病的新病毒也在不斷的被發(fā)現(xiàn)，這些造成了不能完全的剔除血液中的病毒。因此，要從根本上控制和杜絕輸血傳播的病毒性疾病，除了要加強獻血者的篩查之外，還必須要對血液進行病毒滅活處理，這樣才有可能達到輸血安全的目的。血液中的病毒滅活的方法有很多，亞甲藍光化學法滅活血漿病毒是近幾年發(fā)展起來的新技術(shù)，可以使大多數(shù)的脂質(zhì)包膜病毒和部分的非脂質(zhì)包膜病毒滅活，特別是對HCV、HBV、HIV等病毒的滅活效果更是理想，是目前惟一獲準用于臨床的光化學血漿病毒滅活的技術(shù)［1］。國內(nèi)的部分地區(qū)血站已經(jīng)廣泛推廣應(yīng)用。亞甲藍本身是治療氰化物、亞硝酸鹽、醌類、苯胺及硝基苯等所引起的高鐵血紅蛋白血癥的藥物，與臨床上亞甲藍的使用劑量相比，用于血漿病毒滅活的亞甲藍使用劑量(1 μmol/L即300μg/L)是極其微量的，只相當于高鐵血紅蛋白血癥治療劑量的幾百分之一。因此，在毒理學上是安全的。光化學法滅活病毒的機理主要是依靠光敏劑在光照度條件下，產(chǎn)生自由基(一類機制)或者單線態(tài)氧(二類機制)氧化損傷病毒的分子結(jié)構(gòu)，從而達到殺滅病毒的效果，與此同時，也造成了血漿中活性成分的損傷。

在本實驗中通過對隨機抽樣的30份亞甲藍光化學法滅活血漿病毒的凝血因子Ⅷ的含量進行了檢測，與未經(jīng)滅活處理的同份血漿(Ⅰ組)相比，滅活后的凝血因子Ⅷ的含量(Ⅲ組)有所下降，再次證明了亞甲藍光化學法滅活血漿病毒在殺滅病毒的同時，會對血漿中的有效成分造成影響，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，Ⅷ因子的含量仍然符合國家的標準，與國內(nèi)外其他的實驗所得的結(jié)果相似，說明光照滅活過程中的熱變性效應(yīng)是造成凝血因子Ⅷ含量變化的重要因素［2］。除了熱效應(yīng)和光化學反應(yīng)是凝血因子Ⅷ含量變化的重要影響因素之外，還與時間、溫度、耗材和測量的方法等諸多因素有關(guān)。目前對單一人份的血漿病毒滅活國內(nèi)外大多采用亞甲藍光化學法，其使病毒滴度減少的程度與所用的光照強度和亞甲藍濃度直接相關(guān)［3］。亞甲藍光化學法進行血漿病毒滅活，對血漿中凝血因子Ⅷ含量無顯著影響，滅活過程中的熱效應(yīng)和光化學反應(yīng)是凝血因子Ⅷ含量改變的重要因素。

1 錢開誠.血液成分病毒滅活研究的進展.中國輸血雜志，2004，17(增刊):36-38.

2 程玉根，柏則蓉，賈紅志.亞甲藍光化學法滅活血漿病毒對血漿成分的影響.臨床血液學雜志(輸血與檢驗版)，2007，4:169-170.

3 黃文杰，范恩勇，孫海英，等.亞甲藍光化學法病毒滅活血漿對凝血因子的影響.實用醫(yī)學雜志，2006，22:2193.