豬附紅細胞體病診斷與防控*

拜廷陽,趙德明,吳志明,閆若潛,普志平

(1.中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院,北京 100094;2.河南省動物疫病預防控制中心,河南鄭州 450008;3.周口市動物疫病預防控制中心,河南周口 466000)

豬附紅細胞體病診斷與防控*

拜廷陽1,3,趙德明1,吳志明2,閆若潛2,普志平3

(1.中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院,北京 100094;2.河南省動物疫病預防控制中心,河南鄭州 450008;3.周口市動物疫病預防控制中心,河南周口 466000)

豬附紅細胞體病是由豬附紅細胞體引起的一種以黃疸和貧血為主要特征的人畜共患傳染病。該病流行范圍廣泛,對養(yǎng)豬業(yè)危害嚴重。根據(jù)其16 S RNA序列,現(xiàn)將豬附紅細胞體劃為支原體屬的單個新種。豬附紅細胞體主要通過接觸被病原污染的血液、胎盤感染、蚊蟲叮咬等途徑傳播。豬附紅細胞體對干燥敏感,對低溫的抵抗力較強;對青霉素類藥物不敏感,但對強力霉素敏感。通過引種時做好種豬的選育、在夏秋季節(jié)加強畜舍消滅蚊蠅工作、加強飼養(yǎng)管理以增強豬體抵抗力、采用敏感藥物進行早期治療等相關(guān)措施可對該病起到積極預防作用。論文主要對豬附紅細胞體的病原學、流行病學、臨床癥狀、病理變化、診斷、預防及治療等進行了綜述。

豬附紅細胞體;病原學;流行病學;診斷;防控

附紅細胞體病(Eperythrozoonsis,EH)是由附紅細胞體(Eperythrozoon)寄生于動物紅細胞表面、血漿以及骨髓中而引起的以貧血、黃疸、發(fā)熱等為主要特征的人畜共患病。1928年Schillig V首先在脾切除鼠中發(fā)現(xiàn)了附紅細胞體(E.coccoides)[1]。目前報道的感染或發(fā)病的動物有人、豬、馬、牛、兔、羊 、騾 、驢 、狐 、水貂 、駱駝 、犬 、雞 、鼠 、貓等 。 動物發(fā)生該病后,不僅生產(chǎn)性能下降,而且可引起死亡。豬附紅細胞體可引起免疫介導的溶血性貧血,在世界范圍內(nèi)所有日齡的豬均有感染[2],導致產(chǎn)品質(zhì)量和產(chǎn)量的降低,給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失[3]。

1 病原學

1.1 分類

附紅細胞體的分類國內(nèi)外尚有爭議,以往認為是一種原蟲,有人認為應列為支原體,曾歸屬于支原體目。在1984年版《伯杰細菌鑒定手冊》的分類中附紅細胞體被列為立克次體目(Rickettsiares)、無形體科(Anaplasmataceae)、血蟲體屬也稱附紅細胞體屬(Eperythrozoon)。近年來,隨著分子生物學技術(shù)的不斷應用,序列的分析為最終確定病原微生物的分類地位提供了最有利的依據(jù)。通過對附紅細胞體16 S rRNA基因系統(tǒng)進化分析發(fā)現(xiàn),附紅細胞體16SrRNA基因序列與血巴通氏體(Haemobartonellaspp.)有較近的親源關(guān)系,二者的16 S rRNA基因與支原體(Mycoplasma)的親源性大于與立克次體(Rrickettsiae)的親源性[4];Neimark H等將附紅細胞體和血巴爾通氏體劃歸為柔膜體綱支原體屬(Mycoplasma haemosuis)的同一種中,并正式將附紅細胞體重新分類作為支原體屬的單個新種(Mycoplasma comb.Nov)。在命名上,統(tǒng)一采用“支原體+種名”來替代以前的名稱,如豬附紅細胞體(Mycoplasa suis)。這一新的分類和命名方法在2003年以后國際上有關(guān)附紅細胞體的研究報道中已廣泛使用[5]。但有學者建議在搞清附紅細胞體的病原遺傳學及分子生物學特征前,仍然沿用原來的附紅細胞體分類系統(tǒng)[6]。

1.2 分子病原學

迄今為止,大量附紅細胞體的16 S rRNA基因組片段序列已經(jīng)上傳到公共數(shù)據(jù)庫中。瑞士蘇黎世大學在GenBank上發(fā)表了豬嗜血支原體1.8 kb DNA序列,該序列存在11個ORF[7]。其還發(fā)表了另外2個基因序列(MSG1和HSPA1)[8]。通過脈沖場凝膠電泳和限制性酶切片段測定了豬附紅細胞體基因組全長約為745 kb,限制性酶切片段加起來長度范圍為730 kb～770 kb,通過Southern雜交表明,16 S rRNA基因座落在120 kbMluⅠ,128 kbNruⅠ,25 kbSacⅡ和217 kbSalⅠ片段上。

1.3 形態(tài)

附紅細胞體形態(tài)具有多樣性,豬附紅細胞體的直徑為 0.3 μ m ～ 0.8 μ m,最大達 2.5 μ m,有一層膜包被,在胞漿膜下有直徑10 nm的微管,有核糖體顆粒,無明顯的細胞及核的結(jié)構(gòu),單獨或成鏈狀附著于紅細胞體表面,或圍繞在整個紅細胞上,與紅細胞結(jié)合緊密,且主要寄生于成熟紅細胞膜上[9]。

1.4 致病性和染色特性

附紅細胞體可使不同品種、年齡的畜禽和人感染,而且感染率也相當高。國內(nèi)很多學者分別利用附紅細胞體感染小鼠、豚鼠、家兔等動物模型獲得成功[10]。在我國部分地區(qū),豬的感染率為49%左右。但附紅細胞體進入機體后多呈潛伏狀態(tài),發(fā)病率較低,只有當機體處于應激狀態(tài)(如分娩、疲勞和長途運輸?shù)?或摘除脾臟時才可能引起發(fā)病,所以多數(shù)學者認為附紅細胞體的毒性低、致病性弱,很可能是一種條件致病微生物。附紅細胞體對于苯胺色素易于著色,革蘭染色為陰性,用姬姆薩染色呈紫紅色,用瑞氏染色呈藍紫色,丫啶橙染色呈現(xiàn)兩種不同的熒光[11]。

1.5 運動性

附紅細胞體是寄生于紅細胞表面或游離于血漿的病原體,附著于紅細胞表面的附紅細胞體則較難看出其運動性,而游離于血漿中的附紅細胞體可見搖擺扭轉(zhuǎn)翻滾等運動[12-13]。附紅細胞體的運動不受紅細胞溶解的影響,鏡下將1 mL/L鹽酸加入鮮血滴中使紅細胞破壞,可見其活動力仍不減弱,但當加入1 g/L碘酒,可使其停止運動,這一特性具有鑒別作用[14]。

1.6 抵抗力

豬附紅細胞體對干燥敏感,對青霉素類不敏感,而對強力霉素敏感,對低溫的抵抗力較強。在冰凍凝固的血液中可存活31 d,在加150 mL/L甘油的血液中于-79℃保存80 d,能保持感染力[15]。

1.7 培養(yǎng)特性

Nonaka N等[16]首次進行了豬附紅細胞體的體外培養(yǎng)試驗,但紅細胞最高感染率只有15.8%,且維持時間很短。吳志明等[17]用RPMI-1640和胎牛血清按比例混合并添加肌苷作為體外培養(yǎng)豬附紅細胞體的基礎培養(yǎng)基,以無附紅細胞體感染的兔紅細胞泥作為培養(yǎng)寄生載體,置于體積分數(shù)為5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱進行豬附紅細胞體的體外培養(yǎng),每24 h換培養(yǎng)液1次,每36 h傳代 1次,可連續(xù)傳代40代次以上,并能保持最高感染率90%以上;感染豬附紅細胞體的豬紅細胞在4℃條件下可保持30 d以上而不發(fā)生溶血;兔紅細胞接種新鮮制備的自然感染豬附紅細胞體的豬紅細胞,36 h后感染率可達91.6%,并一直維持到96 h,之后有少量細胞開始出現(xiàn)溶血;接種4℃條件下保存30 d以內(nèi)自然感染豬附紅細胞體的豬紅細胞與新鮮制備的自然感染豬附紅細胞體的豬紅細胞對兔紅細胞的感染率影響差異不顯著。這些培養(yǎng)方法的建立和完善,對于附紅細胞體的生物學特性研究、有效藥物的篩選、診斷抗原的制備和有效疫苗的研制將會提供有效的途徑。

2 流行病學

2.1 傳染源

洪鶴松等[18]報道牛的感染率為80%,豬的感染率為 90%。張守發(fā)等[19]報道犬的感染率為91.25%。因此,相當多的動物都可能是潛在的傳染源。

2.2 傳播途徑

傳播途徑至今還不明確。近期dos Santos A P等[20]證實了一艾滋病人感染嗜血支原體,且與該病人飼養(yǎng)的貓體內(nèi)分離的嗜血支原體同源,推斷貓參與了該病的跨種傳播。豬附紅細胞體病的傳播可通過攝食血液和含血的物質(zhì),如舔食斷尾的傷口,互相斗毆或喝被血污染的尿而進行直接傳播。使用被附紅細胞體污染的注射器、針頭進行注射時可發(fā)生感染,用被污染的手術(shù)器具、閹割工具、斷尾或打耳號器械、剪毛工具等器具時也可造成該病傳播,吸血節(jié)肢動物是該病原體的主要傳播媒介,嚙齒類動物在附紅細胞體的傳播過程中發(fā)揮重要作用[21]。

2.3 發(fā)病條件

附紅細胞體感染動物后潛伏期短,繁殖快,動物一旦受到附紅細胞體的侵襲后會導致急性感染[22]。尤其是受到長途運輸、饑餓、疲勞、驚恐、切脾等應激刺激時可導致宿主的抵抗力下降,更易發(fā)病而出現(xiàn)明顯癥狀。

3 臨床癥狀

豬附紅細胞體病一般情況下發(fā)生在哺乳豬、懷孕母豬及受到高度應激的肥育豬。病豬發(fā)病突然,體溫升高到39.5℃～42.0℃,精神委頓,飲食減退,臥地不起,病豬表現(xiàn)貧血、消瘦;后期病豬耳朵、頸下、胸前、腹下、四肢內(nèi)側(cè)等部位皮膚發(fā)紺,指壓不褪色,甚至整個豬皮膚呈紅色,成為“紅皮豬”。新生仔豬可因過度貧血而死亡;斷奶仔豬不能發(fā)揮很好的生長性能;育肥豬生長緩慢,出欄延遲;母豬流產(chǎn)、死胎、不發(fā)情或發(fā)情后屢配不孕?；疾∮守i初期便秘而后腹瀉,有的尿呈醬油色,呼吸急促,心音亢進,出現(xiàn)寒顫,抽搐;母豬可攜帶附紅細胞體,出現(xiàn)繁殖障礙。

4 病理變化

病死豬四肢末端、耳尖、鼻盤及腹下皮膚出現(xiàn)紫紅色斑塊。剖檢變化有血液稀薄,呈淡紅色,不易凝固;皮下淤血、出血,脂肪黃染,肌肉蒼白;有胸水、腹水;胸、腹、心冠溝脂肪黃染;心肌松弛,色熟肉樣;肺臟腫脹,小葉性肺炎;肝臟腫大、出血、黃染,呈土黃色質(zhì)地變脆,膽囊腫脹,充滿膽汁;脾臟腫大,呈暗黑色;腎臟腫大,腎盂水腫;膀胱黏膜黃染并有少量出血點;淋巴結(jié)腫大,切面外翻。

病理組織學變化有肝實質(zhì)灶狀壞死,有單核細胞和淋巴細胞浸潤,有含鐵血紅素沉著;脾小體中央動脈擴張充血;腎曲小管變性壞死;心肌變性;肺間質(zhì)水腫;腸黏膜下層水腫充血、炎性細胞浸潤[23]。

5 診斷

根據(jù)臨床癥狀,如貧血、黃疸、發(fā)熱以及血常規(guī)檢查紅細胞減少,白細胞增多等特征可作出初步診斷,確診需結(jié)合實驗室方法。

5.1 直接鏡檢

患畜靜脈采血,滴1滴于載玻片上,加等量的生理鹽水稀釋,在400倍顯微鏡下觀察,可見蟲體呈球形、逗點形、桿形,紅細胞呈菠蘿狀、星狀等不規(guī)則形狀。健康動物或人的紅細胞形態(tài)規(guī)則。但這種方法的局限性在于低特異性和敏感性[24]。

5.2 染色鏡檢

無菌自耳靜脈或前腔靜脈采血涂片,采用姬姆薩染色鏡檢,附紅細胞體感染紅細胞呈波浪狀,星芒狀,鋸齒狀改變,且周圍有染成紫紅色的小體;健康紅細胞形態(tài)規(guī)則,邊緣光滑,染色均勻。瑞氏染色后,在同一視野中可見附紅細胞體呈紫紅色、褐黃色、深褐色,也可見到強折光性發(fā)亮的圓形小體;吖啶橙染色檢查的檢出率最高,可見附紅細胞體呈淺至深橘黃色[25]。

5.3 PCR診斷

PCR方法對附紅細胞體的檢測具有敏感性高、特異性強的特點,可以用于附紅細胞體急性感染和隱性感染的檢測。吳志明等建立了豬附紅細胞體的PCR診斷方法,閆若潛等[26]建立了豬附紅細胞體熒光定量PCR檢測方法,這兩種方法非常快速、簡便,適合于大規(guī)模群體檢測。

6 預防

主要通過3個方面預防:①減少傳染源。選育無豬附紅細胞體病攜帶的種豬,要定期驅(qū)除豬體的內(nèi)、外寄生蟲;②切斷傳播途徑。加強滅鼠、滅蚊蠅工作,減少傳播本病的機會;防疫操作及手術(shù)時器械要進行嚴格的滅菌消毒,減少該病的血源性傳播;③保護易感動物。改善豬群的飼養(yǎng)管理條件,增強機體的抵抗力,減少不利因素的影響,對仔豬注意通風保溫。

7 治療

對豬附紅細胞體的治療,國內(nèi)外學者均有報道,療效不一。目前較常用的藥物有貝尼爾、土霉素、黃連素、914A、鹽酸咪唑等,上述藥物能控制病情,但不能徹底殺滅附紅細胞體。對附紅細胞體病的治療應本著早發(fā)現(xiàn)、早確診、早治療、早用特效藥物的原則,不能失去最佳治療時機,否則,隨著時間的拖延,機體臟器衰竭,常引起繼發(fā)感染,治療難度加大,造成更大的損失。貝尼爾治療附紅細胞體病效果雖好,但毒副作用較大,因此應用時要注意不能超量。此外,患附紅細胞體病的人、畜常伴有并發(fā)和繼發(fā)感染,因此臨床上需要酌情給予抗菌消炎、強心輸液等對癥和支持治療。

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Diagnosis and control ofEperythrozoonosis Suis

BAI Ting-yang1,3,ZHAO De-ming1,WU Zhi-ming2,YAN Ruo-qian2,PU Zhi-ping3

(1.College of Veterinary Medicine,China Agricultural University,Beijing,100094,China;2.Henan Centre for Animal Diseases Control&Prevention,Zhengzhou,Henan,450008,China;3.Zhoukou City Centre for Animal Diseases Control&Prevention,Zhoukou,Henan,466000,China)

Eperythrozoonosisis a kind of zoonotic disease caused byEperythrozoonosis suis(Mycoplasa suis)with a febrile acute anaemia and jaundice as a main feature,and is frequently-occurring and has the most serious harm to livestock in recent years.Based on the comparative sequence analysis of the 16 S rRNA gene,Eperythrozoonosis suisis now allocated to the genusMycoplasmaand reclassified as a new speciesMycoplasma suiscomb.nov.Mycoplasma suisis infected by the ways of contacting with the contaminated blood,placental infection,and mosquito bites,etc.Mycoplasma suisis sensitive to dryness and doxycycline,but more resistant to low temperature and penicillin.Taking the measures such as selection the breeding pigs free ofMycoplasma suisinfection,eliminating mosquitoes by using mosquitocide in animal house in the summer and autumn,enhancing feeding and management to enhance the resistance of pigs,early treatment with sensitive drugs and other related measures can play a positive prevention of the disease effect.In this paper,the etiology,epidemiology,clinical symptoms,pathological lesions,diagnosis,prevention and cure ofeperythrozoonosis suiswere reviewed.

Eperythrozoon suis;etiology;epidemiology;diagnosis;control

S852.7

B

1007-5038(2010)08-0106-04

2010-06-07

河南省自然科學基金(0511031700)

拜廷陽(1968-),男,河南扶溝人,博士研究生,主要從事預防獸醫(yī)學研究。