東北地區(qū)捕食線蟲(chóng)真菌調(diào)查1)

王偉 劉雪峰 王天亮 劉雪英

(東北林業(yè)大學(xué)，哈爾濱，150040)

捕食線蟲(chóng)真菌是植物病原線蟲(chóng)的一類捕食性天敵，以營(yíng)養(yǎng)菌絲特化形成的粘性網(wǎng)、粘性球、非收縮環(huán)、收縮環(huán)、粘性菌絲、粘性分枝、冠囊體等捕食器官捕捉線蟲(chóng)。捕食線蟲(chóng)真菌在動(dòng)植物線蟲(chóng)及食用菌線蟲(chóng)的生物防治中起著非常重要的作用，并取得了很好的成績(jī)［1］。捕食線蟲(chóng)真菌的生物防治前景被許多線蟲(chóng)防治研究者所認(rèn)可，也越來(lái)越多地被各個(gè)國(guó)家和地區(qū)所重視。我國(guó)東北地區(qū)在自然景觀上表現(xiàn)出冷濕的特征，有著大面積針葉林、針闊葉混交林和草甸草原，肥沃的黑色土壤，廣泛分布的凍土和沼澤等，地理位置和植被獨(dú)特。目前，對(duì)該地區(qū)捕食線蟲(chóng)真菌的報(bào)道比較少［2－4］。為了更好地保護(hù)東北地區(qū)的自然植被，筆者對(duì)東北地區(qū)的捕食線蟲(chóng)真菌資源進(jìn)行了調(diào)查，為以后生物防治線蟲(chóng)提供依據(jù)和參考。

1 材料和方法

1.1 樣品采集

從遼寧省千山，吉林省長(zhǎng)白山、吉林市、松原，黑龍江省漠河、圖強(qiáng)、牡丹江、肇東等地采集土壤、朽木和立木樣品827份。其中:土壤樣品599份，立木和朽木樣品228份。

1.2 試驗(yàn)材料

培養(yǎng)基弱玉米培養(yǎng)基(CMA):玉米粉20 g，瓊脂18 g，水1 L。培養(yǎng)線蟲(chóng)培養(yǎng)基:燕麥片20 g，水40 mL。

誘餌線蟲(chóng)誘導(dǎo)捕食器官的誘餌線蟲(chóng)為Panagrellus redivirus。

制備線蟲(chóng)懸液用貝曼漏斗法洗出培養(yǎng)基中的線蟲(chóng)，適當(dāng)稀釋。作為誘導(dǎo)線蟲(chóng)。

分離培養(yǎng)①土樣采用常規(guī)撒土法培養(yǎng)［5］。②朽木揉碎后用鑷子隨即取出大小適中的10塊，整齊地排列在培養(yǎng)皿中，每個(gè)樣品5個(gè)重復(fù)。③立木(枯死樟子松和枯死云杉)將每棵樹(shù)隔一段鋸一個(gè)圓盤，每個(gè)圓盤分為皮、心材和邊材3部分，每一部分作為一個(gè)樣用剪刀剪成1.5 cm×0.5 cm×0.5 cm的長(zhǎng)方體，整齊排列在培養(yǎng)皿中。

將誘餌線蟲(chóng)加到培養(yǎng)皿中，每皿大約5 000條。靜止兩天后倒置于恒溫箱中25℃培養(yǎng)2～3周。

純化在解剖鏡下對(duì)每個(gè)平板全面鏡檢，用玻璃針挑取捕食線蟲(chóng)真菌單個(gè)分生孢子，接種到CMA平板上，倒置于恒溫箱中培養(yǎng)1～4周，獲得純培養(yǎng)。

保存鑒定將一部分純培養(yǎng)轉(zhuǎn)入CMA試管斜面。25℃培養(yǎng)2周，斜面長(zhǎng)好后置于冰箱中4℃保存。

小室培養(yǎng)法［6］誘導(dǎo)捕食器。

Scholler［7］依據(jù)18S rDNA、5.8S rDNA和ITS區(qū)間的序列分析結(jié)果提出了捕食線蟲(chóng)真菌新的分類系統(tǒng)，認(rèn)為捕食器類型比其它形態(tài)特征更能恰當(dāng)?shù)胤从称渥匀坏难莼到y(tǒng)。Yan Li［8］根據(jù)28S rDNA、5.8S rDNA和β－tubu－lin基因序列分析結(jié)果重新修訂了捕食線蟲(chóng)真菌的分類系統(tǒng)，補(bǔ)充了Scholler分類系統(tǒng)的不足。筆者按照文獻(xiàn)［8］的分子系統(tǒng)學(xué)分類方法對(duì)研究菌株重新劃分屬。

1.3 數(shù)據(jù)處理

檢出率=該菌出現(xiàn)的樣品數(shù)/總樣品數(shù)×100%;

總檢出率=各菌檢出率之和。

計(jì)算出現(xiàn)頻率，統(tǒng)計(jì)物種豐富度。

采用Srensen相似性指數(shù)(S')評(píng)價(jià)不同基質(zhì)的群落相似性。采用Shannon－Weiner指數(shù)(H')和Simpson指數(shù)(D)評(píng)價(jià)捕食線蟲(chóng)真菌的多樣性。計(jì)算公式分別如下:

式中:S為采樣點(diǎn)的物種總數(shù);a、b分別為基質(zhì)A、B的物種數(shù);c為2個(gè)基質(zhì)相同的物種數(shù);Pi為第i種所占百分?jǐn)?shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 東北地區(qū)捕食線蟲(chóng)真菌種類及分布特點(diǎn)

從827份樣品中共分離出捕食線蟲(chóng)真菌3屬15種，黑龍江省3屬13種8個(gè)新記錄種，優(yōu)勢(shì)種為Arthrobotrys oligospora(15.96%)、A.cladodes(5.19%)、A.superba(4.43%)、A.dendroides(4.23%);吉林省3屬9種8個(gè)新記錄種優(yōu)勢(shì)種是A.oligospora(7.58%);遼寧省3屬5種4個(gè)新記錄種，優(yōu)勢(shì)種為Drechslerella.dactyloides(31.25%)。各個(gè)真菌的檢出率及在各立地條件下的分布情況見(jiàn)表1。

各省新記錄種

A.superba

鑒定菌株:黑龍江mwl18，mwl3，mwl19，mwl3，mbh10，2p52，5b52，1p11，1b11，5b73，5x51，5p22，4zp0，4zx5，z62，z47，z50，z43，z46，z14，z8，m35，m12。

A.cladodes

鑒定菌株:吉林jmg60。

A.musiformis

鑒定菌株:吉林yj27;遼寧lqs4，lqs76，lqs6，lqs67，lqs70。

A.dendroides

鑒定菌株:黑龍江5b7，1b4，5p2，5p4，5p2，5x3，5b1，5p6，5b2，5p6，1x1，5p8，5x6，3p12，1p3，1x2，2zx2，2zp0，3zb5，4zp2，2zb4，1zx6。

A.indicum

鑒定菌株:黑龍江z53。

A.cystosporium

鑒定菌株:黑龍江z78，z23，z76，sr6，sr3，sr4;吉林yj25，yj35，yj27，yj31。

A.cionopagum

鑒定菌株:吉林yj22，yj21，jmy13，jl23，jzk3，jzk15;遼寧lqs58，lqs24，lqs4，lqs38。

A.gephyrophagum

鑒定菌株:吉林jz2，jz23。

Drechslerella.dactyloides

鑒定菌株:黑龍江4mh13，4mh53，m7，mr5，mr8;吉林jz2 jmg10 jym22 jym2 jym3 jz2;遼寧lqs32，lqs19，lqs39，lqs22，lqs53，lqs56，lqs13，lqs29，lqs67，lqs72，lqs38，lqs8，lqs12，lqs11，lqs49，lqs37，lqs33，lqs70，lqs24，lqs28，lqs31，lqs57，lqs75，lqs32，lqs31。

Dr.stenobrochum

鑒定菌株:黑龍江mm9。

Dactylellina.ellipsosporum

鑒定菌株:黑龍江4mh1，4mh5，z56，cf15，cf12，cf7;吉林jzl3，jl2，jym3，jl17，jmg5，jz13，jz9，jmg7，jmg1，jz11，jzy21;遼寧lqs57，lqs75，lqs7，lqs33，lqs76，lqs46，lqs43，lqs18，lqs31，lqs28。

Da.leptospora

鑒定菌株:黑龍江z60。

表1 捕食線蟲(chóng)真菌分布情況

2.2 捕食線蟲(chóng)真菌在木頭和土壤中的分布比較

試驗(yàn)采集了木頭標(biāo)本228份，土壤標(biāo)本599份。木頭上共檢出捕食線蟲(chóng)真菌2屬6種，優(yōu)勢(shì)種為A.oligospora(19.30%)、A.cladodes(10.53%)和A.dendroides(9.65%);土壤中檢出捕食線蟲(chóng)真菌3屬13種，優(yōu)勢(shì)種為A.oligospora(10.85%)、Dr.dactyloides(5.51%)和Da.ellipsosporum(4.45%)。從表2中可以看出:木頭中捕食線蟲(chóng)真菌的檢出率(47.99%)高于土壤中捕食線蟲(chóng)真菌(29.09%)。土壤和木頭中捕食線蟲(chóng)真菌的多樣性指數(shù)(H'、D)、相似性指數(shù)(S')及其它比較見(jiàn)表2。

2.3 鹽堿地中捕食線蟲(chóng)真菌的分布

從吉林省松原采集鹽堿地土壤樣品，共分離出4種捕食線蟲(chóng)真菌，優(yōu)勢(shì)種為A.oligospora(15%)和A.cystosporium(10%)。其中在生長(zhǎng)堿草的鹽堿地捕食線蟲(chóng)真菌的檢出率最高，種類也最多，而生長(zhǎng)堿蓬的鹽堿地中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)捕食線蟲(chóng)真菌。詳情見(jiàn)表3。

表2 木生、土生捕食線蟲(chóng)真菌檢出結(jié)果

表3 捕食線蟲(chóng)真菌在鹽堿地中的分布情況%

3 討論

3.1 東北地區(qū)捕食線蟲(chóng)真菌的分布

資料顯示［9］，捕食線蟲(chóng)真菌的分布并沒(méi)有嚴(yán)格的地理氣候限制。東北地區(qū)氣候雖冷濕，但捕食線蟲(chóng)分布也很豐富，如A.oligospora(13.18%)在本地區(qū)的檢出率最高，為本地區(qū)的優(yōu)勢(shì)種。

從東北地區(qū)各地采樣分離捕食線蟲(chóng)真菌，其中從朽木上分離出來(lái)的Dr.dactyloides、Da.ellipsosporum的分生孢子大小與文獻(xiàn)記載［10］都有一定的出入，但從孢子形態(tài)、捕食器特征等方面來(lái)看，沒(méi)有差別，所以定為相應(yīng)的種。這種變化可能是由于其生活的生境變化引起的一種適應(yīng)性改變。

3.2 木生和土生捕食線蟲(chóng)真菌的相互關(guān)系

Gray［11－12］記載，捕食線蟲(chóng)真菌能在多種基質(zhì)上分離得到。在東北地區(qū)，木生捕食線蟲(chóng)真菌的檢出率(47.99%)要高出土生的捕食線蟲(chóng)真菌(29.09%);A.dendroides只在樹(shù)上分離得到，并且具有很高的分離率(9.65%)。4種共有種中，其中3種即:Dr.dactyloides、A.oligospora、A.superba在兩種基質(zhì)出現(xiàn)頻率上也有一定的相關(guān)性。這說(shuō)明土生和木生捕食線蟲(chóng)真菌有著潛在的聯(lián)系，木生捕食線蟲(chóng)真菌有可能是從土壤中遷移而來(lái)，但由于木、土基質(zhì)上不同的生活環(huán)境也形成了它們獨(dú)有的種類。

3.3 鹽堿土中捕食線蟲(chóng)真菌的分布

土壤微生物的數(shù)量隨著土壤鹽堿度的增大而減少［13］，捕食線蟲(chóng)真菌隨著鹽漬化程度的加深也呈下降趨勢(shì)。農(nóng)田中捕食線蟲(chóng)真菌的種類和檢出率都比較低，可能是人為干擾的原因。

在本次試驗(yàn)過(guò)程中，由于污染原因?qū)е乱恍┚晡茨荑b定到種，對(duì)吉林和遼寧地區(qū)采樣也相對(duì)較少。

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