膠體金快速檢測(cè)陰道毛滴蟲的臨床運(yùn)用分析

周青云

陰道毛滴蟲感染導(dǎo)致的陰道炎,是婦科常見病、多發(fā)病。陰道毛滴蟲主要寄生在女性泌尿生殖道，引起滴蟲性陰道炎和尿道炎，是一種全球分布，以性傳播為主的疾病。目前臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)主要采用直接濕片高倍鏡法,但由于受溫度、涂片厚薄及檢驗(yàn)者水平的影響，其陽(yáng)性診斷率較低(約占50%)[1],易發(fā)生漏診和誤診。為快速準(zhǔn)確檢測(cè)陰道毛滴蟲感染，我們分別用膠體金法和培養(yǎng)方法及濕片直接鏡檢法對(duì)陰道分泌物標(biāo)本進(jìn)行對(duì)比檢測(cè)，現(xiàn)介紹如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 381份陰道分泌物標(biāo)本來(lái)源于2008年4月～2009年3月我院婦科門診患者，均為毛滴蟲感染疑似病例，年齡16～45歲，平均28歲?；颊哂邪讕г龆?，呈白色泡沫狀，稀薄有臭味，外陰瘙癢與腰痛，部分患者有尿痛、尿急、尿頻等尿路感染癥狀。

1.2 試劑材料 膠體金法試劑為陰道滴蟲(T.V)檢測(cè)試劑盒(膠體金法)，濟(jì)南杏恩生物科技有限公司提供。培養(yǎng)法所用培養(yǎng)基為大豆蛋白胨液體培養(yǎng)基，嚴(yán)格依照配方說(shuō)明配制[2]。

1.3 膠體金法原理 膠體金法利用雙抗體夾心法檢測(cè)標(biāo)本中是否含有相應(yīng)的待測(cè)抗原。將抗陰道滴蟲的分泌性蛋白純化后包被在膠體金上成為金標(biāo)抗體，檢測(cè)時(shí)，當(dāng)樣品中含有陰道滴蟲的分泌性蛋白時(shí)，在檢測(cè)區(qū)(T區(qū))時(shí)，形成金標(biāo)抗體-抗原-抗體復(fù)合物顯示紅色線條，呈陽(yáng)性反應(yīng)。培養(yǎng)法是依據(jù)陰道毛滴蟲的生物學(xué)特性，給以合適的營(yíng)養(yǎng)條件，利于少量滴蟲大量繁殖提高檢出率。

1.4 測(cè)定方法 (1)膠體金法用消毒棉拭子從陰道后穹隆及陰道壁取分泌物，移入含1mL樣品稀釋液小管中，并且旋轉(zhuǎn)混合約30s～1min，將棉拭子取出丟棄。將試紙條插入小管，在規(guī)定時(shí)間讀取結(jié)果。(2)培養(yǎng)法用消毒棉拭子從陰道后穹隆及陰道壁取分泌物移入液體培養(yǎng)基中，37℃溫箱培養(yǎng)，24～48h后吸取管內(nèi)沉淀物檢查有無(wú)原蟲生長(zhǎng)[2]。(3)濕片直接鏡檢法采用奧林巴斯顯微鏡直接鏡檢，嚴(yán)格按照檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，資料比較應(yīng)用x2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

見表1。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，膠體金法與培養(yǎng)法比較，x2=1.81，P＞0.05，無(wú)顯著性差異；濕片直接鏡檢法與培養(yǎng)法比較，x2=4.82，P＜0.05，有顯著性差異。

表1 381份陰道分泌物標(biāo)本采用三種不同方法檢測(cè)的結(jié)果比較[例(%)]

3 討論

培養(yǎng)法以其高靈敏和高特異被譽(yù)為陰道滴蟲病原學(xué)診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”。實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常采用的培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，有肝-胨-麥芽糖培養(yǎng)基、半胱氨酸-肝-胨-麥芽糖培養(yǎng)基和大豆-肝-胨-麥芽糖培養(yǎng)基等幾種。但操作復(fù)雜費(fèi)時(shí)，可用于疑難病例診斷。

陰道毛滴蟲是一種常見的性傳播疾患病原體，可引起女性陰道炎、尿道炎和男性的尿道炎、前列腺炎等病癥。本病的診斷主要依靠實(shí)驗(yàn)室診斷，傳統(tǒng)的濕片法由于其簡(jiǎn)便價(jià)廉，仍為大多數(shù)醫(yī)院所采用，但其敏感性低。

熒光定量PCR被認(rèn)為是檢測(cè)陰道毛滴蟲較快速、準(zhǔn)確、高效的方法之一。這是一種對(duì)陰道毛滴蟲的DNA進(jìn)行定量測(cè)定的方法，敏感性和特異性分別為90.1%和100%[3]。但設(shè)備要求條件高、價(jià)格昂貴，臨床常規(guī)難以應(yīng)用。

近年來(lái)，新型免疫學(xué)方法的出現(xiàn)為陰道毛滴蟲病的診斷提供了新的發(fā)展途徑。方法類型有酶免疫法(EIA)、直接熒光抗體實(shí)驗(yàn)(DFA)、膠乳凝集試驗(yàn)(LAT)及斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)即膠體金法(DICA)。膠體金法以其簡(jiǎn)便、快速、試劑穩(wěn)定及較高準(zhǔn)確性適合臨床推廣使用。

[1]羅春麗.臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)[M].第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2004:240-241.

[2]仇錦波.寄生蟲學(xué)檢驗(yàn)[M].第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:101-102,165.

[3]Hardick J,Yang S,Lin S.Use of the Roche LightCycler instrument in a real-time PCR for Trichomonas vaginalis in urine samples from females and males[J].J Clin Microbiol,2003,41(12):5619-5622.