解脲脲原體感染動(dòng)物模型的研究進(jìn)展

陳傳杰，朱國(guó)興

廣州中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院皮膚性病科，廣州510630

解脲脲原體(Ureaplasmaurealyticum，Uu)是女性泌尿生殖道黏膜中常見(jiàn)的微生物，可以是一種致病菌，也可以是一種共生菌，其致病性目前仍存在爭(zhēng)議[1,2]。此外，Uu尚可在妊娠婦女和新生兒中分別引起絨毛膜羊膜炎和新生兒肺部疾病[3]。Uu感染動(dòng)物模型的建立對(duì)研究Uu致病能力與機(jī)制，Uu血清型或基因型與疾病的關(guān)系，Uu感染與免疫以及該病原體所致尿道炎的治療、藥物療效及毒性觀察，疫苗研究等方面有重要意義。因此，既能真實(shí)模擬體內(nèi)情況又易于建立的動(dòng)物模型是非常有價(jià)值的。本文就國(guó)內(nèi)、外Uu致病性及其感染動(dòng)物模型研究的進(jìn)展作一綜述。

1 Uu下生殖道感染動(dòng)物模型評(píng)價(jià)

Uu感染下生殖道后，臨床可表現(xiàn)為尿道炎或?qū)m頸炎，目前認(rèn)為與性接觸密切相關(guān)[4]，但對(duì)下生殖道的確切致病性仍有很大爭(zhēng)議，臨床研究結(jié)果不盡相同，甚至相距甚遠(yuǎn)。如Deguchi等[5]研究了572例男性尿道炎患者及141例男性健康對(duì)照者，Uu培養(yǎng)陽(yáng)性率18%，與對(duì)照組的陽(yáng)性率(7.8%)有顯著差異；同時(shí)認(rèn)為Uu生物2群與男性尿道炎的發(fā)生密切相關(guān)，而生物1群則以寄居形式存在于泌尿生殖道。Baka等[1]對(duì)153例有明顯泌尿系統(tǒng)癥狀的女性患者進(jìn)行臨床分析，結(jié)果81例患者(52.9%)的尿道、陰道或?qū)m頸中至少有1個(gè)部位檢測(cè)出Uu，認(rèn)為女性慢性泌尿系統(tǒng)癥狀與Uu存在密切聯(lián)系。但Daxboeck等[2]研究了30例有泌尿系統(tǒng)感染癥狀的患者，發(fā)現(xiàn)僅有6例(20%)Uu陽(yáng)性，提出泌尿系統(tǒng)支原體定植與泌尿系統(tǒng)癥狀并沒(méi)有相關(guān)性。從以上及其他類(lèi)似研究可看出，多數(shù)關(guān)于Uu致病性的研究來(lái)自臨床，病例來(lái)源、對(duì)照選擇、觀察指標(biāo)都有相當(dāng)?shù)牟淮_定性，導(dǎo)致研究結(jié)果各異，甚至完全相反。進(jìn)一步的研究需要有一個(gè)客觀、有效的評(píng)價(jià)Uu致病性的方法，以排除臨床干擾因素的影響。因此，Uu感染動(dòng)物模型的優(yōu)越性得以顯現(xiàn)。

20世紀(jì)80年代，F(xiàn)urr等[6]成功建立了一個(gè)比較持久的Uu感染動(dòng)物模型。選用8～10周齡的雌性小鼠(TO、CBA和BALB/c)，接種Uu前皮下注射雌二醇0.5 mg(0.1 ml)，隔周1次。第2次注射后將小鼠麻醉，用吸液管取50 μl Uu標(biāo)準(zhǔn)株8型(Uu8)菌液(CCU=5×106)注入陰道。結(jié)果顯示，Uu能定植于接受雌二醇處理的小鼠生殖道，而不能在未經(jīng)雌二醇處理的小鼠生殖道定植。Uu成功定植于小鼠陰道內(nèi)21～163 d后被清除。部分小鼠Uu可上行定植于子宮角、卵巢和脾臟，但在咽喉、腎臟和肝臟未發(fā)現(xiàn)Uu定植。接受雌二醇處理的小鼠陰道分泌物中多形核白細(xì)胞(polymorphonuclear leukocyte，PMNL)數(shù)量很少或沒(méi)有，而未接受雌二醇處理的小鼠在周期的不同階段均可觀察到不等數(shù)量的PMNL。Uu清除與陰道分泌物PMNL重新出現(xiàn)有關(guān)。Uu感染BALB/c小鼠后，對(duì)Uu再次感染無(wú)保護(hù)作用。Uu定植失敗不能歸因于完全抵抗，部分初次定植失敗的小鼠第2次接種仍能成功定植。實(shí)驗(yàn)中小鼠陰道或其他部位的炎癥反應(yīng)不明顯，但不排除這是由于接受雌二醇處理或Uu8型致病性較弱所導(dǎo)致的，作者認(rèn)為雌二醇處理可能抑制了陰道局部免疫。研究發(fā)現(xiàn)，在TO、CBA、BALB/c小鼠中，BALB/c最易感染Uu8。該課題組于2002年建立了Uu5、Uu8、Uu10不同血清型的雌性小鼠下生殖道感染模型，認(rèn)為Uu8型定植能力更強(qiáng)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)Uu在體外多次傳代對(duì)其致病性并無(wú)明顯影響[7]。該課題組雖進(jìn)一步明確了Uu下生殖道感染模型的建立方式，并對(duì)3種血清型的致病性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，但在確定3個(gè)血清型菌液濃度時(shí)并不一致，這可能影響評(píng)價(jià)結(jié)果。有研究者建立了多個(gè)支原體感染動(dòng)物模型，發(fā)現(xiàn)孕酮可增強(qiáng)Uu感染生殖道的效果，且雌二醇的預(yù)處理必不可少，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物首選BALB/c小鼠。

2 Uu呼吸道感染動(dòng)物模型評(píng)價(jià)

研究發(fā)現(xiàn)，Uu定植可使新生兒出現(xiàn)肺炎、支氣管肺發(fā)育不良(bronchopulmonary dysplasia，BPD)、慢性肺部疾病，甚至引起死亡。雖然肺炎支原體在臨床較為常見(jiàn)，但Uu定植新生兒引發(fā)BPD的概率更高[8]。也有學(xué)者持不同觀點(diǎn)，認(rèn)為Uu定植新生兒與肺部慢性疾病無(wú)明顯關(guān)聯(lián)[9]。

早期Rudd等[10]通過(guò)直接向C3H/HeN和C57BL/6N小鼠鼻腔注射含Uu(血清型1和10)的菌液，建立了新生小鼠Uu肺炎模型，為以后的新生兒肺部Uu感染動(dòng)物模型提供了指導(dǎo)。2002年Viscardi等[11]成功地將來(lái)源于BPD早產(chǎn)兒呼吸道的0.1 ml Uu(生物2群，CCU=1×106)定植于C3H/HeN小鼠，而同樣菌株在CD-1小鼠無(wú)法定植，使用標(biāo)準(zhǔn)株Uu3型也未能成功建立模型。該模型組織病理學(xué)方面的表現(xiàn)為呼吸道纖毛上皮脫失，與新生兒Uu肺炎一致。通過(guò)免疫組化方法進(jìn)行準(zhǔn)確定位，發(fā)現(xiàn)Uu定植于肺泡和終末支氣管。實(shí)驗(yàn)早期，小鼠肺部肺泡支氣管和間質(zhì)的中性粒細(xì)胞明顯增多，繼而巨噬細(xì)胞增多；而在慢性階段(14～28 d)，中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在支氣管灌洗液中再次增多。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，Uu感染小鼠的支氣管肺泡灌洗液中腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor，GM-CSF)、白細(xì)胞介素10(interleukin 10，IL-10)等有升高趨勢(shì)。研究認(rèn)為，Uu在感染早期對(duì)支氣管灌洗液中的細(xì)胞因子無(wú)明顯刺激作用，而在慢性階段可引起TNF、中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞增多。Uu在新生小鼠和人類(lèi)感染中可致輕微的急性炎癥，慢性氣道炎癥也可得以發(fā)展。主要是由于中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞聚集，可能改變以后吸入性致病原或炎癥刺激所致反應(yīng)。該模型的建立強(qiáng)調(diào)深度麻醉可避免吞咽導(dǎo)致的菌液不能順利進(jìn)入呼吸道等情況。2003年Yoder等[12]向懷孕狒狒羊膜腔內(nèi)注射Uu菌液，建立了新生狒狒Uu致BPD動(dòng)物模型。生產(chǎn)過(guò)程中感染Uu的狒狒羊膜腔液中的白細(xì)胞、IL-6、IL-8水平明顯升高，組織學(xué)發(fā)現(xiàn)新生狒狒透明膜發(fā)生炎癥反應(yīng)。Uu陽(yáng)性組的新生狒狒肺部灌洗液中IL-6、粒細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞水平在不同時(shí)間段均明顯高于對(duì)照組。該研究發(fā)現(xiàn)，近50%早產(chǎn)狒狒在出生后1周內(nèi)可自行清除呼吸系統(tǒng)的Uu，而不能清除Uu的早產(chǎn)狒狒則被視為早期肺功能紊亂和損傷的高危對(duì)象。2003年Benstein等[13]再次通過(guò)鼻內(nèi)接種Uu菌液建立新生小鼠肺部感染模型，原位雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)感染Uu的小鼠肺組織中Uu定植于細(xì)支氣管和肺泡上皮細(xì)胞及巨噬細(xì)胞，而Uu在巨噬細(xì)胞的定植是Uu導(dǎo)致肺部疾病的證據(jù)。

3 結(jié)語(yǔ)

目前關(guān)于Uu的致病性尚不完全清楚，仍存在異議，因此還需進(jìn)一步對(duì)Uu致病性、相關(guān)疾病及治療等方面研究。Uu感染動(dòng)物模型的成功建立，為其深入研究提供了重復(fù)性強(qiáng)、可控性好的方法。該法簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)，可發(fā)揮重要作用。

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