計(jì)算機(jī)輔助精液分析(CASA)的質(zhì)量控制

李文峰 王興華

隨著男性不孕癥的增加，常規(guī)手工檢查精液已不能滿足患者的需求。計(jì)算機(jī)輔助精液分析(CASA)具有檢測(cè)快、分析項(xiàng)目多、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)而用于精液分析，經(jīng)過(guò)幾年的實(shí)際使用，已得到廣大患者的普遍認(rèn)可，并已逐步普及開(kāi)來(lái)。因此，為了提高精液分析檢測(cè)的準(zhǔn)確度，CASA的質(zhì)量控制顯得越來(lái)越重要。精液分析的質(zhì)量控制分為分析前、分析中、分析后3個(gè)環(huán)節(jié)。

1 分析前的質(zhì)量控制

分析前的質(zhì)量控制包括患者在家中準(zhǔn)備直到精液標(biāo)本送到檢驗(yàn)人員手中，同時(shí)了解患者可能影響精液檢測(cè)的疾病及用藥等情況。此過(guò)程對(duì)精液分析的準(zhǔn)確至關(guān)重要。

1.1 禁欲時(shí)間 精液采集前應(yīng)禁欲至少24h，但不超過(guò)7d，最好3～5d。禁欲時(shí)間過(guò)短，容易導(dǎo)致精液量過(guò)少，精子密度和精子總數(shù)偏低；禁欲時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)導(dǎo)致畸形精子數(shù)增加，精子活動(dòng)力降低。最初檢查應(yīng)分析2份標(biāo)本，且2次采集的時(shí)間應(yīng)大于7d，不超過(guò)3周。如果2次的結(jié)果有明顯較大的差異，則應(yīng)再取標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，因精液分析結(jié)果受多種因素的影響可有較大的波動(dòng)。

1.2 標(biāo)本采集方式 有手淫法、特制避孕套法、電振動(dòng)或前列腺按摩法。手淫法是指患者手淫取精液后置于干凈的廣口瓶?jī)?nèi)送檢；普通避孕套因含有潤(rùn)滑劑和殺精子藥物，故可讓取精液困難者使用特制避孕套法取精液；電振法或前列腺按摩法用于不能自行排精的患者，需要醫(yī)師幫助。不可采用性交中斷法取精液，因?yàn)樯渚畛醪糠挚赡軄G失，而這部分精子密度、精子活動(dòng)率、精子形態(tài)和精子頂體完整性都顯著高于后部分精液[1]。無(wú)論使用何種取精方法，均應(yīng)注意取全，精液采集不準(zhǔn)，精液分析就不準(zhǔn)，就會(huì)做出誤差較大的檢測(cè)報(bào)告。

1.3 送檢溫度和時(shí)間 精液采集后應(yīng)注意保溫，最好控制在37℃左右，溫度過(guò)高或過(guò)低均會(huì)影響精液的檢測(cè)結(jié)果。應(yīng)注意及時(shí)送檢，最好在10min內(nèi)送檢，因?yàn)檎＞簶?biāo)本在60min內(nèi)液化，但常常在15min內(nèi)已液化；送檢時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，則無(wú)法觀察液化時(shí)間，還會(huì)導(dǎo)致精液檢測(cè)的各項(xiàng)結(jié)果偏低，故應(yīng)保溫及時(shí)送檢。

1.4 患者檢測(cè)前準(zhǔn)備 患者檢測(cè)前應(yīng)保持平時(shí)生活狀況，不特殊飲食、不劇烈運(yùn)動(dòng)、不使用藥物等。因?yàn)槲⒘吭氐暮?、泌尿生殖道的感染、飲食、煙酒、農(nóng)藥接觸以及劇烈運(yùn)動(dòng)均會(huì)對(duì)精液質(zhì)量產(chǎn)生影響[2]。

1.5 檢驗(yàn)人員培訓(xùn) 無(wú)論使用何種精液分析儀，都必須由檢驗(yàn)人員來(lái)操作完成，而檢驗(yàn)人員除了掌握精液的組成、性狀及各種參數(shù)外，還應(yīng)掌握自己使用的CASA系統(tǒng)的原理、性能和操作方法。故對(duì)檢驗(yàn)人員的培訓(xùn)應(yīng)從標(biāo)本和儀器兩方面進(jìn)行。

2 分析中的質(zhì)量控制

分析中的質(zhì)量控制是嚴(yán)格、規(guī)范、正確的實(shí)驗(yàn)操作，以及控制精液分析儀處于最佳或正常的工作狀態(tài)完成標(biāo)本的檢測(cè)過(guò)程。

2.1 液化 使精液處于37℃的恒溫水浴箱內(nèi)充分液化。對(duì)60min不液化的精液，可直接以精液不液化報(bào)告。對(duì)60min液化不全的精液，可采用物理方法(如加等量的培養(yǎng)液并用加樣器反復(fù)吹打)或化學(xué)方法(如加菠蘿蛋白酶1g/L)使其液化。

2.2 粘稠度 精液的粘稠與不液化是2種不同的現(xiàn)象，應(yīng)加以區(qū)分；評(píng)價(jià)粘稠度的方法是用一寬口的吸管吸取精液，若液滴形成大于2cm的拉絲，則為粘稠度異常。若以其他器物挑起精液觀察粘稠度，正常精液拉絲長(zhǎng)度亦不可超過(guò)2cm。

2.3 檢測(cè)時(shí)間和溫度 液化的精液應(yīng)立即檢測(cè)，如時(shí)間過(guò)長(zhǎng)則會(huì)導(dǎo)致精子活動(dòng)率及活動(dòng)力降低。由于精子的運(yùn)動(dòng)特征對(duì)溫度敏感，故精液應(yīng)在室溫20～40℃的環(huán)境中檢測(cè)，特別是冬天應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室開(kāi)啟取暖設(shè)施，且分析過(guò)程不宜過(guò)長(zhǎng)。另外，應(yīng)提前開(kāi)啟顯微鏡電源，使顯微鏡載物臺(tái)預(yù)熱。

2.4 標(biāo)本的制備 將徹底液化的精液輕輕充分混勻，用加樣器吸取5～10μl于干凈的專用精液計(jì)數(shù)池上，掌握滴加精液的量，使蓋上玻片后，不產(chǎn)生氣泡，且精液充滿計(jì)數(shù)池而不溢出池外。切忌隨意加樣。

2.5 調(diào)節(jié)顯微鏡 調(diào)節(jié)燈光、光柵、載物臺(tái)使背景呈灰白色，且所有精子頭部均為黑色。

2.6 精子密度調(diào)整 CASA在計(jì)算精子活動(dòng)率時(shí)，精子只有產(chǎn)生一定的位移，系統(tǒng)才會(huì)認(rèn)為是活精子，對(duì)原地進(jìn)行尾部擺動(dòng)或不動(dòng)的精子則認(rèn)為是死精子。精子密度增加，A級(jí)精子在快速游動(dòng)的過(guò)程中，會(huì)碰動(dòng)一些死精子和各種非精子成分，使之產(chǎn)生一定位移，而系統(tǒng)則誤認(rèn)為所有產(chǎn)生位移的均為活動(dòng)精子，最終使精子活動(dòng)率增高。對(duì)低密度精子(大于10×106/ml，小于50×106/ml)及少白細(xì)胞、精原細(xì)胞和非細(xì)胞標(biāo)本時(shí)，其結(jié)果具有可重復(fù)性和可信性。對(duì)高密度精子(大于50×106/ml)及白細(xì)胞、精原細(xì)胞和非細(xì)胞顆粒較多的標(biāo)本，若每高倍鏡視野(400倍)觀察到50～100個(gè)精子時(shí)，取患者自身精漿按精液：精漿=1:1的稀釋比例稀釋，再計(jì)數(shù)；觀察到100～150個(gè)精子時(shí)，則按1:2稀釋；觀察到150～200個(gè)精子時(shí)，則按1:3稀釋；觀察到200～250個(gè)精子時(shí)，則按1:4稀釋[3]；稀釋后應(yīng)注意在稀釋比例處填寫(xiě)清楚，否則電腦還按原液計(jì)數(shù)。對(duì)精子密度過(guò)低(小于10×106/ml)的精液標(biāo)本，可采用2種方法：其一，選用低倍數(shù)物鏡擴(kuò)大視野，并加大視野數(shù)，增加統(tǒng)計(jì)量；其二，采用手工計(jì)算。

2.7 排除雜質(zhì) 合并生殖道感染者，精液中出現(xiàn)的白細(xì)胞應(yīng)與生殖細(xì)胞進(jìn)行區(qū)別。對(duì)非細(xì)胞顆粒，可適當(dāng)調(diào)節(jié)閾值剔除比精子大或小的雜質(zhì)，對(duì)無(wú)法剔除的雜質(zhì)，用手工剔除。

2.8 精子計(jì)數(shù) 用計(jì)算機(jī)對(duì)5～10個(gè)不同視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，檢測(cè)時(shí)不可在計(jì)數(shù)池的某個(gè)區(qū)域進(jìn)行，應(yīng)在整個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)選擇幾個(gè)有代表性的視野計(jì)數(shù)。分析患者本次精液的2～3個(gè)標(biāo)本，計(jì)數(shù)精子總數(shù)應(yīng)大于200個(gè)，保證精液質(zhì)量準(zhǔn)確、全面、綜合的報(bào)告。

2.9 無(wú)精癥的檢測(cè) 無(wú)精癥的報(bào)告要慎重，高倍鏡下未見(jiàn)精子，應(yīng)在低倍鏡下仔細(xì)檢查。對(duì)低倍鏡下亦未見(jiàn)精子者，用大于3000rpm離心15min，取沉渣經(jīng)徹底檢查仍未見(jiàn)精子者，才可判斷為無(wú)精子。對(duì)無(wú)精子的標(biāo)本，若pH小于7.0，可能存在射精管道的堵塞或雙側(cè)輸尿管先天性缺失，所以無(wú)精子的標(biāo)本應(yīng)仔細(xì)檢查pH值。因精液中可能含有血液等影響pH值的成分，建議無(wú)精子的精液離心后取上清液查pH值。

3 分析后的質(zhì)量控制

分析后質(zhì)量控制包括檢驗(yàn)報(bào)告的審核、簽發(fā)直至應(yīng)用于臨床，以及儀器的維護(hù)、保養(yǎng)。

3.1 報(bào)告的審核簽發(fā) 檢測(cè)結(jié)果必須經(jīng)反復(fù)檢查無(wú)誤后，才能發(fā)出。對(duì)結(jié)果異常的標(biāo)本，報(bào)告發(fā)出前應(yīng)結(jié)合臨床對(duì)各種數(shù)據(jù)進(jìn)行回訪，防止出現(xiàn)錯(cuò)誤而導(dǎo)致的異常。

3.2 儀器的保養(yǎng) 應(yīng)將儀器放在平穩(wěn)的地板上，無(wú)日光照射，要求室溫15～40℃保持儀器表面、顯微鏡的鏡頭干凈。還應(yīng)對(duì)電腦進(jìn)行維護(hù)，防止因電腦系統(tǒng)故障而出現(xiàn)誤差。建立專用儀器登記本，對(duì)每天儀器操作、出現(xiàn)故障及維修等情況逐一登記，全面了解儀器的工作狀態(tài)。

4 討論

計(jì)算機(jī)輔助精液分析具有較好的可靠性、重復(fù)性和穩(wěn)定性，與傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡目測(cè)估計(jì)相比，更具有快速方便、對(duì)比性強(qiáng)、便于交流等明顯優(yōu)點(diǎn)[4]，大有取代手工分析的趨勢(shì)。由于不同實(shí)驗(yàn)室、不同型號(hào)儀器、不同實(shí)驗(yàn)人員的操作過(guò)程，造成結(jié)果的準(zhǔn)確性也有很大差異，因此，為保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確，每個(gè)環(huán)節(jié)都應(yīng)規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化，進(jìn)行全面的質(zhì)量控制。

[1]鄧順美,文任乾,黃健初,等.分段射精法收集少精子癥患者精液質(zhì)量比較[J].中國(guó)計(jì)劃生育學(xué)雜志,2004,12(3):160-162.

[2]張瑋瑋.關(guān)于精液質(zhì)量的影響因素分析[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2009,15(27):13.

[3]吳志平,吳祥林.高密度精子標(biāo)本質(zhì)量分析方法探討[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2006,8(4):288-290.

[4]肖松山,范世福,李彥芳,等.計(jì)算機(jī)輔助精子運(yùn)動(dòng)分析系統(tǒng)的研究[J].天津大學(xué)學(xué)報(bào),2000,33(6):811-813.