河南賁門癌高發(fā)區(qū)賁門腺癌組織化學(xué)染色分類與癌旁腸上皮化生的關(guān)系*

高社干,王立東,馮笑山,馬寶根,孔國強(qiáng),范宗民,高珊珊

1)鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)實驗中心癌癥研究室,河南省食管癌重點開放實驗室鄭州 450052 2)河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科洛陽 471003 3)河南省人民醫(yī)院腫瘤科 鄭州 450003

△男,1968年生,博士,副主任醫(yī)師,研究方向:食管癌/賁門癌的癌變機(jī)制及臨床研究

有報道[1-2]認(rèn)為賁門腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)與腸上皮化生(intestinal metap lasia,IM)具有相關(guān)性,然而Sharma等[3]認(rèn)為GCA與IM的關(guān)系仍然不明確。河南林州市GCA高發(fā)區(qū)人群賁門黏膜 IM檢出率明顯高于低發(fā)區(qū)人群[4],提示IM可能是賁門癌變早期的重要組織學(xué)特征,可能是GCA演變過程中不可缺少的環(huán)節(jié)。作者通過分析河南賁門癌高發(fā)區(qū)GCA組織中的黏蛋白類型以及各類型GCA癌旁IM的檢出率,探討GCA的組織化學(xué)染色分類與IM的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本 70例GCA手術(shù)標(biāo)本來自2001年河南省GCA高發(fā)區(qū)林州市人民醫(yī)院、林州市中心醫(yī)院和林州市姚村食管癌醫(yī)院GCA患者的手術(shù)切除組織,患者術(shù)前均未接受放療和化療,其中,男 59例,女11例,年齡 46～79歲,中位年齡 63歲。標(biāo)本經(jīng)體積分?jǐn)?shù) 95%乙醇固定,常規(guī)脫水,每例手術(shù)標(biāo)本均在癌組織及癌旁 1～5 cm處連續(xù)取材 10～15塊,石蠟包埋后,連續(xù)切片 5～8張,每張切片厚 5μm。1張組織切片行HE染色,用于核實組織病理學(xué)診斷;其他用于組織化學(xué)染色。

1.2 主要試劑 愛顯藍(lán)8GX,Fluka公司產(chǎn)品;高錳酸鉀,上海華彭實業(yè)有限公司產(chǎn)品;中性紅,上海試劑三廠產(chǎn)品;堿性紅,湖南湘中化學(xué)試劑供應(yīng)站;N, N二甲基間苯二胺二鹽酸鹽,美國Sigma公司產(chǎn)品。

1.3 染色方法

取GCA和癌旁IM組織切片各2張,分別行愛顯藍(lán)-雪夫試劑染色法(alcianblue-periodic acid Schiff,AB-PAS)、高鐵二胺-愛顯藍(lán)法(high iron diamine-alcianblue,HID-AB)染色。

AB-PAS[4]:取切片常規(guī)脫蠟,梯度乙醇至水;取AB液100μL濕盒內(nèi)滴染20～30m in;自來水洗3～5min后,蒸餾水洗;取5 g/L高碘酸100μL滴染氧化10min;蒸餾水洗3～5min;雪夫試劑染10 min;自來水洗5～10min;梯度乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片。

HID-AB[4]:取切片常規(guī)脫蠟,梯度乙醇至水;室溫下于高鐵二胺溶液中作用24 h;蒸餾水洗;AB液100μL濕盒內(nèi)滴染20～30min;蒸餾水洗;5 g/L中性紅水溶液染1～2min;蒸餾水洗;梯度乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片。

1.4 IM的診斷標(biāo)準(zhǔn) HE染色診斷標(biāo)準(zhǔn)見文獻(xiàn)[4-5]。HID-AB法判斷標(biāo)準(zhǔn)[6-7]:小腸型IM組織化學(xué)染色為藍(lán)色(IM細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)含唾液酸黏蛋白);大腸型IM染色為黑色(細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)含硫化黏蛋白)。

1.5 GCA的分類標(biāo)準(zhǔn) ①AB-PAS[6]:腸型GCA組織化學(xué)染色為藍(lán)色,癌細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)和(或)胞外含酸性黏蛋白;胃型GCA染色為紅色,癌細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)和(或)胞外含中性黏蛋白;混合型GCA染色為紅、藍(lán)相間,癌細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)和(或)胞外含酸性及中性兩種黏蛋白;干細(xì)胞型GCA不顯色,癌細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)和(或)胞外無黏蛋白分泌。②HIDAB[6]:含硫化黏蛋白的 GCA染色為棕黑色,癌細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)和(或)胞外含硫化黏蛋白;不含硫化黏蛋白的GCA染色為藍(lán)色[癌細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)和(或)胞外含唾液酸黏蛋白]或不顯色[癌細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)和(或)胞外無酸性黏蛋白]。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 10.0處理,GCA組織化學(xué)染色分類和GCA癌旁IM檢出率的分析用卡方檢驗,IM和GCA組織中硫化黏蛋白表達(dá)水平的比較用Kappa一致性分析,檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 GCA的組織化學(xué)染色分類 AB-PAS組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,腸型(圖1A)、胃型(圖1B)、混合型(圖1C)和干細(xì)胞型(圖1D)GCA的檢出率分別為37.1%(26/70)、5.7%(4/70)、50.0%(35/70)和7.1%(5/70)。HID-AB組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,含硫化(圖1E)和不含硫化黏蛋白GCA(圖1F)的檢出率分別為24.3%(17/70)和75.7%(53/70)。

圖1 GCA的AB-PAS和H ID-AB組織化學(xué)染色(×200)A:腸型GCA(AB-PAS);B:胃型GCA(AB-PAS);C:混合型GCA(AB-PAS);D:干細(xì)胞型GCA(AB-PAS);E:含硫化黏蛋白的GCA(HID-AB);F:不含硫化黏蛋白的GCA(HID-AB)。

2.2 不同類型GCA癌旁IM的檢出率 AB-PAS結(jié)果顯示,腸型GCA癌旁IM的檢出率57.7%(15/ 26)明顯高于非腸型GCA的檢出率27.3%(12/44) (χ2=6.383,P=0.012)。HID-AB結(jié)果顯示,含硫化黏蛋白的GCA癌旁IM檢出率64.7%(11/17)明顯高于不含硫化黏蛋白GCA的檢出率30.2%(16/ 53)(χ2=6.472,P=0.011)。

2.3 癌旁IM和其相應(yīng)的GCA組織中硫化黏蛋白表達(dá)情況的比較 應(yīng)用HID-AB法對GCA癌旁的IM組織和其相應(yīng)的GCA組織進(jìn)行特殊染色,發(fā)現(xiàn)硫化黏蛋白在癌旁IM(圖2)和其相應(yīng)的GCA組織中無一致性表達(dá)(表1)。

圖2 癌旁IM的HID-AB組織化學(xué)染色(×200)A:小腸型IM;B:大腸型IM。

表1 硫化黏蛋白在GCA及其癌旁IM組織中的表達(dá)

3 討論

在胃癌的研究中,人們根據(jù)黏液組織化學(xué)染色不同,將胃癌分為腸型(含酸性黏液)、胃型(含中性黏液)、混合型(含酸性及中性兩種黏液)及干細(xì)胞型(無黏液分泌),并且認(rèn)為IM與腸型胃癌關(guān)系密切,但并不是所有 IM都與胃癌有關(guān),而是其中的柱狀細(xì)胞分泌硫酸黏液的不完全大腸型IM與腸型胃癌的關(guān)系較密切[7-11],且腸型胃癌可能來源于腸化黏膜[7,9]。

該研究結(jié)果表明,GCA可以依據(jù)其分泌的黏蛋白類型進(jìn)行分類;而且,腸型GCA癌旁IM檢出率明顯高于非腸型GCA,含硫化黏蛋白的GCA癌旁IM檢出率明顯高于不含硫化黏蛋白的GCA。提示腸型GCA,尤其是含硫化黏蛋白的GCA可能起源于IM。

對于含硫化黏蛋白的IM,即大腸型IM,一般認(rèn)為具有以下特點[10]:①分化不成熟,其組織結(jié)構(gòu)及細(xì)胞形態(tài)均存在不同程度的去分化,其本身即可作為賁門黏膜異型增生的一種表現(xiàn)。②基因表達(dá)異常,在黏液組化性質(zhì)方面表現(xiàn)為柱狀黏液細(xì)胞有大量硫化黏蛋白的出現(xiàn);在抗原性質(zhì)方面則表現(xiàn)為多種腫瘤相關(guān)抗原,包括癌基因產(chǎn)物ras、P21等生物學(xué)標(biāo)志物的檢出率增加;在細(xì)胞遺傳特性上表現(xiàn)為DNA含量及非整倍體細(xì)胞檢出率異常增加。以上證據(jù)均提示含硫化黏蛋白的IM比其他類型IM細(xì)胞群更具有與癌細(xì)胞相類似的生物學(xué)性狀。陳陵等[11]曾對該型 IM作了大量研究,初步證實含硫化黏蛋白的IM確實有較高潛在癌變的危險。

作者的研究還證實,GCA癌旁大腸型IM檢出率比較高,但是硫化黏蛋白在癌旁 IM及其相應(yīng)的GCA中的表達(dá)并不具有一致性。其原因可能有以下 3個方面:①基因表達(dá)的不穩(wěn)定性可能是主要原因,它可能隨著環(huán)境的改變而改變,盡管硫化黏蛋白在GCA癌旁IM和GCA中均具有高表達(dá)的傾向,但很不穩(wěn)定。②含硫化黏蛋白的IM雖然具有癌變的傾向,但癌變是一個多基因參與、多階段、進(jìn)行性、演進(jìn)性過程,并不具有一對一的關(guān)系。③研究的樣本量還不充足,有待于加大樣本量,進(jìn)一步研究。

總之,該研究結(jié)果提示 IM可能是河南賁門癌高發(fā)區(qū)腸型及含硫化粘蛋白GCA的癌前病變;GCA與癌旁大腸型 IM的關(guān)系還不能明確,有待于進(jìn)一步探討。

[1]賴少清,王國清.賁門不同位點癌前病變情況調(diào)查[J].癌癥,2001,20(3):317

[2]張軍,劉穎,曹志蓮,等.食管末端及胃-食管連接處的腸化生、異型增生和腫瘤發(fā)病情況[J].中華消化內(nèi)鏡雜志,2002,19(4):214

[3]Sharma P,Weston AP,Morales T,et al.Relative risk of dysplasia forpatientswith intestinalmetaplasia in the distal oesophagus and in the gastric cardia[J].Gut,2000,46 (1):9

[4]Gao SG,Wang LD,Fan ZM,etal.Histochemical studies on intestinalmetaplasia adjacent to gastric cardia adenocarcinoma in subjects at high-incidence area in Henan,north China[J].World JGastroenterol,2005,11(30):4 634

[5]楊桂芳,熊永炎,龔玲玲.NF-κB及靶基因表達(dá)與胃竇腸上皮化生關(guān)系的研究[J].腫瘤防治研究,2004,31(1):19

[6]張亞琳,魏洪臣,田晨光,等.胃粘膜腸化與胃癌關(guān)系的粘液組織化學(xué)研究[J].中國腫瘤臨床,1997,24(11): 838

[7]Craanen ME,Blok P,Dekker W,et al.Subtypes of intestinal metap lasia and Helicobacter pylori[J].Gut,1992,33 (5):597

[8]Filipe MI,Potet F,Bogomoletz WV,et al.Incomp lete sulphomucin-secreting intestinalmetaplasia for gastric cancer. Preliminary data from a prospective study from three centres[J].Gut,1985,26(12):1 319

[9]溫巍,丁廣成,王立東,等.賁門癌癌旁腸上皮化生類型與賁門癌發(fā)生部位關(guān)系[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志, 2009,25(2):140

[10]Silva S,Filipe MI.Intestinalmetaplasia and its variants in the gastric mucosa of Portuguese subjects:a comparative analysis of biopsy and gastrectomy material[J].Hum Pathol,1986,17(10):988

[11]陳陵,陳婷,蔡永國,等.胃黏膜癌變過程中hTERT和相關(guān)基因表達(dá)的變化及其臨床意義[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志,2006,15(5):443